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四季秋海棠遗传转化体系的建立及BsRbohD基因的功能验证

来源：花匠小妙招时间：2024-11-25 21:17

四季秋海棠(Begonia semperflorens)是一种多年生常绿草本花卉,被广泛用做观赏植物用于造景。四季秋海棠‘超级奥林匹克’是一种绿叶红花品种,但常因外界环境改变,如高光、低温,引起叶色的变化,具体表现为因花色素苷积累而变红。植物NADPH氧化酶是细胞内ROS产生的主要来源,有研究发现,因为RbohD基因的大量表达促使植物产生大量的活性氧,活性氧的大量积累对植物产生危害,进而激发了植物的应激防御体系。为了探究低温胁迫下四季秋海棠叶片花色素苷合成积累是否与NADPH氧化酶所介导产生的活性氧有关,本研究将前期课题组构好的超表达载体Super-1300-BsRbohD,通过农杆菌花序侵染的方法,分别转化‘哥伦比亚’野生型拟南芥和纯合的T-DNA插入突变体,通过潮霉素(Hyg)抗性筛选和孟德尔遗传定律得到三株单拷贝的纯和过表达株系OE2、OE6、OE19和三株单拷贝的回补株系Compl-RbohD1、Compl-RbohD2、Compl-RbohD3,以野生型拟南芥为对照,进行低温(4℃)处理,检测了野生型,三个过表达株系OE2、OE6、OE19,突变体和三个回补株系Compl-RbohD1、Compl-RbohD2、Compl-RbohD3的超氧阴离子产生速率,过氧化氢含量,花色素苷含量,BsRbohD基因相对表达量以及花色素苷相关结构基因和相关转录调控基因的表达量。此外,目前有关绿叶红花四季秋海棠“超奥”品种遗传转化的研究,鲜有报道。在课题组前期已成功建立四季秋海棠叶片再生体系的基础上,以四季秋海棠BsRbohD基因为外源目的基因,利用根癌农杆菌进行四季秋海棠的遗传转化体系的探索。结果如下:1对于得到的T-DNA插入突变体,通过三引物PCR的方法进行验证,结果证明突变体为纯合突变体,又通过RT-PCR进一步验证了上述突变体所突变基因即AtRbohD基因完全被敲... （共68页)