核盘菌诱导下向日葵转录组构建及防卫相关基因功能研究

摘要

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目录

1绪论

1．1．2向日葵菌核病病原及为害症状

1．1．3向日葵菌核病发病规律

1．1．4向日葵菌核病的防治

1．2植物抗病机制研究进展

1．2．1植物抗病类型

1．2．2植物抗病的物质基础

1．2．3植物抗病相关基因

1．2．4植物抗病反应基本信号通路

1．3向日葵抗菌核病机制研究概况

1．4转录组学及其在植物抗病研究中的应用

1．4．1转录组学

1．4．2转录组研究的主要技术

1．4．3RNA-Seq技术在植物抗病方面的应用

1．5研究的目的意义、技术路线及研究内容

1．5．1研究的目的意义

1．5．2技术路线

1．5．3研究的主要内容

2核盘菌诱导下向日葵转录组的构建及分析

2．1实验材料

2．1．1供试菌株及向日葵

2．1．2试剂及培养基

2．1．3供试仪器设备

2．2实验方法

2．2．1核盘菌诱导向日葵及其样品处理

2．2．2向日葵叶、茎、根总RNA提取和质量检测

2．2．3核盘菌诱导向日葵转录组构建

2．2．4序列拼接

2．2．5基因表达注释

2．2．6差异表达基因分析

2．2．7差异表达基因RT-qPCR验证

2．3结果与分析

2．3．2向日葵叶、茎、根RNA的质量检测

2．3．3核盘菌诱导向日葵转录组测序质量分析

2．3．4核盘菌诱导向日葵转录组Unigenes表达差异分析

2．3．5差异表达基因RT-qPCR验证

2．3．6核盘菌诱导向日葵差异表达基因分析

2．4讨论

2．4．1关于转录组测序数据质量

2．4．2关于Unigene的生物信息学注释问题

2．4．3关于核盘菌诱导向日葵差异表达基因分析

2．5本章小结

3核盘菌诱导向日葵防卫及激素信号传导相关基因差异表达

3．1实验材料

3．1．1供试菌株及向日葵

3．1．2试剂及培养基

3．1．3供试仪器

3．2实验方法

3．2．1植物材料培养及接菌处理

3．2．2向日葵总RNA的提取及反转录

3．2．3向日葵防卫及激素信号相关基因RT-qPCR检测

3．3结果与分析

3．3．1内参基因的筛选

3．3．2核盘菌诱导对向日葵防御相关基因转录水平的影响

3．3．3核盘菌诱导对向日葵激素转导途径相关基因的影响

3．4讨论

3．4．1核盘菌对向日葵防卫相关基因的诱导表达

3．4．2核盘菌对向日葵激素信号途径相关基因的诱导

3．5本章小结

4核盘菌诱导下向日葵GSTs家族基因表达特性分析

4．1实验材料

4．1．1供试菌株及向日葵

4．1．2试剂及培养基

4．1．3供试仪器

4．2实验方法

4．2．2植物材料培养及诱导处理

4．2．3向日葵总RNA的提取及反转录

4．2．4不同诱导处理向日葵GSTs的RT-qPCR

4．3结果与分析

4．3．1向日葵GSTs基因cDNA全长特性分析

4．3．2向日葵GSTs多序列比对及系统进化分析

4．3．3向日葵GSTs在不同组织中的表达特性

4．3．4生物和非生物胁迫对向日葵GSTs基因诱导表达分析

4．4讨论

4．4．1向日葵GSTs基因分类

4．4．2向日葵GSTs的系统进化与功能分化

4．5本章小结

5向日葵病程相关蛋白基因HaPR-1的克隆及功能研究

5．1实验材料

5．1．1供试菌种及植物材料

5．1．2供试试剂

5．1．3培养基

5．1．4供试仪器

5．2实验方法

5．2．1向日葵总RNA提取与cDNA合成

5．2．2向日葵HaPR-1基因全长cDNA扩增

5．2．3向日葵HaPR-1基因核酸测序

5．2．4向日葵HaPR-1基因生物信息学分析

5．2．5向日葵HaPR-1基因表达特性分析

5．2．6植物表达载体的构建

5．2．7农杆菌介导的遗传转化

5．2．8烟草转基因植株Nu-HaPR-1的PCR及RT-PCR检测

5．3．3HaPR-1基因cDNA转化大肠杆菌后PCR检测

5．3．4HaPR-1基因全长cDNA及氨基酸序列分析

5．3．5HaPR-1编码蛋白性质与结构特征分析

5．3．6HaPR-1蛋白多序列比对及系统进化

5．3．7HaPR-1基因的表达特性分析

5．3．8HaPR-1烟草转化载体的构建及鉴定

5．3．9转基因烟草Nu-HaPR-1的获得

5．3．10转基因烟草Nu-HaPR-1的检测

5．3．11转基因烟草Nu-HaPR-1抗病性测定

5．4讨论

5．4．1向日葵HaPR-1基因结构

5．4．3向日葵NaPR-1基因功能

5．5本章小结

6向日葵HaGSTta1和HaGSTp3基因克隆及功能研究

6．1实验材料

6．1．1供试菌株及植物材料

6．1．2试剂及培养基

6．1．3供试仪器

6．2实验方法

6．2．4向日葵HaGSTta1和HaGSTp3基因表达特性分析

6．2．5植物表达载体的构建

6．2．6农杆菌介导的遗传转化

6．2．7转基因烟草植株的PCR及RT-PCR检测

6．2．8转基因烟草的抗病性及防御酶活生测定

6．3．3HaGSTta1和HaGSTp3基因cDNA转化大肠杆菌转化子PCR检测

6．3．4HaGSTta1和HaGSTp3基因全长cDNA及氨基酸序列分析

6．3．5HaGSTta1和HaGSTp3编码蛋白性质与结构特征分析

6．3．6HaGSTta1和HaGSTp3编码蛋白多序列比对及系统进化分析

6．3．7HaGSTta1和HaGSTp3基因的表达特性分析

6．3．8HaGSTta1和HaGSTp3烟草转化载体的构建及鉴定

6．3．9转基因烟草Nu-HaGSTta1和Nu-HaGSTp3的获得

6．3．10转基因烟草Nu-HaGSTta1和Nu-HaGSTp3的PCR检测

6．3．11转基因烟草Nu-HaGSTta1和Nu-HaGSTp3的抗病性测定

6．4讨论

6．4．3HaGS7b1和HaGSTp3基因的功能

6．5本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

声明

相关知识

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