基于CRISPR/Cas9的拟南芥CKX3基因编辑载体构建及转化研究

摘要：

细胞分裂素（cytokinin，CK）是参与植物生长发育过程中的关键激素，在植物生长、发育过程起着非常重要作用。细胞分裂素氧化酶/脱氢酶（cytokinin oxidase/dehydrogenase，CKX）是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶，作为细胞分裂素信号中降解分支的关键酶，对于维持植物体内的细胞分裂素平衡有着重要作用，有效的控制了植物内源细胞分裂素的水平。选取拟南芥CKX3为目标基因，通过含有拟南芥种皮重组启动子与荧光筛选标记基因mCherry的CRISPR/Cas9载体，来进行高效的拟南芥CKX3基因编辑载体构建并转化拟南芥。利用倒置荧光显微镜筛选具有红色荧光的T0代种子并种植培养获得T1代植株。提取T1代植株基因组进行PCR鉴定和测序分析，鉴定纯合突变后代的性状表型及激素测定。结果表明，本实验成功构建了编辑载体pHEE401E-mCherry-CKX3，拟南芥转化后代中目标基因成功被高效编辑，CKX3的纯合突变植株表型与野生型差异明显，内源激素含量差异达到显著水平。为研究CKX基因功能奠定了基础。

关键词: 细胞分裂素, 氧化酶, 脱氢酶, 基因编辑, mCherry, CRISPR/Cas9

Key words: cytokinin, oxidase, dehydrogenase, gene editing, mCherry, CRISPR/Cas9

中图分类号: 

Q789

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