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花粉培养方法

来源：花匠小妙招时间：2024-10-03 21:09

植物花粉培养
花粉培养
花粉培养(pollen culture):也叫小孢子培养(microspore culture),是从花药中分离出花粉粒,使之成为分散的或游离的状态,通过培养使花粉粒脱分化,。
特点:
1、可排除花药培养中花丝、药壁等体细胞的干扰;
2、一个花药中花粉数目巨大,可减少试验用材料;
3、花粉除数量多,还具有单细胞、单倍性和较高同步性特点。
花粉培养
选幼年树花蕾
取下花蕾(镜检)
预培养数天
取花药
接种
分离
花粉
通过药壁吸收、贮存和转化培养基中的外源物质
药壁向花粉提供营养物质;
低温预处
理
消毒
过滤离心
再生
培养材料的选取与制备
(一)材料选择
(二)预处理
(三)外植体制备及接种
(一)材料选择
1. 花粉发育时期的选择
并不是任何发育时期的花粉都可直接诱导产生愈伤组织或胚状体,选择发育到特定时期花粉的材料进行培养是成功的关键。

选择大致处于所需要花粉发育时期的花蕾。由于花粉发育时期和植株的某些外部形态特征之间的大致相关性,因此利用这些外部标志,选择符合条件的花蕾,经镜检确定花粉发育的准确时期。
2. 生理状态的选择
花药和花粉供体植株的生理状态,对花粉愈伤组织的诱导率也有直接影响。比如大田栽培还是温室栽培植株的花药;是主茎穗还是分蘖穗的花药。水稻、小麦、大麦等禾本科植物,主茎穗比分蘖穗花药愈伤组织的诱导率明显地提高。
选取主穗(一级侧枝)的花蕾,因为一级侧枝的花蕾发育良好,数量大,发育同步。
操作过程中不应使花药受到损伤,若受损伤,则应淘汰,因为损伤常常会刺激花粉壁形成二倍体的愈伤组织。
低温预处理可以提高花粉胚的诱导频率
以1-5℃预低温处理小麦小穗,能提高花粉愈伤组织的产量。例:在4℃下冷冻石刁柏花蕾,预处理4天、8天和12天,、。
各种植物要求预处理的温度和时间不同。
(二)预处理
(三)外植体制备及接种
花粉培养中的表面灭菌通常先用70%乙醇浸润花蕾30S左右,然后在饱和漂白粉溶液(上清液)中浸泡10~20min ,%氯化汞溶液中处理5~10分钟,之后用无菌水漂洗3~5次。
花粉粒的游离
分离花粉粒,应达到以下标准a:成活率较高,发育齐整 b:达到一定的数量 c:无菌,无杂质常用的分离方法有:A是自然散粉法a 固体培养把花药从未开的花中在无菌条件下,直接插接在无菌培养基上,当花药自动裂开时,花粉散落在培养基上,移走花药,使花粉继续培养生长。
b、液体培养这一方法可以和预培养结合进行,一般是将消毒后的花药接种在液体培养基中,在一定的温度条件下进行振荡培养,让花粉从花药中自行散落到培养基中,过筛再除去花药壁等,离心收集花粉将其重新培养在新鲜培养基上。

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