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蝴蝶兰茎尖培养脱病毒技术初步研究 Preliminary Study of Eradicating Orchid Virus Tip

来源：花匠小妙招时间：2024-11-29 13:00

-13-中国园艺文摘2013年第4期

蝴蝶兰茎尖培养脱病毒技术初步研究景维杰1黄容清1蒋明殿1朱根发12(1.广东省农业科学院环境园艺研究所广东广州5106402.广东省园林花卉种质创新综合利用重点实验室广东广州510640)摘要对培养基的无机盐浓度、钾浓度比例、氮素型态、植物生长调节剂进行了试验优化研究了培养基和外植体取材对蝴蝶兰茎尖生长点培养脱病毒的影响。结果表明经MS培养基改良的KN培养基其1/5大量元素的无机盐浓度适合蝴蝶兰茎尖生长点的培养。一定浓度范围内提高氮源中硝酸态氮的比例或提高培养基中钾的浓度比例均有助于蝴蝶兰茎尖生长点培养的存活。植物生长调节剂NAA0.5mg·L-1+6-BA3.5mg·L-1的组合适合蝴蝶兰茎尖生长点培养的存活和类原球茎(Protocorm-LikeBody,PLBs)的诱导。茎尖取材大利于培养存活但是不利于脱病毒效果。齿舌兰轮斑病毒(简称ORSV)的茎尖生长点脱病毒难度较建兰花叶病毒(简称CymMV)的脱病毒难度大。蝴蝶兰茎尖培养脱病毒取材外植体须小于0.4mm附带叶原基不能多于1个。关键词蝴蝶兰兰花病毒茎尖培养蝴蝶兰作为高产值花卉是目前温室生产的主力产品。但在蝴蝶兰产业快速发展之时兰花病毒问题日渐突出严重影响蝴蝶兰的生长和观赏性。目前对蝴蝶兰影响最大的病毒主要是齿舌兰轮斑病毒(ORSV)和建兰花叶病毒(CyMV)2种尤其当蝴蝶兰植株同时被这2种病毒复合感染后其危害比单一病毒感染更为严重。同时因为兰花病毒寄主的非单一性会在管理疏漏或品种交流时交叉传播感染而危及其他园艺作物因此研发无病毒的蝴蝶兰种苗已经势在必行。园艺植物脱除病毒的研究报道较多主要采用热处理、茎尖生长点组织培养、抗病毒化学药剂处理、愈伤组织培养、花药培养等方法。茎尖生长点组织培养脱毒最可行常被辅助以热处理、抗病毒化学试剂处理作为园艺作物脱病毒方法运用。在茎尖脱毒培养研究中培养基的优化度和茎尖外植体取材是技术的关键但对蝴蝶兰的脱病毒研究少见有系统的报道。本研究对蝴蝶兰茎尖脱毒组织培养的培养基优化、外植体取材等方面进行试验尝试旨在为蝴蝶兰脱病毒苗研究、生产提供参考。1材料与方法1.1材料和操作方法选择经ELISA法病毒检测显示复合感染ORSV和CyMV两种病毒的蝴蝶兰“大辣椒”(DoritaenopsisBigChilli)品系开花株用所取花梗腋芽获得的组培生根苗作为研究材料。在超净工作台上将苗放在消毒过的0.1柠檬酸+0.1抗坏血酸溶液浸透的滤纸上操作。在40倍冷光源解剖镜下用手术刀剥去生长点外围的幼叶露出微凸、穹形、发亮的生长点。切下生长点快速放在培养基上表面。所用工具第一作者简介景维杰1976男硕士研究生研究方向为蝴蝶兰组织培养、栽培技术。项目来源广东省促进科技服务项目(2011B04030004)广东省科技攻关重点项目(2011A020102007)。

每用一次之前都用5%氢氧化钠溶液浸泡1分钟、清水洗过、酒精灯灼烧后冷却3个过程。每个试管培养基接种1个茎尖组织。在2528℃1200Lux、10h/d的光照条件下培养。1.2基本培养基配方的优化试验用经MS培养基改良的KN培养基为基本培养基设计无机盐浓度、氮源、钾浓度对蝴蝶兰茎尖培养、存活率影响的单因子试验。试验中取材茎尖0.5mm左右带2个叶原基每个处理取材接种15瓶每瓶6个茎尖组织。接种后暗培养7d后转入光照培养30d后统计成活率且转换1次新鲜培养基90d后统计PLBs诱导情况结果用EXCEL软件分析(见表1)。表1基本培养基优化试验

无机盐浓度硝酸氮/总氮(NO3-/N)钾浓度/总无机盐浓度C1C2C3C4N1N2N3K1K2K31/10KN1/5KN1/2KNKN1/41/23/40.150.30.45备注1.各处理培养基均附加6-BA3mg·L-1、蔗糖20g·L-1、椰汁100ml·L-1、琼脂6g·L-1PH5.5。2.氮源和钾离子浓度试验中分别用6水合硝酸镁、硝酸钾、硝酸铵、氯化钾等补充调配。1.3植物生长调节剂对茎尖生长点存活率的影响以无机盐浓度试验中最优的处理作为试验的基本培养基。取材和试验方法同前(见表2)。表2植物生长调节剂浓度

BA(mg·L-1)NAA(mg·L-1)取材方式(取材大小)*0.50(A1)3.50.1(A2)5.50.5(A3)