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基于CRISPR的月季RcTCP基因编辑技术研究

来源：花匠小妙招时间：2024-09-28 11:08

TCP基因家族是植物特异性转录因子,并且在植物生长和发育过程中起重要的调节作用。为了探讨月季花器官发育中RcTCP9基因对其的影响,本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建植物表达载体,其检测结果表明,成功构建了含月季RcTCP9基因的植物表达载体。以月季作为为试验材料,通过农杆菌介导的叶片浸入法瞬时转化月季,获得了表达eGFP的月季叶片。以月季组培苗为受体材料。得到了以下结果:1.本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,根据月季RcTCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402中,经测序后,表明含月季RcTCP9基因的植物表达载体构建成功。2.以月季作为试验材料,通过农杆菌介导的叶片浸入法瞬时转化月季叶片,获得了表达绿色荧光的月季叶片。由此表明构建的含月季TCP9基因的植物表达载体能够在月季中表达。3.为了保证经过农杆菌浸染过后月季腋芽的正常生长,防止农杆菌增殖过快以及筛选抗性芽,选用Kan和Cef对月季腋芽进行共同作用试验,将月季腋芽分别置于还有不同浓度Kan和Cef的芽诱导培养基中,观察其腋芽的萌发及生长情况。最终选择含150 mg/L Kan与200 mg/L Cef的培养基作为月季腋芽的筛选与抑菌培养基。

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