植物提取物中黄酮含量的测定（比色法）

实验概要

本方法用于测定植物中总黄酮，黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。其主要结构式如图。

实验原理

黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。

实验步骤

准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。

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