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大花红景天的快速繁殖培养基及繁殖方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-09-29 02:16

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及大花红景天的快速繁殖培养基及繁殖方法。

背景技术：

大花红景天rhodiolacrenulata(hk.f.etthoms.)h.ohba为景天科红景天属多年生草本植物，主要分布于西藏、云南西北部、四川西部海拔在2800-5600米的山坡草地、灌丛中、石缝中，其根部为主要药用部分。大花红景天中红景天甙、酪醇、酮等成分是其他品种红景天的5倍，被誉为“雪域人参”。研究表明，大花红景天具有强心、补氧、抗缺血、抗辐射、促进人体新陈代谢，提高人体免疫力等多种功效。

随着科研人员对大花红景天的研究，其药用价值不断被开发，目前已有疗效很好的大花红景天产品上市，其需求量也不断增加，但目前此类产品的原材料基本来源于野生，野生资源不断被开发、挖掘、减少，人工种植大花红景天能够有效解决野生资源减少的问题，并对保护野生资源具有重要意义。

目前大花红景天的人工种植方式，包括愈伤组织培养、种子育苗和根茎繁殖三种(见谭淑琼，西藏大花红景天栽培技术，现代农业科技，2016,23:87-89)，其中，愈伤组织培养方式不受季节限制、繁殖系数高，但可能发生变异，不利于保持亲本优良性状；种子育苗和根茎繁殖方式，虽然遗传稳定性好，但需要大量种子资源或活体材料，难以保证工厂化繁育种苗。因此，需要开发兼顾繁殖效率和遗传稳定性的大花红景天繁殖方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种繁殖效率高、遗传稳定性好、不受季节环境限制的大花红景天快速繁殖培养基及繁殖方法。

本发明提供了一种大花红景天快速繁殖培养基，它包含枝条分化培养基和生根培养基，其中，

所述枝条分化培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.1-1mg/l的6-ba、0.1-0.5mg/l的naa；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.1～0.5mg/l的6-ba、0.5-1.0mg/l的naa、0.5-1g/l的活性炭。

枝条分化培养基：促进枝条分化的培养基。

本发明中，培养基中所述的浓度均为终浓度，例如所述枝条分化培养基中添加浓度为0.1-1mg/l6-ba，即添加的6-ba终浓度为0.1-1mg/l。

其中，还包括幼苗转接培养基，

所述幼苗转接培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.1-1mg/l的6-ba、0.1-0.5mg/l的naa。

其中，所述枝条分化培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l的6-ba、0.2mg/l的naa；

所述幼苗转接培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为1mg/l的6-ba、0.1mg/l的naa。

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭。

其中，所述培养基的ph值为5.8；

所述ms固体培养基的碳源为蔗糖，凝胶剂为琼脂；

优选地，所述蔗糖在ms固体培养基的终浓度为30-40g/l；所述琼脂在ms固体培养基的终浓度为6-7g/l。

其中，所述枝条分化培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l的6-ba、0.2mg/l的naa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述幼苗转接培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为1.0mg/l的6-ba、0.1mg/l的naa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、7g/l的琼脂粉，ph5.8。

本发明还提供了上述培养基在大花红景天快速繁殖中的用途。

本发明还提供了一种大花红景天快速繁殖方法，该方法促进大花红景天枝条分化，然后通过枝条生根生产幼苗，步骤如下：

(1)取大花红景天无菌苗，置于枝条分化培养基中培养，促进幼苗生枝；

(2)将步骤(1)的幼苗枝条剪下，转入生根培养基中培养，获得完整植株；

所述培养基为上述的培养基。

其中，还包括：将步骤(2)中经过剪枝的幼苗置于幼苗转接培养基中培养，再次获得枝条用于生根。

其中，步骤(1)中，所述无菌苗的制备方法如下：

a、取大花红景天种子，用naclo溶液灭菌后，置于接种培养基中培养，所述接种培养基：以ms固体培养基为基本培养基，添加40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

b、幼苗萌发后，转接至分苗培养基中培养，所述分苗培养基：以ms固体培养基为基本培养基，添加30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

