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SNT 3747

来源：花匠小妙招时间：2024-10-30 10:08

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关键词： SNT 3747-2013 杜鹃花枯萎病菌检疫鉴定方法 3747 2013 杜鹃花枯萎病菌检疫鉴定方法资源描述：

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T3747-2013
社鹍花祐萎病菌检疫鉴定方法
Detection and identification of Ovulinia azalea Weiss
2013-11-06发布
2014-06-01实施
华凡民共和国
国家质量监督验检疙点局
发布
SN/T3747-2013
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国宇波出入境检验检疫局
本标准主要起草人:段维军、郭立新、陈先锋、张慧丽。
SN/T3747-201
社鹃花枯萎病菡检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了杜鹃花等寄主植物上的杜鹃花枯萎病菌的检疫鉴定方法。
本标淮适用于杜花桔萎病菌的检疫鉴定。
2杜鹃花桔蕘病菌基本信怠
学名: Olinia azalea Weiss.,1940
曾用名: Sclerotinia azalea(F.A. Weiss) Dennis,(1956)
无性型: Owulitus azalea Buchwald
分类地位:真菌界( Fungi)、子囊菌亚门(. Ascomycota)、子囊菌纲( Ascomycetes)、柔膜目(lHel
tales)、核盘菌科( Sclerotiniaceae)、卵孢核盘菌属( Ovulinia)
传播途径:病菌可随风、雨、昆虫和田间操作传播,慼病花瓣远距离传播。
该病菌的其他相关资料参见附录A
3方法原理
以杜鹃花枯萎病菌的培养性状和病原菌形态特征作为鉴定依据。
仪器设备和主要试剂
4.1器设备
生物显微镜(具测量功能)、体视显微镜、超净工作台、生物培养箱、天平、高压灭菌锅、烧杯、三角瓶、
量筒、试管、培养皿(直径9cm)、酒精灯、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、载玻片、盖玻片、荧光灯、滤纸。
4.2主要试剂
次氯酸钠、玉米粉、琼脂粉、无水乙醇。
4.3培养基
玉米粉琼脂培养基(CMA):称取玉米粉200g,加适量蒸馏水煮沸20min左右,双层纱布过滤,在
滤汁中加入琼脂20g,继续煮至琼脂完全溶化后,加蒸馏水补足1000mL,121℃高压灭菌20min。
5病菌的鉴定
5.1症状检查
挑取病株,进行观察。病害症状描述参见附录A。
SN/T3747-2013
5.2分离培养
取发病花瓣,将病健交界处剪成1mm2~2mm2的小块,或挑取菌核进行分离,1.5%次氯酸钠表面
消毒30s,无菌水冲洗3次后,灭菌滤纸吸干水分,置于CMA培养基平板上,20℃培养。
5.3有性型诱导
收集感病寄主上菌核或培养后获得菌核,置于盛有灭菌潮湿砂的培养表面,在20℃下诱导萌发。
待子柄长出后用荧光灯每天照射16h,以诱导子盘形成,制作切片观察子葉盘、子囊、子囊孢子
特征。
鉴定特征
6.1培养性状
在CMA培养基上形成粗糙、质地较硬、毡状菌落,颜色灰白色到浅黄樹色不等。可在培养基上产
生菌核和小型分生孢子,但不会产生大型分生孢子,参见附录B。
6.2病原菌形态特征
菌核卵圆形或饼形,常呈不规则状或明显杯状,四面光滑。菌核大小约为(2mm-5mm)×(3mm
-10mm)×(0.5mm-1.5mm)。未成熟时浅褐色,成熟时呈深褐色或黑色。
小型分生孢子球形,直径3.0gm-3.5m,产生于聚集成团的拟纺锤形菌丝尖端,有时呈短链状,
易脱落,常与菌核同时产生。
子盘林状到斗状?掲色?共俩,从同一个菌核上可以长出1个~3个不等的子譲盘(最多8个)
宽2m~5m:子柄大小为(2mm~3mm)×(0.5mm~15m),直立或略弯曲,有时会长成弯曲
丝状树?长度可达15mm-18mm,柄基部黏土色,顶部黄褐色:子实层表面红色到核桃色不等;子達
圆柱形,大小为(130Pm~260km)×(9m-14m):子囊孢子单列排列,椭圆形,单细胞,透明状,
(10m~18gm)x(8.5gm~10m)。
大型分生孢子椭圆形或倒卵球形透明,大小为(40m~60m)×(21Pm~36m),在高湿条件
下,大型分生孢子呈棍棒状或梨状,长度可达72gm
社鹃花枯萎病菌的病原形态特征图参见附录C,其与近似种 Ovulinia perple ra的形态特征区别参
见附录D
7结果判定
以分离物的培养特征和培养性状作为鉴定依据,进行综合判定。若以上特征与6.1、6,2鉴定特征
符合,判定为杜鹃花萎病菌
8品保存与处理
样品经登记和经手人签字后妥善保存。对检出杜鹃花桔萎病菌的样品应保存于4℃冰箱中,以备
复核。该类样品保存期满后应经高压灭菌后方可处理。
SN/T3747-2013
9袾保存与处理
将菌株转接在CMA斜面上培养,待蘭丝体长満斜面后,置于4℃下保存,并定期(60d转管,标注
分离物来源、寄主、分离时间、鉴定人。对不需要长期保存的菌株应及时高压灭菌处理。
10结果记录与资料保存
妥善保存检验报告,包括症状、病菌、形态特征宏观以及微观图像等图文资料·以备复验、谈判和仲
裁。检验报告应注明检验日期、方法、结果等,并有检验人签名。