植物脱毒技术

感染病 毒种类 19
11 4 5 3 10
植物种 类 矮牵牛
百合 马铃薯 大蒜 豌豆 樱桃
感染病 毒种类 5
6 17 24 15 44
植物种 类 苹果
柑橘 葡萄 草莓 桃 梨
感染病 毒种类 36
23 26 24 23 11
所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物 体内病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害 病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存 在表现阴性反应的苗木。
（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠 心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带 病毒。 （三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎 尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗 的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接— —嫁接苗培养——移植。
苹果茎沟病毒
苹果花叶病毒 苹果锈果类病毒 葡萄扇叶病毒 葡萄茎痘病毒
弗吉尼亚小苹果
兰蓬王、红玉和 金冠 国光 沙地葡萄圣乔治
葡萄卷叶病毒
欧亚种葡萄
叶片下卷、叶脉间变红
Байду номын сангаас
葡萄茎沟病毒
葡萄栓皮病毒 葡萄金黄病毒 葡萄脉坏死病 葡萄脉斑驳病
Kober 5BB
LN33 Baco 22A 110R 河岸葡萄
仅在Kober5BB上会产生茎沟
第十章 植物脱毒技术
目的与要求 了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其 操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌 握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定 方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒 苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物 鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。
康乃馨 各种病毒 大丽花 大蒜 甘蔗 草莓 花叶病 花叶病毒 花叶病 各种病毒
二、热处理脱毒 脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温 的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中 浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用： 甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空 气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间
3、分别说明植物指示植物法和抗血清鉴定法
原理
4、写出我国的脱毒苗繁育生产体系
5、查阅资料，了解我国脱毒马铃薯生产状况
二、无病毒苗的繁殖 （一）无病毒苗的繁殖方法 1、嫁接繁殖 2、扦插繁殖
3、压条繁殖
4、匍匐茎繁殖
5、微型薯块繁殖
（二）无病毒苗繁育生产体系 我国农作物无病毒苗繁育生产体系归结 为以下模式： 国家级（或省级）脱毒中心——无病毒 苗繁育基地——无病毒苗栽培示范基地——作 物无病毒化生产
三、无病毒苗的利用 无病毒苗在生产中的利用也要防止病毒的再 感染。•
随品种而异，有些轻 微花叶或粗缩，敏感 品种反应为坏死
叶尖呈浅黄色，有些 品种呈紫色或红色
马铃薯卷 叶病毒 （PLRV）
洋酸菜
（一）草本植物鉴定 1、汁叶涂抹法 被鉴定植物取1～3克幼叶—加10 毫升水及少量磷酸缓冲液-研碎过滤-加金钢砂作麾 擦剂-汁液在叶面上涂抹2～3次接种 2、小叶嫁接法 指示植物作砧木，被鉴定植物小 叶作接穗，常用劈接法。 （二）木本指示植物鉴定 1、直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片 2、双重芽嫁接 3、双芽嫁接法
生产场所应隔离病毒感染途径，• 好土壤消 做
毒或防蚜等工作。在此种植区及种植规模小的地 方，要较长时间才会感染。而在种植时间长、轮 作及种植规模大的产地则在短期内就可感染。 一旦感染，影响产量质量的，就应重新采用
无病毒苗，以保证生产的质量。
思考： 1、说明植物茎尖培养脱毒技术原理及其影响 因素
2、热处理脱毒原理是什么?
