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一种山楂果胶及其制备方法与应用与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-05-20 12:01

一种山楂果胶及其制备方法与应用与流程

本发明属于医药领域，具体涉及一种山楂果胶及其制备方法与应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,ibd)是一组病因不明的慢性肠道疾病，其中包括溃疡性结肠炎(ulcerationcolitis,uc)和克罗恩病(crohn’sdisease,cd)。随着近年来人们生活方式的改变以及生活水平的提高，其发病率呈现逐年上升的趋势，已成为我国慢性腹泻、便血的主要原因。目前，研究推测ibd发病的内因在于肠道屏障的破损以及肠道免疫系统的紊乱。屏障功能破损后诱导共生细菌和微生物产物从肠腔进入肠壁，从而导致免疫细胞活化和细胞因子产生。同时，慢性炎症也会导致肠道组织和屏障的损伤。此外，遗传因素，环境因素以及宿主和微生物的相互作用等外界因素在ibd发生发展中起到了很重要的作用。临床上治疗ibd的药物很多，大体分为氨基水杨酸类、抗生素、糖皮质激素类、免疫调节剂、细胞因子封闭剂、生长因子、重组人细胞因子等，但上述治疗药物和手段存在着长期应用副作用大，并发症增多、疗效不稳定、对用药剂量要求严格、价格昂贵等缺陷。饮食是ibd产生的一个重要因素，合理的饮食和营养管理可以降低肠炎等相关疾病的发病率。因此，健康饮食是缓解炎症性肠病的一种安全有效的选择。目前，越来越多的食源性功能成分已被发掘用于抑制肠道炎症，如从中药材、果蔬、菌菇类等中提取的多糖已受到广泛关注。这些糖类抗肠炎效果好且副作用较小，具有潜在的临床应用价值。以上多糖的常见抗肠炎作用机制包括直接作用或间接作用，如改善肠道屏障功能、降低炎症水平和重塑肠道菌群等。探索更多用于抑制肠炎的食源性活性成分并深入研究作用机制对人类健康具有重要意义。

3、山楂为蔷薇科山楂属植物，药食同源，营养丰富且含有山楂果胶等功能因子。山楂果胶目前已知的功能有抗氧化、抗炎、抗癌和抗疲劳；调节胆固醇、血糖和脂质代谢；改善便秘，提高免疫等作用。目前，国内市场上的山楂产品仍然以食品类为主，如果丹皮、山楂糕为代表的传统山楂蜜饯类食品，尚无以山楂为原料进一步加工制备活性成分并在制备抗肠炎产品中的应用。

4、山楂中的生物活性成分提取技术研究是山楂应用研究的重点。对于山楂果胶提取，目前文献和专利报道较多的方法有热水提取法和超声提取法。此外，酶提取法、酸提取法、微波提取法等方法也有报道，还有将几种提取方法协同，如酸和高压协同、酶法和超声协同等。目前制备山楂果胶存在设备要求较高或能源试剂消耗太大、提取率低、产物品质不佳等问题。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种山楂果胶及其制备方法与应用。本发明利用复合酶酶法协同益生菌发酵法，可以实现山楂果胶的高效制备与有效分离，且协同法制备的山楂果胶在应用时具有更好的效果。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、第一方面，本发明提供了一种山楂果胶的制备方法，所述山楂果胶是通过酶法协同发酵法制备得到的，包括如下步骤：

4、在山楂鲜果匀浆中加入复合酶酶解、加入益生菌发酵、醇沉、分离纯化，干燥即得。

5、优选地，所述益生菌为乳杆菌和双歧杆菌。所述乳杆菌可为罗伊氏乳杆菌cicc-6132、干酪乳杆菌nrrl b-1922、鼠李糖乳杆菌as 1.2466、嗜酸乳杆菌nrrl b-4495、短乳杆菌nrrl b-4527、莱氏曼氏乳杆菌atcc 7830和保加利亚乳杆菌atcc 11842中的一种或多种；所述双歧杆菌可为长双歧杆菌nrrl b-41409、短双歧杆菌nrrl b-41408、青春双歧杆菌atcc 15703、两歧双歧杆菌atcc29521和乳双歧杆菌hn019中的一种或多种。

6、在一个或多个实施例中，所述山楂鲜果按照如下步骤：挑选无发霉以及虫变的山楂，用清水洗涤去除表面污垢，沥干水后自然晾干。

7、进一步地，所述山楂鲜果匀浆为将山楂鲜果与水混合，破壁处理即得。

8、进一步地，所述山楂鲜果与水的固液比为1:(2～10)，以g/ml计；优选为1:3。

9、在一个或多个实施例中，加入复合酶前要先进行调ph处理，具体为使用柠檬酸调节ph至5.6～6.0。

10、在一个或多个实施例中，所述复合酶选自果胶酶、蛋白酶、木聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、ɑ-淀粉酶和葡萄糖氧化酶中的至少两种的复合；优选地，所述复合酶可为果胶酶和纤维素酶复合，果胶酶和纤维素酶的酶活比可为(1:10)～(10:1)，优选为1:1。