其中，所述培养的条件为：温度为20-25℃，光照为16h/d，光照强度为3500-4000lx；

和/或，每个培养阶段的时间为30-60天。

本发明人在大花红景天育苗研究中发现，将大花红景天幼苗的枝条直接扦插，枝条在基质上难以生根，无法进行快繁，只有使用本发明特定的培养基组合和培养方法，才能使得幼苗的枝条大量分化并正常生根，从而获得正常植株。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明利用大花红景天幼苗作为扩繁材料，并结合特定的培养基组合，通过促进无菌苗枝条分化、然后枝条直接生根，以产生更多幼苗，是一种新型生产方式，为大花红景天的幼苗生产提供了新的思路；

(2)本发明方法，繁殖系数高，一株无菌苗可得到高达20株以上的幼苗；而且本发明使用的无菌苗原料，可以是种子直接出苗，或愈伤组织分化产生的无菌苗，来源广泛，不受数量、季节的限制，生产效率高，可实现工厂化育苗；

(3)本发明方法简单可行，技术难点低，重复性好，能够有效避免在幼苗生产过程中因操作失误引起的损失。

本发明以大花红景天无菌苗为材料，利用其枝条进行扩繁，是一种新型、高效的大花红景天幼苗生产方式，本发明可用于大花红景天无菌苗快速生产、工业化生产、优良单株的扩繁等方面，具有较好的应用前景。

本发明主题思路为促进大花红景天无菌苗枝条分化，再通过枝条进行幼苗生产，在不脱离本思路的情况下，本发明可以做多种形式的修改、变更或者替换。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1灭菌后接种的种子

图2培养后的壮苗

图3开始分化出大量枝条的幼苗

图4枝条生根

图5单枝条种苗整株

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的试剂、仪器均为已知产品，通过购买市售产品获得。

naa：萘乙酸，是一种生长素；

6-ba：6-苄氨基嘌呤，是一种细胞分裂素；

ms培养基(murashigeandskoog培养基)，培养基配方如下：

ms培养基是植物组织培养常用的基本培养基，在实际应用中根据不同培养阶段和不同材料来源，通常需要在基本培养基中加入植物激素，例如不同种类和含量的生长素、细胞分裂素等，合适的植物组织培养基组成是植物组织培养成功的基础。

实施例1本发明大花红景天快繁培养基的制备

制备方法如下(以配制1l枝条分化培养基为例)：

用电子称准确称取ms培养基试剂粉4.74g，将其加入超纯水中搅拌，待完全溶解后加入40g蔗糖和6g琼脂粉，充分搅拌使其完全溶解，加入相应浓度的6-ba与naa溶液后定容至1l，最后用1mol/l的hcl或1mol/l的naoh调节ph至5.8；

配制完成后将其转入1l的灭菌瓶中，灭菌瓶不能完全盖紧，防止灭菌时灭菌瓶炸裂，灭菌采用高温高压灭菌锅，灭菌条件：温度为121℃，气压为0.105mpa，灭菌时间为20min；

灭菌完成待培养基温度冷却不烫手后即可在超净工作台的无菌环境中进行培养基分装。如果培养基中加有活性炭，应等到培养基温度冷却至40℃-50℃再进行分装。

实施例2本发明大花红景天快繁方法

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基和幼苗转接培养基均为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l6-ba、0.1mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

本发明使用的大花红景天无菌苗可以通过种子出苗或愈伤组织分化获得，可按照文献报道方法或自制得到，本发明中的自制方法如下：

(1)种子灭菌

将大花红景天种子在75％乙醇溶液中震荡浸泡30s，用0.5％naclo溶液浸泡震荡消毒20分钟，再用无菌水清洗3-5次，完全清洗种子表面的次氯酸钠后接种于培养皿中(见图1)。

其中，种子灭菌后接种的培养基：以ms固体培养基为基本培养基，添加40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

(2)幼苗分苗

接种25天后对萌发的幼苗进行分苗，用镊子将其分别转接至分苗培养基中，密度在株/1cm2为宜。

其中，分苗培养基：以ms固体培养基为基本培养基，添加30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

