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一种具有抗老化作用的山茶花蛋白水解物及其制备方法与应用与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-07-12 13:52

本发明涉及生物，尤其涉及一种具有抗老化作用的山茶花蛋白水解物及其制备方法与应用。

背景技术：

1、山茶花(camellia japonica linn.)为常绿阔叶树种山茶科(theaceae)山茶属(camellia l.)的一种灌木或小乔木植物，属热带及亚热带气候树种。山茶花喜温暖湿润，最适生长温度为18～24℃，60％～80％为最宜相对湿度，多生息于海拔300-1100米山丘地域。山茶花原产于中国，我国山茶花绝大多数分布在浙江、江西、广西、云南、贵州、湖南及广东等长江以南地区。目前，山茶花引种栽培已遍及亚洲、欧洲、北美洲、大洋洲、非洲及南美洲等地域。在世界广泛栽培的山茶花原种主要有华东山茶、滇山茶及茶梅三个品种，加上中国特有原种金花茶，形成山茶花四大体系。山茶树姿优美、四季常青、花色艳丽、花型丰富、花期长，且园艺栽培历史悠久，是世界著名观赏花木之一，具有较高的观赏价值。此外，山茶花也具有很高的药用价值，如山茶花作为蒙药被收载在《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》，临床用于清热消痛。近年来的研究证明山茶花富含黄酮、多酚、三萜、皂苷、鞣质及有机酸等化学成分，也富含维生素、蛋白质、脂肪、氨基酸及各种矿物质等营养物质。生物活性研究显示山茶花具有抑制血栓形成、缓解心肌缺血损伤、改善脑缺血损伤、保护胃黏膜的作用。因此，山茶花在化学及生物活性等领域的研究越来越受到人们的关注，在食品及医药等领域显示着广阔的应用前景。

2、尽管山茶花提取物已被收录于2021版《已使用化妆品原料名称目录》中，并用于产品的研发。但是，由于蛋白质大分子的特性，当前的香精提取工艺或提取物制备工艺并无法将其有效溶出，山茶花提取后的残渣中仍保留大量的蛋白类物质，没有得到充分利用。因此，亟需开发一种处理工艺能够将山茶花或山茶花残渣中的蛋白质水解为小分子肽，以加强山茶花的应用范围。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有抗老化作用的山茶花蛋白水解物及其制备方法与应用。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

3、第一方面，本发明提供了一种具有抗老化作用的山茶花蛋白水解物，包含氨基酸序列为leu-pro-phe、leu-leu-leu-leu-gly-his和ala-pro中至少一种的特征肽。

4、本发明通过细胞实验发现山茶花肽、含有山茶花肽的山茶花蛋白水解物均具有降低细胞sa-β-gal阳性率的功效，表明其均具有抗老化的活性，可延缓皮肤细胞与皮肤组织的衰老，且具备安全、可长期使用、无副作用等优势，可应用于抗皮肤老化及其相关症状的产品中。

5、作为本发明所述山茶花蛋白水解物的优选实施方式，所述山茶花蛋白水解物中山茶花肽的特征肽leu-pro-phe、特征肽leu-leu-leu-leu-gly-his和特征肽ala-pro的质量比为leu-pro-phe：leu-leu-leu-leu-gly-his：ala-pro＝(93.5-94)：(0.4-0.5)：(5.4-6)。

6、第二方面，本发明提供了上述山茶花蛋白水解物的制备方法，包括以下步骤：

7、(1)将山茶花粉与碱溶液混合，浸提2次，合并浸提液，离心得到上清液；

8、(2)将步骤(1)所得上清液与酸溶液混合，静置，离心得到沉淀；

9、(3)将步骤(2)所得沉淀溶于水中，调节ph为6.0-8.0，加入蛋白酶，45-55℃水浴4-8h，离心，得到酶解液；

10、(4)将步骤(3)所得酶解液进行超滤，干燥后得到山茶花蛋白水解物，所述山茶花蛋白水解物含有山茶花肽。

11、本发明通过对所制备得到的山茶花蛋白水解物进行氨基酸分析发现，山茶花蛋白水解物中的主要氨基酸为酸性氨基酸，因此采用碱溶酸沉法从山茶花中提取得到山茶花蛋白，并对其进行蛋白酶解、超滤及干燥处理，制备得到含有山茶花肽的山茶花蛋白水解物，经体内和体外实验验证山茶花蛋白水解物具有优异的抗衰老效果。

