红豆杉组织培养技术与方法.doc下载

红豆杉组织培养技术与方法(1)选材与消毒：取当年生的枝条或带顶芽，或去顶芽的腋芽茎段，剪去叶柄，在自来水下冲洗lO rain，用’70％酒精消毒20 rain，再用无菌水冲洗。然后浸入O．1％氯化汞溶液中消毒15 rain，反复用无菌水冲洗4次，每次浸泡3 rain。消毒后的材料，放在无菌滤纸上吸干表面水分，用解剖刀把枝条切成10～15 mm小段。??? (2)愈伤组织诱导培养基配制：培养基的基本成分用B，或MS。1997年中国林科院邱德有利用东北红豆杉叶片愈伤组织开展组培研究，以附加2 mg／L，2．1％～0．15％聚乙烯吡咯烷酮的改良B，培养基上，悬浮培养细胞第3代植板率达20％，并且成本低，大批量生产无性系植株，有望获得突破。1997年程广有等以：MS培养基为基础，加人不同质量浓度的IBA(吲哚丁酸)和6一BA(6一卡基氨基腺嘌呤，对东北红豆杉茎尖进行组织培养，发现当IBA浓度大时，茎尖容易形成不定根。当IBA质量浓度较小时，愈伤组织的形成与新梢生长情况有正相关趋势，但未见不定根发生。根据以上经验教训，红豆杉组织培养基以B5为基础，多与2．4一D(1．O一3．01 mg／L)或2．4．D与IAA、NAA、KT、6-BA等外源激素组合使用。其中6．7一V+2％蔗糖+0．7％琼脂，并分别添加IAAl．0 mg／L+2．4一D 1．0：mg／’L+KT 0．1 mg／L，IAA 1．0mg／L+NAA 0．1 mg／’L和KT 0．1 m g／L。培养基灭菌前pH调至5．8左右，配置好培养基在高温、高压灭菌后接种。培养温度20～25℃暗培养。每天光照12 h，光照强度1 200 k，2～3周后即开始形成愈伤组织，红豆杉出愈率89％。灰白色，随着愈伤组织增大，要及时注意发生褐变，尽量保持较低培养温度，交换培养基转入继代悬浮培养。??? (3)抑制愈伤组织褐化。要在培养基中每升加添0．05—0．1 gVc(抗坏血酸)、0．1 gAC(活性炭)聚乙烯比烙烷酮0．1 g，谷胺酸l／1000 g，肉桂酸15 g和100 mg椰子汁。培养温度20—23℃，光照条件与普通培养相同，每周需要更换一次培养基，而形成一个有许多侧枝的无根苗。??? (4)生根培养与瓶苗移栽管理：红豆杉愈伤组织诱导，到生根的难度较大。一般诱导生根的基本培养基除使用与前阶段相同的培养基外，常需要降低无机盐浓度(1／2，1／3或1／4)有利于根的分化，P和K有利于生根，外加Ca有利根的形成和生长，微量元素B和Fe对诱导生根有利，糖量要低，浓度10 g／L为宜；培养基中使用1．0 mg／LIBA(吲哚丁酸)+NAA 1．0—2．0 mg／I。，有利于诱导生根，活性炭2 g起到遮光作用，吸附抑制生长的有害物质。一般温度16—25℃，当瓶苗长至3—4 cm时，即可出瓶移栽，进行炼苗。移栽初期1～2周内，盖上塑料膜，保持相对湿度85％左右，遮荫度50％工作计划一、近期 　　今年是在新的工作岗位工作的年，是熟悉工作，履职，方法，积累经验的一年，年中“转变，”，即转变工作角色，工作职责。 　　转变工作角色：参加工作近十年了，从事的工作一直都单一，以至于对行业的工作所知甚少，以至陌生，县办公室全县的核心机构，工作涉及到全县各行各业，对此，在思考问题，事情时，跳出以前在的思维，摆正的位置，全局意识，转变工作角色。 　　工作职责：办公室对工作安排，尽快熟悉的工作和职责，熟悉县办公室的规章制度，工作要求;熟悉县办公室总体工作及年初工作，工作任务;三虚心办公室同志的，善于学习、勤于思考，在干中学、学中干，工作的运行和问题的程序;四要与科室同志总结前期工作，工作努力方向。 　　二、中期 　　在工作职责、工作任务，熟悉工作方的前提下，明年，自身锤炼，政治素质、能力、工作绩效“三个提升”。 　　提升政治素质：要善于从政治角度看问题。面临的情况多么，要从政治角度分析判断问题，清醒头脑。二要政治敏锐性。密切关注时事、时事，网络、报刊、电视等，敏锐把握方针政策动向，工作的性。要高尚的政治品格。眼界宽广、胸襟广阔、淡泊名利、甘于奉献、原则。 　　提升能力：提升写作能力。理论学习，注重平时公文写作中的锻炼，注意办公室同志撰写材料的学习，能交办的新文件拟稿任务。提升语言表达能力。说话训练，汇报工作、简洁、清楚。提升办事能力。领会工作内容，勤于思考，能工作职责或交办要求，的任务。 　　提升工作绩效：虚心、同志、等对工作的意见和建议，总结经验教训，工作，优质的工作。调研、信息报送等工作，能超额办公室下达的工作。 　　三、远期 　　学习，的先进和作风上的优良;锻炼，服务意识和的。服从组织、安排，善于思考、创新，能独立且出色工作。 　　四、工作措施 　　1、学习。学习是历史使命，选择学习选择进步，学习

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