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大花酢浆草植物的组织培养相关技术研究.ppt

来源：花匠小妙招时间：2025-08-30 21:10

目录;一、实验目的;二、实验条件;三、结果意义;四、形态特征;五、生理习性;六、技术路线 ;大花酢浆草的鳞茎;大花酢浆草的鳞茎;七、实验计划;八、实验步骤;2.大花酢浆草组织培养的研究;MS培养基母液配制方法;2.2无菌操作和培养外植体的采样与消毒: 分别去大花酢浆草的叶片，叶柄和鳞茎，用自来水冲洗干净后（为防止褐化，应多冲一段时间）用滤纸吸干表面的水分，放入烧杯中。用７０％的酒精溶液进行灭菌处理，浸泡３０秒后取出，再加入次氯酸钠进行深度灭菌，大约３－５分钟取出，时间不宜过长，否则植物细胞将会被杀死，影响接种。 2.3接种 2.3.1无菌接种的设备与器材超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯及双目实体解剖镜。 2.3.2接种前的准备工作 ;2.3.3接种过程：（1）用镊子将植物材料夹到已经过灭菌、盛有滤纸的培养皿中，在超净工作台上将外植体切成3-5cm的小段；在双筒解剖镜下剖离的茎尖分生组织大小约为0.2-0.3mm，经过热处理的材料可带2-4个叶原基，且生长点长约0.5mm。（2）将培养瓶倾斜拿住。打开瓶塞前，先在酒精灯火焰上方烤一下瓶口，然后打开瓶塞，并且尽快将外植体接种到培养基上。塞住瓶塞以前，再在火焰上方烤一下。应注意材料一定要嵌入培养基，而不要只是放在培养面上。以便植物吸收营养（3）每切一次材料，解剖刀、镊子等都要放火酒精内浸泡，并且灼烧灭菌。 ;2.4培养; 2.4.2初代培养（诱导外植体生长与分化）培养基由于植物种类的不同而不同，本实验是在MS基本培养基中加入适量的植物生长调节剂及其它成分,首先在25℃下进行暗培养，待长出愈伤组织后转入光培养。此阶段主要诱导芽体解除休眠，恢复生长。　　　;2.4.3继代培养（促进中间繁殖体的增殖）　也称增值培养。将见光变绿的芽体组织从诱导培养基转接到芽丛培养基上，在每天光照12-16小时、光照强度2000lx条件下培养，不久即产生绿色丛生芽。将芽丛切割分离，进行继代培养，扩大繁殖，为了防止变异或者突变，通常只继代培养10-12次。根据需要，一部分进行生根培养，一部分仍要继代培养，陆续供用。 2.4.4.根培养（壮苗与生根）通常为1/2MS培养基加入适量的植物生长调节剂。切取增殖培养瓶中的无根苗，接种到生根培养基上进行诱根培养。有些易生根的植物在继代培养中通常会产生不定根，可以直接将生根苗移出进行驯化培养。或者将末生根的试管苗长到3-4cm长时切下来，直接栽到蛭石为基质苗床中进行瓶外生根，效果也非常好，降低成本　　　;　　　发根的组培苗或者称试管苗从培养瓶中移出，在温室中栽培，至苗长大发生5-6片叶的植株为止的过程为驯化培养阶段，组培苗移出前要加强培养室的光照强度和延长光照时间，进行光照锻炼。一般进行7-10天。再打开瓶盖，让试管苗暴露在空气中锻炼1-2天，以适应外界环境条件。移栽基质最好用透气性强的蛭石、珍珠岩与泥炭。;九、名称溯源;1．缺素症：　　　当我们所用的ＭＳ培养基中的营养物质搭配比例不适宜大花酢浆草生长时，大花酢浆草会出现一些相应的缺素症。此时我们需要根据植株生长的实际状况，判断植物所缺元素的种类及大略的缺乏量，并及时更换培养基。　;2.组织培养中的三大难题;2.2褐化;2.3玻璃化;（4）培养基中ＢＡ是导致试管苗玻璃化的一个重要原因，选择搭配合适的激素,适当降低培养基中ＢＡ的浓度均可减轻玻璃苗的出现。（5）控制温度通过培养条件(温度和光照)减少玻璃苗的发生。控制温度,避免过高的培养温度,进行变温处理,适当低温处理可消除玻璃化，提高光照强度,适当延长光照时间,充分利用自然光照也可以减低玻璃苗的发生频率。（6）另外,在培养基中减少或除去ＮＨ4ＮＯ3，附加活性炭、青霉素、聚乙烯醇(ＰＶＡ)、Ｃａ、赤霉素 (ＧＡ)及多效唑(ＰＰ333)等,减少继代培养的次数等措施均可降低观赏植物组培过程中玻璃苗的发生