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一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物、试剂盒及检测方法技术

来源：花匠小妙招时间：2025-01-05 14:53

本发明专利技术公开了一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物、试剂盒及检测方法，属于生物安全技术领域；所述的RPA引物为如下四组：用于检测南方根结线虫的RPA引物对、用于检测爪哇根结线虫的RPA引物对、用于检测花生根结线虫的RPA引物对、用于检测象耳豆根结线虫的RPA引物对。本发明专利技术还提供含有所述的RPA引物的试剂盒。本发明专利技术进一步提供基于所述的RPA引物建立的检测方法，以样品中提取的DNA为模板进行RPA扩增反应；本发明专利技术首次将RPA技术应用到四种常见根结线虫的分子检测，其兼具特异性强、灵敏度高、检测效率高、对仪器设备要求较低的特点，对根结线虫病的现场检测、早期诊断和指导科学施药具有重要意义。

A RPA primer, kit and detection method for detecting four common root knot nematodes

The invention discloses a RAP primer, a kit and a detection method for detecting four common root-knot nematodes, belonging to the field of biosafety technology; the RPA primers are as follows: RAP primer pairs for detecting Southern Root-knot nematode, RAP primer pairs for detecting Java root-knot nematode, and for detecting peanut root-knot nematode. The RPA primer pairs were used to detect RPA primers for the root knot nematode. The invention also provides a kit containing the RPA primers. The invention further provides a detection method based on the RPA primer, which takes the DNA extracted from the sample as the template for RPA amplification reaction; the RPA technique is applied for the first time to the molecular detection of four common root-knot nematodes, which has the characteristics of strong specificity, high sensitivity, high detection efficiency and low requirements for instrumentation and equipment. It is of great significance for field detection, early diagnosis and guidance of scientific application of root knot nematode disease.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物、试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物安全
，具体地说，涉及一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
根结线虫(Meloidogynespp.)是一类严重危害农业生产的植物线虫，能寄生蔬菜、果树、花卉和杂草等几乎所有维管植物，每年在世界范围内造成的农业损失高达百亿美元。目前，已报到的根结线虫已超过100个种，其中，危害较为严重的主要为南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)、北方根结线虫(M.hapla)和象耳豆根结线虫(M.enterolobii)。近年来，随着我国种植结构的调整和设施蔬菜种植规模的扩大，特别是蔬菜大棚连作、四季重茬现象严重，导致根结线虫危害日趋严重。由于高毒化学农药的禁用以及抗病品种单基因抗性易丧失等问题的出现，使根结线虫的防治面临重大挑战。因此，快速准确鉴定根结线虫的种类对根结线虫病的测报、选择积极的防治策略提供有效手段。根结线虫种类鉴定常用手段主要包括传统的形态学鉴定、基于蛋白的同工酶鉴定技术和基于DNA的分子检测技术。形态学鉴定主要以雌虫会阴花纹、二龄幼虫头部和尾部作为重要的分类形状，该方法耗时长、需要较强的专业技能，难以推广使用。同工酶鉴定技术通过酯酶和苹果酸脱氢酶的酶谱表型来区分根结线虫不同种类，该方法只适用于鉴定雌虫，不使用于二龄幼虫和其它龄期根结线虫的鉴定，此外，该技术操作复杂、耗时长的不足也极大限制其应用。基于DNA的分子检测技术是根结线虫最常用的检测手段，主要包括随机扩增...

【技术保护点】
1.一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物，其特征在于：所述的RPA引物为如下四组所示，用于检测南方根结线虫的RPA引物对：(A)SEQ ID No：1和SEQ ID No：2；用于检测爪哇根结线虫的RPA引物对：(B)SEQ ID No：3和SEQ ID No：4；用于检测花生根结线虫的RPA引物对：(C)SEQ ID No：5和SEQ ID No：6；用于检测象耳豆根结线虫的RPA引物对：(D)SEQ ID No：7和SEQ ID No：8。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测四种常见根结线虫的RPA引物，其特征在于：所述的RPA引物为如下四组所示，用于检测南方根结线虫的RPA引物对：(A)SEQIDNo：1和SEQIDNo：2；用于检测爪哇根结线虫的RPA引物对：(B)SEQIDNo：3和SEQIDNo：4；用于检测花生根结线虫的RPA引物对：(C)SEQIDNo：5和SEQIDNo：6；用于检测象耳豆根结线虫的RPA引物对：(D)SEQIDNo：7和SEQIDNo：8。2.根据权利要求1所述的用于检测四种常见根结线虫的RPA引物，其特征在于：A组中SEQIDNo：1和SEQIDNo：2组成的引物对所获得的电泳条带如图1所示。3.根据权利要求1所述的用于检测四种常见根结线虫的RPA引物，其特征在于：B组中SEQIDNo：3和SEQIDNo：4组成的引物对所获得的电泳条带如图1所示。4.根据权利要求1所述的用于检测四种常见根结线虫的RPA引物，其特征在于：C组中SEQIDNo：5和SEQIDNo：6组成的引物对所获得的电泳条带如图1所示。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠玉亮，操海群，潘月敏，林宇，吴慧平，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34