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第八章植物再生培养技术.ppt

来源：花匠小妙招时间：2025-11-03 10:09

第八章植物再生培養技術第一節植物再生培養技術將植物之培養細胞或癒傷組織培養於適當的培養基中，可促進其器官的分化。其過程可分為兩種類型：其一為經由不定胚之形成，再分化成完整的植物體，這個過程稱胚狀體發生(embryogenesis)。另一種過程為先分化出莖葉(shoot)，之後再由莖葉分化出根部器官，此一過程稱為器官發生(organogenesis)。植物的種類不同，其分化的過程也有所不同，有些材料二種分化過程可同時發生。培養條件不同時，其分化的方式也會發生變化。一、影響器官分化之因子： auxin及cytokinin之比例 auxin比例過高時會抑制莖葉分化，而促進根之分化。 cytokinin比例過高時會抑制根之分化而促進莖葉之分化。培養細胞之來源(健康度、性狀之一致性)。繼代培養之次數及長短。培養條件(如溫度、光照強度、光照時間、光週期等)。二、不定胚之形成及植物體再生─以胡蘿蔔及茄子為例胡蘿蔔培養細胞之分化過程是經由形成不定胚，再分化為完整的植物體。培養基中若添加auxin會阻礙胡蘿蔔不定胚之形成，培養基氮素的型態也會影響不定胚之生成。茄子添加auxin後，可促進不定胚的形成，若添加cytokinin則會抑制不定胚之形成。三、胡蘿蔔不定胚之分化培養 (一)材料：胡蘿蔔癒傷組織 (二)培養基組成： MS +3% sucrose +2g 水晶洋菜 MS +3% sucrose +10% 椰子水+2g 水晶洋菜 (三)實驗器具：無菌鑷子。 (四)培養條件：無光至弱光，25-27℃。四、操作步驟：操作前雙手以酒精擦拭滅菌鑷子以火焰消毒夾取大小為0.8cm3大小之胡蘿蔔癒傷組織置於培養基中，每瓶置3塊組織置於無光或弱光條件下培養(25-27℃) 定期觀察不定胚之形成五、以胡蘿蔔及茄子之不定胚分化培養條件為例：分化培養基：胡蘿蔔先培養於含1.0mg/L 2,4-D之MS培養基，再移入不含植物生長調節劑之MS培養基（基本培養基與癒傷組織誘導培養基相同），而茄子則為培養基於含10mg/L NAA之MS培養基後，再移入不含植物生長調節劑之MS培養基。移植至分化培養基中之癒傷組織大小約50-300mg/50ml 培養基（5-100mg×3塊）。培養條件：25-27℃，無光或弱光（約500 lux）分化出之不定胚繼續培養至3-5cm高之植株（本葉2-3葉）時，移出培養皿外行馴化。不定胚培養之形成率：一般而言，液體培養比固體培養優良。第二節再生植物之馴化技術一、馴化（Habituation, Angergie）培養細胞對於所用來培養之各成分之要求性，或反應性因長時間培養而消失對培養基中各種成分之要求性之現象。1942年Gautheret(法人)將組織培養增殖用之培養基中最適auxin濃度在繼代培養過程中逐漸減少其用量，而使培養細胞被馴化成不含auxin（變成auxin不要求性）之培養基中也可增殖之現象（稱做angergie a l’auxin），後來美國的P.R. White將此種現象稱為馴化（ Habituation ）除auxin其他如cytokinin、vitamin、coconut milk等也有馴化現象。對植株材料而言，馴化現象也非常普遍，例如菸草細胞增殖對cytokinin及auxin之依存性會減輕。馴化並非遺傳性之變異，而是後生變異（epigenetic）。二、馴化（Acclimatization＝Acclimation）將培養容器內培養出之植株移出培養容器外，並使其逐漸適應自然環境（物理、化學環境）條件之一切作業稱之。馴化之目的大別分為二，其一為將培養植物體由營養依類型育成為營養獨立型。其二為抗逆境（環境stress）耐性之培育。培養於濕度近100％、弱光，且含營養份中之植物體，其葉薄且角質層尚未發育成外，其根因在洋菜和液體中生成，所以也尚未發育完全。即使表面上帶鮮綠之植物體但仍是營養依賴性植物體，所以其耐旱之基本構造仍未具備，如此植物體突然移至濕度低之環境中，則植物會因無法保持體內之水分而枯死，所以為提高其移出培養容器後之存活率必須進行馴化作業（Hardening）。首先培養於濕度60-90％，數千lux（中強）照度，營養成分少之環境下做短暫之培養，以逐漸地使其能育成為耐乾燥並營養獨立之植物。利用溫度、光度、濕度控制室進行馴化。一般除較溫和之馴化溫室外，另外也須行田間之馴育工作，以達其完全適應大自然之環境條件。須考慮濕度、溫度、光照度、光強度、氣體之流通性。馴化階段常用之為蛭石…等無機材料，原則上不加肥料而只使行保溫管理。若需要加肥料時以低濃度施加（