双瓣茉莉花HPL与GDS基因的克隆与分析

【摘要】： 茉莉花[Jasminum sambac (Linn.) Aiton]是香料工业与制茶业重要的原材料，是香味物质重要的植物资源。形成花朵香气的挥发性分子大都是一类低分子量、低沸点、低极性的化合物。本研究以采自福建农林大学的双瓣茉莉花的叶片和花蕾为材料，利用RT-PCR以及RACE技术获得脂肪酸过氧化氢酶（fatty acid hydroperoxide lyase,HPL）和香叶烯D合酶（germacrene D synthase, GDS）基因cDNA，并用半定量RT-PCR分析HPL和GDS在嫩叶和花蕾不同时期的表达水平，对茉莉花香气合成有关酶的基因进行克隆与分析。1克隆茉莉花HPL基因cDNA全长并利用半定量RT-PCR进行分析利用已登录GenBank的HPL基因，设计简并引物对保守片段进行扩增，通过RACE技术获得5ˊ和3ˊ序列，从而获得含1479bpORF的1703bpHPL基因全长，492个氨基酸，预测其相对分子量为55372.8，等电点为8.39，5ˊ端有80bp非编码区，3ˊ端包含134bp非编码序列；根据cDNA全长推导氨基酸序列与橄榄、番茄、马铃薯等植物HPL基因的氨基酸序列进行同源性对比分析并构建进化树。以茉莉花Actin基因为阳性对照，检测茉莉花HPL基因在嫩芽、花蕾1-3期、开花期的表达水平。结果表明茉莉花HPL基因在这5个时期内均有表达，且表达量遵循HPL在花发育时期高表达，花成熟后表达量降低以及老叶表达量低于新叶的发育特异性。2克隆茉莉花GDS基因cDNA全长并利用半定量RT-PCR进行分析利用已登录GenBank的GDS基因，设计针对保守区的简并引物，获得保守片段，通过RACE技术获得5ˊ和3ˊ序列，从而获得含1674bp ORF的1863bp GDS基因全长，552个氨基酸，预测其相对分子量为64016.4，等电点为5.26，5ˊ端有90bp非编码区，3ˊ端包含104bp非编码序列；根据cDNA全长推导氨基酸序列与罗勒、猕猴桃、葡萄等植物GDS基因的氨基酸序列进行同源性对比分析并构建进化树。以茉莉花Actin基因为阳性对照，检测茉莉花GDS基因在嫩芽、花蕾1-3期、开花期的表达水平。结果表明茉莉花GDS基因只在花蕾3期和开花期有表达，符合“往往在特定器官、组织和发育阶段表达”，同时也为“气质花”一说提供基因角度上的支持。

【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012

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