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一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法

来源：花匠小妙招时间：2025-11-15 11:33

1.本发明涉及植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法。

背景技术：

2.多花兰(cymbidium floribundum lindl.)是兰科兰属的一种附生植物，是《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录二物种中的一员，是国家ⅰ级保护野生植物。多花兰在世界上分布于中国印度等亚洲国家，在国内分布于广东、浙江、云南、海南、湖南等省区。多花兰的叶革质肥厚，并具有光泽，喜阴忌阳直射，喜湿忌干燥，能耐高温和低温，花色艳丽多姿，且花期长，栽培容易，具有较高的观赏价值，是较理想的盆栽花卉之一；多花兰的根可作为药用，滋阴清肺，化痰止咳；多花兰在株型、花朵数以及花色等方面均有丰富的变异，适应性广，在新品种培育中具有重要应用价值。
3.然而，一方面由于生境退化或丧失、砍伐或直接采挖用于园艺观赏等，实际的开发水平使种群在过去10年减少大于30％；另一方面，多花兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢；种子野外出芽率低；关于多花兰组织培养技术的文献报道不多，且已有的多花兰组织培养基中除了添加植物生长调节剂，还多添加辣木叶汁、构祀叶等营养剂，加大了繁殖成本。

技术实现要素：

4.针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，本发明以多花兰种子为外植体，极大地保护野生物种，提供的培养基大大减少生产成本，并大大缩短了培养时间，可为多花兰的应用提供大量优良的原材料。本发明提供如下技术方案：
5.一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，具体步骤如下：
6.1)种子的无菌萌发：将野外采摘的成熟蒴果经过消毒处理后，切开蒴果取出种子接种在萌发培养基中，先进行暗培养30天，而后转移至光照培养，无菌萌发至种子萌发形成原球茎；所述种子的消毒方法为先用75％乙醇浸泡3分钟，再使用2％次氯酸钠浸泡14分钟，然后使用无菌水浸泡摇晃6次，每次摇晃时间一分钟到两分钟；所述种子的萌发培养基为包含3g/l花宝一号、4g/l蛋白胨、0.1g/l活性炭的培养基；
7.2)原球茎增殖：将步骤1)中形成的原球茎转接在诱导原球茎增殖的培养基中，常规培养至分化出较多原球茎；所述原球茎增殖的培养基为包含1.0mg/l萘乙酸、2.0mg/l 6
‑
苄氨基嘌呤、2.0g/l水解乳蛋白的1/2ms培养基；
8.3)原球茎分化出芽：将步骤1)或步骤2)中形成的原球茎转接在分化出芽的培养基中，常规培养至分化出不定芽；所述分化出芽的培养基为包含0.5mg/l萘乙酸、1.0mg/l 6
‑
苄氨基嘌呤的1/2ms培养基；
9.4)芽生根：将步骤3)中形成的大小约3
‑
5厘米的芽切下，转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多花兰组培苗；所述生根诱导培养基为包含2mg/l萘乙酸的1/
2ms培养基；
10.5)组培苗移栽：将步骤4)中生根培养30天的组培苗移栽入不同基质中，培养至组培苗成活；所述基质是体积比1:1的腐殖土和火山石混合基质。
11.其中，所述步骤1)中种子无菌萌发形成原球茎的时间是90天。
12.其中，所述步骤2)中原球茎增殖培养20天的增殖效率可达5个原球茎。
13.其中，所述步骤3)中原球茎分化出2厘米芽的培养时间是30天。
14.其中，所述步骤4)中芽生根的时间是10天。
15.其中，所述步骤5)中组培苗移栽培养30天后成活率达90％，且植株生长明显。
16.其中，所述步骤1)、2)、3)、4)中的培养基中含30g/l蔗糖、5g/l琼脂粉，ph值为5.4。
17.其中，所述步骤1)中种子萌发培养条件是先在暗光下培养30天后，而后转入光照培养，光照时间为14h/d，光照强度为2000lx，温度为25