12、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，包括如下(ⅰ)～(ⅱ)中至少一种：

13、(ⅰ)在步骤(1)中，所述碱溶液为0.3m的naoh溶液，所述山茶花粉与碱溶液的比例为山茶花粉：碱溶液＝1g：20ml；

14、(ⅱ)在步骤(1)中，所述浸提为于55℃下水浴浸提1h。

15、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，包括如下(ⅲ)～(ⅳ)中的至少一种：

16、(ⅲ)在步骤(2)中，所述酸溶液为0.5m的hcl溶液；

17、(ⅳ)在步骤(2)中，所述上清液与酸溶液混合后，调节ph＝3.0。

18、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，包括如下(ⅴ)～(ⅵ)中的至少一种：

19、(ⅴ)在步骤(3)中，所述蛋白酶的种类包括木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶中的至少一种；

20、(ⅵ)在步骤(3)中，所述蛋白酶的添加量为6000u/g。

21、本发明所述制备方法的酶解过程所采用的蛋白酶可为多种蛋白酶组合实现，如木瓜蛋白酶与胰蛋白酶组合、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶组合、木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶组合等。

22、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，在步骤(4)中，所述超滤为将步骤(3)所得酶解液置于超滤膜中进行超滤分离，所述超滤膜的截流分子量为2500-3000da。

23、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，在步骤(1)中，所述山茶花粉的制作方法包括以下方法中的任意一种：

24、方法一：将山茶花自然风干，粉碎后过40目筛，得到山茶花粉；

25、方法二：将山茶花置于100℃杀青15min，55℃烘干至水分低于13％，粉碎后过40目筛，得到山茶花粉。

26、作为本发明所述制备方法的优选实施方式，在步骤(1)中，所述山茶花粉的原料包括山茶花全花、山茶花用于香精、精油或提取物制备产生的残渣。本发明能够对山茶花或山茶花残渣中的蛋白质水解，能够对山茶花残渣再利用，进一步提高山茶花的应用范围，提高山茶花的经济效益。

27、第三方面，本发明提供了一种山茶花肽，所述山茶花肽包含氨基酸序列为leu-pro-phe、leu-leu-leu-leu-gly-his和ala-pro中至少一种的特征肽。

28、本发明通过对山茶花进行处理得到山茶花肽，通过hplc-ms/ms鉴定山茶花肽中含有氨基酸序列为leu-pro-phe、leu-leu-leu-leu-gly-his和ala-pro的特征肽。近年来的研究证明，由氨基酸组成的小分子活性肽可被机体直接吸收及利用，不仅能提供人体生长发育所需的营养物质且同时显示有效的生理功能。

29、作为本发明所述山茶花肽的优选实施方式，所述山茶花肽中特征肽的氨基酸序列为leu-pro-phe、leu-leu-leu-leu-gly-his和ala-pro。

30、第四方面，本发明提供了上述山茶花肽或具有抗老化作用的山茶花蛋白水解物在制备抗衰老制品中的应用。

31、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述制品包括药品、食品、保健品、化妆品和生物制品。

32、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述山茶花蛋白水解物的用量为生物体每1kg体重施用250-1000mg。

33、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述抗衰老制品为抗皮肤衰老制品。

34、作为本发明所述应的优选实施方式，所述抗皮肤衰老包括年龄增加或基因改变导致的内在衰老和外界环境导致的早衰，所述外界刺激包括但不限于，阳光照射、污染物刺激、药物副作用、代谢性疾病、氧化剂刺激、情志因素、营养不良以及吸烟、饮酒、缺乏运动、熬夜等不良生活习惯。

35、第四方面，本发明提供了一种抗衰老化妆品，包括上述山茶花蛋白水解物或山茶花肽。

36、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

37、1、本发明通过对山茶花进行处理得到山茶花肽，通过hplc-ms/ms鉴定山茶花肽中含有氨基酸序列为leu-pro-phe、leu-leu-leu-leu-gly-his和ala-pro的特征肽。

38、2、本发明通过细胞实验发现山茶花肽、含有山茶花肽的山茶花蛋白水解物均具有降低细胞sa-β-gal阳性率的功效，表明其均具有抗老化的活性，可延缓皮肤细胞与皮肤组织的衰老，且具备安全、可长期使用、无副作用等优势，可应用于抗皮肤老化及其相关症状的产品中。

39、3、本发明通过对所制备得到的山茶花蛋白水解物进行氨基酸分析发现，山茶花蛋白水解物中的主要氨基酸为酸性氨基酸，因此采用碱溶酸沉法从山茶花中提取得到山茶花蛋白，并对其进行蛋白酶解、超滤及干燥处理，制备得到含有山茶花肽的山茶花蛋白水解物，经体内和体外实验验证山茶花蛋白水解物具有优异的抗衰老效果。