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在核酸提取过程中，RNA为什么比DNA更容易降解？

来源：花匠小妙招时间：2024-11-13 07:03

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发布时间：2024-10-25 08:57 | 点击次数：345

RNA（核糖核酸）比DNA（脱氧核糖核酸）在提取过程中更容易降解的原因主要与它们的化学结构不同和提取中的不当操作有关。
一、化学结构差异：

DNA与RNA结构对比

1、RNA是单链结构，与DNA的双链结构相比，它更不稳定。

DNA的双链结构与RNA的单链结构

2、2' 位的羟基：RNA分子中的核糖含有一个2' 位的羟基（-OH），而DNA中的脱氧核糖在这个位置上是一个氢原子。这个额外的羟基使得RNA分子更加不稳定，因为它可以促进自发的水解反应，导致RNA链断裂。

DNA与RNA 2’ 位基团对比
二、提取体系中RNA酶的影响：
1、内源性RNA酶：存在于细胞内，即使在细胞裂解后也能继续降解RNA。
2、外源性RNA酶：环境中广泛存在，如空气、皮肤、实验室用品（手套、试管等）中都有可能携带RNA酶。
三、实验操作不当：
1、使用的试剂和器械没有经过DEPC处理，无法有效灭活RNA酶。
2、抑制剂失效或用量不足，不能有效抑制RNA酶的活性。
3、实验样品过多或匀浆温度过高，导致RNA酶活性增加。
4、pH值和温度的变化，特别是在碱性条件下，RNA的碱基容易被脱氨基，从而导致链断裂；高温也会引起RNA分子的部分或完全降解。
四、应该怎么做能减少RNA的降解
为了减少RNA在提取过程中的降解，需要采取一系列措施，包括使用无RNA酶的实验室用品、在低温下操作、使用RNA稳定剂、使用成品试剂盒等。通过这些方法可以有效地减少RNA降解的风险，确保获得高质量的RNA样品用于下游分析。