±
1℃。
18.其中，所述步骤2)、3)、4)中常规培养的培养条件为光照强度2000lx、光照时间14h/d，恒温培养箱温度为25
±
1℃。
19.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
20.1)本发明的方法从种子萌发90天形成原球茎，原球茎增殖、分化出芽、芽生根到获得组培苗的培养时间为60天，可快速、大量和优质的为多花兰的应用提供大量优良的原材料。
21.2)本发明的方法在对多花兰野生资源的保护和保存、人工栽培对种苗的需求、新品种的培育等方面具有重要意义。
附图说明
22.图1：是本发明实施例中使用的野生多花兰成熟蒴果(野外采摘地点：湖南桑植)。
23.图2：是本发明实施例中培养90天后种子无菌萌发形成的原球茎。
24.图3：是本发明实施例中原球茎增殖情况。
25.图4：是本发明实施例中原球茎出芽情况。
26.图5：是本发明实施例中芽生根情况。
27.图6：是本发明实施例中组培苗移栽成活情况。
具体实施方式
28.为了更清楚地表达本发明，下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
29.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
30.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
31.下述实施例中所使用的培养基配方与已报道的关于多花兰组织培养所使用的培养基不同。
32.实施例1
33.一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，包括如下步骤：
34.1)种子的无菌萌发：将野外采摘的成熟蒴果经过消毒处理后，切开蒴果取出种子接种在萌发培养基中，先进行暗培养30天，而后转入光照培养，光照时间为14h/d，光照强度为2000lx，温度为25
±
1℃，无菌萌发至种子萌发形成原球茎；所述种子消毒方法为先用75％乙醇浸泡3分钟，再使用2％次氯酸钠浸泡14分钟，然后使用无菌水浸泡摇晃6次，每次摇晃时间一分钟到两分钟；所述种子萌发培养基为包含3g/l花宝一号、4g/l蛋白胨、0.1g/l活性炭的培养基，种子无菌萌发形成原球茎的时间是90天。
35.2)原球茎增殖：将步骤1)中形成的原球茎转接在诱导原球茎增殖的培养基中，常规培养至分化出较多原球茎；所述原球茎增殖的培养基为包含1.0mg/l萘乙酸、2.0mg/l 6
‑
苄氨基嘌呤、2.0g/l水解乳蛋白的1/2ms培养基，原球茎增殖培养20天的增殖效率可达5个原球茎。
36.3)原球茎分化出芽：将步骤1)或步骤2)中形成的原球茎转接在分化出芽的培养基中，常规培养至分化出不定芽；所述原球茎出芽的培养基为包含0.5mg/l萘乙酸、1.0mg/l 6
‑
苄氨基嘌呤的1/2ms培养基；所述原球茎分化出2厘米芽的培养时间是30天。
37.4)芽生根：将步骤3)中形成的大小约3
‑
5厘米的芽切下，转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多花兰组培苗；所述芽生根的培养基为包含2mg/l萘乙酸的1/2ms培养基，芽生根的时间是10天。
38.5)组培苗移栽：将步骤4)中生根培养30天的组培苗移栽入不同基质中，培养至组培苗成活；所述移栽的基质是体积比1:1的腐殖土和火山石混合基质。所述组培苗移栽培养30天后成活率达90％，且植株生长明显。
39.所述步骤1)、2)、3)、4)培养基中含30g/l蔗糖、5g/l琼脂粉，ph值为5.4，所述常规培养的培养条件为光照强度2000lx、光照时间14h/d，恒温培养箱温度为26
±
1℃。
40.结果表明，本发明的方法从种子萌发90天可形成原球茎，原球茎从增殖、到分化出芽、再到芽生根形成组培苗的整个过程只需60天，可快速、大量和优质的为多花兰的应用提供大量优良的原材料，对多花兰野生资源的保护和保存、人工栽培对种苗的需求、新品种的培育等方面具有重要意义，市场应用前景广阔。
41.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。