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一种用于鉴定毛花猕猴桃性别的特异性分子标记及其应用

来源：花匠小妙招时间：2024-12-06 14:09

本发明属于分子生物学及遗传育种，具体涉及一种可以快速鉴定毛花猕猴桃性别的特异性分子标记及其应用。

背景技术：

1、毛花猕猴桃是猕猴桃属的重要经济植物，为中国特有种，果实维生素c含量高、抗溃疡病、易剥皮等优异特性使其成为继中华猕猴桃与美味猕猴桃后又一被广泛种植与发展的重要物种，此外，具备优良性状的毛花猕猴桃个体还可以作为猕猴桃杂交育种的重要亲本材料。我国毛花猕猴桃野生种质资源极其丰富，对环境的适应性强，可以用于遗传改良及新品种培育的优良个体众多。然而毛花猕猴桃作为雌雄异株的专性异交物种，其童期较长，3至5年才能开花结果，且对育种技术要求高，因此常因幼苗性别难以鉴定而导致育种工作量大、育种成本高、资源大量浪费等窘况。在童期就可以明确鉴定毛花猕猴桃性别对于毛花猕猴桃的针对性育种具有重要意义，不仅可以节约资源与土地，还可以提高猕猴桃育种效率。基于此，有必要开发一套高效鉴定毛花猕猴桃性别的分子标记系统。

2、目前，虽然已经有部分分子标记可以应用于猕猴桃性别鉴定，但多用于中华猕猴桃种内、猕猴桃种间或部分父母本清晰的杂交群体实生幼苗性别鉴定，该类标记特异性强，通用性弱，鉴定准确性也尚有待提高。毛花猕猴桃野生资源丰富，其遗传多样性较高，个体间、居群间基因组变异较大，常用的通用性引物对毛花猕猴桃的鉴定效果较差，因此开发一种只应用于毛花猕猴桃性别鉴定的特异性分子标记具有重要的应用价值与实践意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种可以快速准确鉴定毛花猕猴桃性别的特异性分子标记及其应用，能够在毛花猕猴桃童期或非花期鉴定植株性别，辅助选择育种个体，操作简单快速，准确率高，复现性好。

2、为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

3、发明人收集了全国不同地区的281株毛花猕猴桃个体，利用基因组重测序技术获取所有个体的基因组序列，将其比对到毛花猕猴桃参考基因组上，获取高质量的基因组变异位点，再利用全基因组关联分析得到与性别紧密相关的基因组区域，随后通过序列比对，回贴到重测序序列以及基因组序列上，提取仅出现在雄株中的特异性基因组序列，最后选择适宜长度序列作为分子标记。

4、分子标记在毛花猕猴桃性别鉴定中的应用：所述分子标记的核苷酸序列如seq idno.1所示，雄性毛花猕猴桃含有所述的分子标记，雌性毛花猕猴桃不含所述的分子标记。进一步地，用于扩增上述分子标记的引物如seq id no.2和3所示。

5、一种用于毛花猕猴桃性别鉴定的试剂盒，所述试剂盒含有用于扩增seq id no.1所示分子标记的引物。作为优选，引物如seq id no.2和3所示，利用所述的引物在雄性毛花猕猴桃中可扩增出dna条带(430bp)，在雌性毛花猕猴桃中无法扩增出dna条带。

6、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明开发了快速鉴定毛花猕猴桃雌雄个体的分子标记，具有操作简单、准确性高、可重复等优点，易于在毛花猕猴桃童期或者未出现显著性别标志的时期鉴定其性别，可以有效避免因个体性别不明所造成的育种资源浪费，进一步节约成本，提高选择效率。

技术特征：

1.分子标记在毛花猕猴桃性别鉴定中的应用，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示，雄性毛花猕猴桃含有所述的分子标记，雌性毛花猕猴桃不含所述的分子标记。

2.一种用于毛花猕猴桃性别鉴定的试剂盒，其特征在于，含有用于扩增权利要求1所述分子标记的引物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，引物的核苷酸序列如seq id no.2和3所示。

4.引物在毛花猕猴桃性别鉴定中的应用，其特征在于，所述引物用于扩增权利要求1所述分子标记。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，引物序列如seq id no.2和3所示，利用所述的引物在雄性毛花猕猴桃中扩增出430 bp的dna条带，在雌性毛花猕猴桃中无法扩增出dna条带。

技术总结
本发明公开了一种可以快速鉴定毛花猕猴桃性别的特异性分子标记及其应用，利用基因组重测序技术获取281株毛花猕猴桃的基因组序列，将其比对到毛花猕猴桃参考基因组上，获取高质量的基因组变异位点，再利用全基因组关联分析得到与性别紧密相关的基因组区域，随后通过序列比对，回贴到重测序序列以及基因组序列上，提取仅出现在雄株中的特异性基因组序列，最后选择适宜长度的分子标记。本发明提供的分子标记易于在毛花猕猴桃童期或者未出现显著性别标志的时期鉴定其性别，可以有效避免因个体性别不明所造成的育种资源浪费，进一步节约成本，提高选择效率。

技术研发人员：姚小洪,江全,秦梦云,申宇芳,黄靖汶
受保护的技术使用者：中国科学院武汉植物园
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12