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几种重要林木检疫性病原菌的分子检测方法研究

来源：花匠小妙招时间：2024-11-23 10:41

几种重要林木检疫性病原菌的分子检测方法研究

【摘要】：为了进一步加强进境原木和木质包装病害检验检疫工作,给检疫部门提供高效、快速、准确的检疫检测方法,本文进行了进境林木上可能携带的几种重要的检疫性病原菌分子检测方法的研究并初步建立了一个进境林木危险性病原真菌数据库。主要研究结果如下:1.栎枯萎病菌(Ceratocystis fagacearum)的PCR检测方法的建立根据C.fagacearum与同属其它种的的ITS差异区域设计出一对特异性引物CF01/CF02,PCR产物为280bp,又利用真菌的通用引物ITS1/ITS4,建立了Nested PCR方法,灵敏度为1pg DNA/25μl,此外,特异性引物CF01/CF02还适合于Real-time PCR,其检测灵敏度更高,为0.1pg DNA/20μl。将此两种方法来检测人工污染了C.fagacearum的木块和土壤,均能得到阳性扩增,且0.3g土壤中1个孢子即可检出。2.栎枯萎病菌(Ceratocystis fagacearum)与栎树疫霉猝死病菌(Phytophthora ramorum)的多重PCR检测方法的建立根据我们实验室设计的栎枯萎病菌的特异性引物CF01/CF02和2004年Hayden等设计的栎树疫霉猝死病菌特异性引物Phyto1/ Phyto4,组合优化出了可同时检测此两种病原菌的双重PCR检测体系,经PCR扩增可以分别得到687bp和280bp两条特异性条带,灵敏度为10 pg DNA/25μl。3.松干基褐腐病菌(Inonotus weirii)的PCR检测方法的建立根据I.weirii与同属其它种的的ITS差异区域设计出一对特异性引物IW1/IW2,经PCR扩增,产物为165 bp,灵敏度为100 pg DNA/25μl,此外,特异性引物IW1/IW2还适合于Real-time PCR,其检测灵敏度更为0.1pg DNA/20μl。将此两种方法来检测人工污染了C.fagacearum的木块,均能得到阳性扩增。4.针叶松黑根病菌(Ophiostoma wageneri)、松干基褐腐病菌(Inonotus weiri)、松树脂溃疡病菌(Fusarium circinatum)的多重PCR检测方法初探根据我们实验室设计的松干基褐腐病菌的特异性引物IW1/IW2、2005年,Wolfgang等人设计的针叶松黑根病菌特异性引物LEPTO1/LEPTO2以及2007年,廖太林等设计的松树脂溃疡病菌特异性引物S1/S2,组合优化出了可同时检测此三种病原菌的多重PCR检测体系,检测灵敏度为1 ng DNA/25μl,用此方法成功的从一批源自美国的木质包装中检测出针叶松黑根病菌。5.进境林木危险性真菌病害数据库的建立结合我国进口林木的种类以及其可能携带的危险性病原菌,收集了近70种林木危险性病原真菌的资料,其中囊括了我国检疫性名录的林木病原菌,并建立了一个进境林木危险性病原菌数据库,用户可以通过网页直接进行登录检索。

【学位授予单位】：南京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010

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