徒长 水稻恶苗病
疮痂
卷叶 马铃薯卷叶病
指示植物法
几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状
病毒种类 马铃薯X病 毒（PVX） 马铃薯S病 毒（PVS） 指示植物 千红日、曼陀罗、 辣椒、心叶烟 苋色藜、千日红、 曼陀罗、昆诺阿藜 表现症状 脉间花叶 叶脉深陷，粗缩
马铃薯Y病 野生马铃薯、洋酸 毒（PVY） 菜、曼陀罗
应用植物脱毒技术意义
植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，
生长势增强，明显提高产量、改善品质，产
量的提高幅度最高可达300%。
植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去
除多种真菌、细菌及线虫病害，使种性得以
恢复，植株生长健壮，减少肥料和农药施用
量，降低生产成本，保护了环境
第一节 脱毒方法
一、茎尖培养脱毒 （一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎 尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分 生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基 能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。 但茎尖越大，脱毒效果差。
适用：多数植物
3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合 起来的方法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又
可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒
率。 适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的 纺锤块茎类病毒
三、其他组织培养脱毒方法 （一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织， 再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植 株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方 面的原因： 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制 速度较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织发生了抗病毒突变。
节间肿大，部分叶片背面出现栓皮 植株矮化，叶片下卷、黄化
叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须 和嫩梢坏死
褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形 新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈 破碎状
柑橘碎叶病
腊斯克枳橙、特洛 亚枳橙、卡里佐枳 橙和厚皮来檬
三、抗血清鉴定法 特 • 异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可 以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。 （一）原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能 发生高度专一性的血清学反应（免疫反应） （二）方法 1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法 3、环形接口法 4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测 定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。
第三节 无病毒苗的保存和繁殖
通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴 定确系无特顶病毒者，既是无病毒原种。 无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有 可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病 毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保 管得好可以保存利用5～10年。
一、无病毒苗的保存
（一）隔离保存 通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目， 即网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆栽钵。 栽培用的土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，
铃薯Y病毒
马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒 斑纹花叶病毒 甘薯 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒
1.0～3.0
0.2～0.5 0.2～0.3 0.2以下 1.0～2.0 1.0～2.0 0.3～1.0
鸢尾
菊花
花叶病
各种病毒
0.2～0.5
0.2～1.0 0.2～0.8 0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0
全世界已发现植物病毒有近788种。
病毒的危害：
组织和细胞病变
新陈代谢等生理机能受到干扰
外观表现不正常状态
由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄
主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，
甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程
度仅次于真菌。
危害一些植物的病毒数目
植物种 类 菊花
康乃馨 水仙 唐菖蒲 风信子 月季
四、分子生物学鉴定
1、双链RNA法
通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电 泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是 否带病毒。 2、互补DNA（c DNA）检测法
也叫DNA分子杂交法
五、电镜检测法
运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无
病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对病毒 种类进行鉴定。是较为先进的方法，但需一定的设 备和技术。
25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h
一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新 鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从 生芽。 4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生 根培养基继续培养1-2个月可生根。
（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。
第二节 脱毒苗鉴定 一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有 无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否 存在。 二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物 作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的 存在。即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只 能测出病毒的相对感染力。
部分病毒的木本指示植物及相应症状
病毒种类 木本指示植物 苏俄苹果 司派227或光辉 表现症状
苹果褪绿叶斑病 毒
苹果茎痘病毒
叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮 化，长势弱
叶片反卷，植株矮化，皮层坏死 植株矮小，接合部内有深褐色坏死 环纹，木质部产生深褐色纵向条沟 叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑 叶和茎干锈斑、坏死斑 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、 局部坏死、畸形；叶脉间出现星状 透明斑
并及时喷施农药防治虫害，以保证植物材料在与
病毒严密隔离的条件下栽培。• 一种更便宜的方 另 法，是把由茎尖得到的并已经过脱毒检验的植物 通过离体培养进行繁殖和保存。
（二）长期保存 1、低温保存 将无病毒苗原种的器官或幼小植株接种到培 养基上，低温下离体保存，是长期保存无病毒苗 及其他优良种质的方法。只需半年或一年更换培 养基，也叫最小生长法。 2、冷冻保存（超低温保存） 用液氮（-196℃）保存植物材料的方法。常 用冷冻保护剂为DMSO（5-8%）、甘油、脯氨酸 （10%）、各种可溶性糖、聚乙二醇等。（见十二 章）
一些常见病毒病引起的可见病症
症状 病毒病名称 症状 病毒名称
褪绿、黄 小麦黄矮病 化 花叶、斑 烟草花叶病、菜豆花叶病、 驳 黄瓜花叶病 溃疡 枯死 穿孔 杨树溃疡病、柑桔溃疡病， 番茄溃疡病 马铃薯晚疫病、水稻白叶枯 病 桃细菌性穿孔病 柑桔疮痂病、梨黑星病、马 铃薯疮痂病
斑点 十字花科黑斑病
猝倒、棉花立枯病、瓜苗猝 立枯 倒病、水稻烂秧病 萎蔫 矮化 棉花枯萎病、茄科植 物青枯病 玉米矮化病、泡桐丛 枝病、小麦丛矮病
（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术
的关键）
植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.30.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养
用于脱毒的适宜茎尖大小
植物 病毒名称 马铃薯卷叶病毒 马 剥离茎尖大 小 （mm） 1.0～3.0 植物 百合 剥离茎尖大 病毒名称 小 （mm） 花叶病 0.2～1.0
外植体消毒
浸泡5min
器械消毒
酒精灯灼烧
酒精擦拭培养皿
2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械固 定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的生 长点（0.3-0.5mm）—切下的茎尖转至培养基上 （顶部向上）。
酒精擦拭
旋转灼烧
显微镜下 获取茎尖
接种
盖好瓶塞
脱毒马铃薯试管苗
3．培养
（二）茎尖脱毒方法
1、取样与消毒
可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采 顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大 叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒
左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消
毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。
酒精擦拭手

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