分苗培养60天后的无菌苗，植株叶片在6-8片，尚未有枝条分化，待用(见图2)。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗再次转接至枝条分化培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株7.3个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化15.6个枝条，总计22.9个枝条。

开始分化出大量枝条的幼苗见图3。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到90％。

大花红景天枝条生根见图4，单枝条种苗整株见图5。

3、试验结果

本配方得到大花红景天幼苗数20.6苗，本发明方法能够得到大花红景天快繁幼苗。

实施例3本发明大花红景天快繁方法

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基和幼苗转接培养基均为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l6-ba、0.1mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、7g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

同实施例1。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗再次转接至枝条分化培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株6.9个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化14.7个枝条，总计21.6个枝条。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到97％。

3、试验结果

本配方得到大花红景天幼苗数21苗，本发明方法能够得到大花红景天快繁幼苗。

实施例4本发明大花红景天快繁方法

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基和幼苗转接培养基均为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l6-ba、0.2mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、1.0mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

同实施例1。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗再次转接至枝条分化培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株9.1个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化13.4个枝条，总计22.5个枝条。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到74％。

3、试验结果

本配方得到大花红景天幼苗数16.7苗，本发明方法能够得到大花红景天快繁幼苗。

实施例5本发明大花红景天快繁方法

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基和幼苗转接培养基均为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为1.0mg/l6-ba、0.1mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

同实施例1。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗再次转接至枝条分化培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株8.4个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化17.2个枝条，总计25.6个枝条。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到73％。

3、试验结果

本配方得到大花红景天幼苗数18.7苗，本发明方法能够得到大花红景天快繁幼苗。

实施例6本发明大花红景天快繁方法

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基和幼苗转接培养基均为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为1.0mg/l6-ba、0.5mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l的6-ba、1.0mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

同实施例1。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗再次转接至枝条分化培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株8.0个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化16.6个枝条，总计24.6个枝条。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到69％。

3、试验结果

本配方得到大花红景天幼苗数17.0苗，本发明方法能够得到大花红景天快繁幼苗。

实施例7本发明大花红景天快繁方法最优组合验证

1、准备快繁用培养基

所述枝条分化培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.5mg/l6-ba、0.2mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述幼苗转接培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为1.0mg/l6-ba、0.1mg/lnaa、40g/l的蔗糖、6g/l的琼脂粉，ph5.8；

所述生根培养基为：以ms固体培养基为基本培养基，添加浓度为0.2mg/l的6-ba、0.5mg/l的naa、1g/l的活性炭、30g/l的蔗糖、7g/l的琼脂粉，ph5.8。

2、准备无菌苗材料

同实施例1。

3、快繁方法

(1)枝条分化与幼苗转接

将无菌苗转接至枝条分化培养基中，密度在株/2cm2为宜，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；培养30天后将幼苗转接至幼苗转接培养基中，更换培养基，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计枝条数平均能够达到每株8.8个。枝条剪切后无菌苗可进行第2次枝条分化，培养条件与培养基同上，30天后枝条可再次分化17.3个枝条，总计26.1个枝条。

(2)诱导生根

将大花红景天幼苗的枝条从底部剪切，将其转接至生根培养基中，每日光照培养16小时，暗培养8小时，光照强度3500-4000lx，温度20-25℃；30天后统计其生根率达到95％。

3、试验结果

本发明中最佳组合能够有效分化枝条26.1个，生根率达到了95％，1株无菌苗能够得到24.8苗。本发明能够高效快速的得到大花红景天幼苗，是一种快速扩繁大花红景天的有效方法。

对比例枝条扦插试验

发明人曾尝试利用大花红景天枝条直接在基质上扦插，结果发现枝条无法在基质上生根存活，难以实现快繁。具体过程如下：

试验地点：育苗室

环境控制：温度为20-25℃，光照为13h/d，光照强度为3500-4000lx。

试验材料及标准：

(1)育苗室幼苗枝条：选取枝条长度在10cm以上，枝条粗壮、叶片大小分布均匀；

(2)大田苗枝条：选取6月中旬无病虫害植株，枝条长度在10cm以上，叶片大小分布均匀的枝条。

试验方法：