西花蓟马幼虫角质层蛋白1基因的dsRNA合成方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种西花蓟马幼虫角质层蛋白1基因的dsRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dsRNA的制备方法如下：S1：提取西花蓟马总RNA，将总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板进行目的基因的扩增，胶回收扩增产物；S2：引物设计，以胶回收产物为模板扩增合成dsRNA的目的片段，并PCR产物纯化；S3：纯化产物合成dsRNA。本发明专利技术提供的dsRNA通过浸泡西花蓟马0h卵能够破坏西花蓟马胚胎的发育，并且显著降低西花蓟马卵的孵化率；本发明专利技术提供的dsRNA通过饲喂西花蓟马成虫，能够显著抑制西花蓟马雌成虫的产卵量，并且对后代胚胎的发育造成干扰，导致后代无法正常生长发育而死亡；为RNAi技术在防治西花蓟马的应用提供理论依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及西花蓟马幼虫角质层蛋白1基因的dsrna合成方法与应用。

技术介绍

1、dsrna在生物体内普遍存在，自然环境中易于降解，具有物种专一性、无毒、无害、残留时间短等显著优点。因此rna干扰是绿色环保的抗病虫技术，对作物病虫害防控展现了巨大的应用前景。rnai抗虫技术是一种新型绿色无公害的害虫防治方法，它以害虫生长发育或重要行为过程中特异性的关键基因为靶标，利用人工合成的双链rna沉默这些基因的表达，通过影响害虫的发育和繁殖，降低虫口密度，达到害虫防控的效果。rnai抗虫技术中的关键是获得目标昆虫关键基因，并据此制备关键基因的双链rna。

2、西花蓟马卵不同胚胎发育期经螺虫乙酯处理后表现出不同的敏感性，通过label-free蛋白组学差异表达分析，24h卵中幼虫角质层蛋白1表达量显著上调，推测该蛋白表达的增加降低了螺虫乙酯的渗透，从而引起西花蓟马卵对螺虫乙酯敏感性的差异。因此通过构建幼虫角质层蛋白1的dsrna验证该蛋白在西花蓟马卵发育中的功能。

3、rnai分子技术对害虫防治具有广泛的应...

【技术保护点】

1.一种西花蓟马幼虫角质层蛋白1基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA的制备方法如下：

3.根据权利要求2所述的dsRNA，其特征在于，所述S1中cDNA的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示；所述S1中cDNA编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求2所述的dsRNA，其特征在于，所述S1中扩增目的基因的引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，下游引物的核苷酸...

【技术特征摘要】

1.一种西花蓟马幼虫角质层蛋白1基因的dsrna，其特征在于，所述dsrna核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.根据权利要求1所述的dsrna，其特征在于，所述dsrna的制备方法如下：

3.根据权利要求2所述的dsrna，其特征在于，所述s1中cdna的核苷酸序列如seq idno:2所示；所述s1中cdna编码的氨基酸序列如seq id no:3所示。

4.根据权利要求2所述的dsrna，其特征在于，所述s1中扩增目的基因的引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如seq id no:4所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no:5所示。

5.根据权利要求2所述的dsrna，其特征在于，所述s2中引物设计为合成西花蓟马幼虫角质层蛋白1的dsrna的引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑长英，霍昊宇，江守林，孙丽娟，潘明真，赵川德，杨春红，孙浩宇，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：

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