11、进一步地，加入复合酶的量为50u/g山楂鲜果～1000u/g山楂鲜果，优选为300u/g山楂鲜果。

12、进一步地，所述酶提取ph和温度根据所用酶的最适ph和温度而定。所述酶提取的温度和时间分别可为40～60℃，0.5～5h；优选为50℃下酶提取2h。

13、进一步地，酶提取完成后，迅速升温至90～110℃，灭酶5～15min；优选为酶提取完成后迅速升温至100℃，灭酶10min。

14、进一步地，所述乳杆菌和双歧杆菌的接种总量为所述山楂鲜果重量的0.2％～5.0％，优选为1～2％。

15、进一步地，所述乳杆菌和双歧杆菌协同，乳杆菌和双歧杆菌质量比为(1:10)～(10:1)，优选为(2:3)～(3:2)。

16、在一个或多个实施例中，所述发酵的温度和时间分别为30～45℃，12～60h，优选为35～40℃下发酵24～36h。

17、在一个或多个实施例中，所述发酵结束后，离心去沉淀取上清液。所述离心去沉淀为5000～7000rpm下离心10～20min。

18、在一个或多个实施例中，所述醇沉为，将发酵后所得的上清液进行浓缩去除水分，在浓缩液中加入醇，低温下醇沉、离心，取沉淀。

19、进一步地，所述醇为乙醇；所述浓缩液与所述醇的质量比为1:(2～6)；优选为1:(2～3)。

20、进一步地，所述醇沉的温度为4～25℃，时间为6～24h，优选为4～10℃，10～14h。

21、进一步地，所述离心为，4000～6000rpm/min离心5～15min。

22、在一个或多个实施例中，所述纯化为，利用色谱柱分离、洗脱、浓缩后，取上清经冷冻干燥制成糖粉，即得山楂果胶。

23、进一步地，所述色谱柱为deae-sephadexa-25葡聚糖凝胶层析色谱柱。

24、进一步地，所述洗脱为先用蒸馏水洗脱，再用0.2～0.5mol/lnh4hco3洗脱。

25、第二方面，本发明提供了一种上述方法制备得到的山楂果胶。

26、第三方面，本发明提供了上述山楂果胶在以下至少一方面中的应用：

27、1)制备预防和/或治疗肠炎产品中的应用；

28、2)制备改善肠道组织形态产品中的应用；

29、3)制备改善肠道屏障损伤产品中的应用；

30、4)制备增加菌群物种组成产品中的应用；

31、5)制备抑制致病菌增殖产品中的应用；

32、6)制备调节菌群代谢通路产品中的应用。

33、在一个或多个实施例中，所述肠炎为结肠炎或直肠炎。

34、在一个或多个实施例中，所述肠道组织为结肠、盲肠或小肠，具体可为小鼠结肠组织。

35、在一个或多个实施例中，所述改善肠道屏障损伤为增加肠炎或肠炎肠道紧密连接蛋白的表达。所述紧密连接蛋白具体可为膜周蛋白家族蛋白(zo)、闭锁蛋白(occludin)等。

36、在一个或多个实施例中，所述增加菌群物种组成为增加肠炎或肠炎肠道菌群物种数量。

37、在一个或多个实施例中，所述抑制致病菌增殖为抑制肠炎或肠炎致病菌增殖，或抑制致病菌体外增殖。

38、优选的，所述致病菌包括mucispirillum菌属、脱硫弧菌属(desulfovibrio)、普雷沃菌属(prevotella)和嗜胆杆菌属(bilophila)等。

39、在一个或多个实施例中，所述调节菌群代谢通路为调节肠炎或肠炎肠道菌群代谢通路。所述代谢通路具体可为京都基因与基因组百科全书(kegg)代谢通路和代谢途径数据库(metacyc)代谢通路。

40、在一些实施例中，所述产品为药物、保健品、食品(如功能食品)或制剂。所述山楂果胶在作为功能食品和保健品使用时，可以是单独使用，也可以是与其他成分混合使用。

41、在临床应用时，作为食品组分应用于特医食品或保健品，起到预防和/或治疗肠炎、调节菌群代谢通路等作用。也可以以常规的制剂工艺，单独使用或者与其他药物配合制成在临床上可以使用的不同剂型的药物，如可加入赋形剂或矫味剂和防腐剂制成预防和/或治疗肠炎胶囊或者预防和/或治疗肠炎口服液。

42、在一些实施例中，所述药物的剂型包括胶囊、口服液、注射液、片剂、粉剂或颗粒剂。

43、第四方面，本发明提供了一种利用上述山楂果胶在以下至少一方面中的治疗方法。

44、1)利用山楂果胶预防和/或治疗肠炎的方法；

45、2)利用山楂果胶改善肠道组织形态的方法；

46、3)利用山楂果胶制备改善肠道屏障损伤的方法；

47、4)利用山楂果胶制备增加菌群物种组成的方法；

48、5)利用山楂果胶制备抑制致病菌增殖的方法；

49、6)利用山楂果胶制备调节菌群代谢通路的方法。

50、本发明的有益效果为：

51、(1)本发明采用复合酶酶解协同益生菌(乳杆菌和双歧杆菌)发酵制备了山楂果胶，实现了山楂果胶的高效制备与有效分离，山楂果胶得率为6.8％，工艺简单，且产物纯度高，生产周期短、能耗低，适用于工业化生产。

52、(2)本发明利用复合酶酶解和益生菌发酵制备的山楂果胶，在预防和/或治疗肠炎中，复合酶和益生菌起到了协同的作用，能显著起到预防和/或治疗肠炎的效果，显著增加结肠炎小鼠结肠绒毛长度和肌层厚度，促进膜周蛋白家族蛋白1(zo-1)和闭锁蛋白(occludin)的蛋白表达，增加盲肠内容物菌群的物种数量，抑制盲肠内容物中mucispirillum菌属、脱硫弧菌属(desulfovibrio)、普雷沃菌属(prevotella)和嗜胆杆菌属(bilophila)菌群丰度，调节盲肠内容物菌群的kegg和metacyc通路中相关代谢水平。

53、(3)本发明利用复合酶协同益生菌制备的山楂果胶显著缓解了葡聚糖硫酸钠(dss)诱导的结肠炎模型小鼠结肠表观生理指标以及肠道屏障损伤，增加菌群物种数量，抑制致病菌增殖，调节菌群代谢通路。本发明为治疗或者预防肠炎提供了新的选择。