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黄花石蒜花蕊与花葶差异片段的克隆及其生物信息学分析

来源:花匠小妙招 时间:2024-11-20 17:09

黄花石蒜花蕊与花葶差异片段的克隆及其生物信息学分析

【摘要】: 黄花石蒜(Lycoris aurea Herb.)内含生物碱、黄酮、多糖、氨基酸及凝集素等化学成分,其中加兰他敏含量比其他石蒜属植物高。加兰他敏具有选择性和可逆性调节烟碱型乙酰胆碱受体及抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)的双重作用,是治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer' s Disease, AD)的首选药物之一。我们通过相关文献研究发现:七月份黄花石蒜花中加兰他敏的含量花中含量最高,茎(花葶)含量最少,另有文献表明花中花蕊部分加兰他敏含量最高,提示黄花石蒜不同部位中生物活性物质加兰他敏合成相关酶基因及加兰他敏生物合成代谢途径存在差异。本课题以此为立题依据,借助mRNA差异显示技术研究黄花石蒜的花蕊与花葶中差异片段,并对其克隆进行生物信息学分析。本课题主要研究内容与结果如下:1.从湖南衡山采集的黄花石蒜,经中药鉴定教研室潘清平教授鉴定,所采集的药材为Lycoris aurea Herb.。利用试剂盒、CTAB法及SDS法分别黄花石蒜花蕊和花葶中总RNA,筛选出最适提取方法为试剂盒法。2.进行PCR条件优化,确定最佳PCR条件。筛选78对引物,找出花蕊和花葶中的差异片段,将差异片段DNA纯化后进行克隆。3.将克隆菌进行阳性检测及测序,所得的44个测序片段进行BLASTX比对,分析差异片段所编码的蛋白的主要功能,进一步分析其是否为加兰他敏合成的相关酶。

【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012


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所属分类:花卉
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