一种鉴定茄子品种真实性的方法及其使用的引物组合与流程

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定茄子品种真实性的方法及其使用的引物组合，该方法可应用于生物技术推广服务，为茄子种质资源和品种保护提供技术支持。

背景技术：

茄子是我国重要的蔬菜作物之一，其不仅含有丰富的维生素、蛋白质和钙，还具有保健作用。我国茄子栽培已有近两千年的历史，栽培的品种类型繁多。根据2016年联合国粮食及农业组织(fao)统计显示，我国的茄子播种面积为78.19万公顷，占世界茄子产业的43.59％。近年来，我国茄子种植面积也在逐年增加，由于各地消费习惯和生态气候的不同，已形成了特有的、多样化的生态类型和市场消费区域。目前，国内市场上的茄子品种数量超过400个。茄子种业的健康发展不仅为社会提供优质、安全的茄子品种，同时也为农民脱贫致富提供了良好渠道。然而，由于各省市之间品种审定相互不协调，茄子的品种管理未能有效跟进。由于茄子种业市场知识产权的不完善，导致茄子产区假冒种子、套种f1和亲本的现象还是时有发生，不仅严重打击育种工作者的积极性，也对广大茄子种植户带来了巨大的经济损失。根据《非主要农作物品种登记指南》的要求，品种特性说明和品种dus测试报告中涉及的有关性状如有明确关联基因，可以直接提交dna检测结果。因此，建立一套基于dna指纹有效进行茄子品种真实性鉴定的标准显得尤为重要。

近年来，snp作为第三代分子标记，以其数量多、分布广、遗传稳定等优点受到广泛重视。随着测序技术的发展和测序成本的降低，获得大量茄子重测序数据。基于分析茄子的变异组信息，可以挖掘更加稳定高效的snp位点。采用等位基因竞争性特异pcr法，可以开发其特异性引物，最终获得样本在snp位点的基因型。

目前，我国茄子品种鉴定的dna分子检测主要依据ssr分子标记法，但是ssr引物的研发没有参考茄子基因组变异组信息，存在不真实变异情况；ssr引物筛选所用的品种数量较少，且不能代表我国当前市场的销售品种；另外ssr检测方式极易导致不真实、假阳性、假阴性结果；不能适应自动化、高通量、大规模的要求。与ssr标记相比，snp具有多个方面的优势：变异清晰稳定容易检测，真实性准确性高；每个作物均有数以百万计snp可供选择；适宜于高通量、低成本、自动化快速检测；snp分型无需对照品种，以准确的碱基呈现结果，可减少人为误差。

技术实现要素：

本发明的目的是鉴定茄子品种，尤其是370个茄子品种。

本发明首先保护snp位点组合，可包括茄子基因组的48个snp位点；所述48个snp位点如下：smsnp001位点为scaffordsme2.5_00002.1的第373524位核苷酸；smsnp002位点为scaffordsme2.5_00004.1的第161840位核苷酸；smsnp003位点为scaffordsme2.5_00006.1的第203053位核苷酸；smsnp004位点为scaffordsme2.5_00009.1的第431955位核苷酸；smsnp005位点为scaffordsme2.5_00010.1的第169994位核苷酸；smsnp006位点为scaffordsme2.5_00027.1的第248462位核苷酸；smsnp007位点为scaffordsme2.5_00032.1的第19910位核苷酸；smsnp011位点为scaffordsme2.5_00066.1的第113248位核苷酸；smsnp012位点为scaffordsme2.5_00097.1的第47096位核苷酸；smsnp013位点为scaffordsme2.5_00121.1的第28511位核苷酸；smsnp016位点为scaffordsme2.5_00170.1的第63393位核苷酸；smsnp021位点为scaffordsme2.5_00216.1的第212971位核苷酸；smsnp024位点为scaffordsme2.5_00248.1的第117400位核苷酸；smsnp027位点为scaffordsme2.5_00398.1的第277799位核苷酸；smsnp030位点为scaffordsme2.5_00474.1的第136912位核苷酸；smsnp031位点为scaffordsme2.5_00475.1的第42143位核苷酸；smsnp035位点为scaffordsme2.5_00544.1的第40150位核苷酸；smsnp038位点为scaffordsme2.5_00632.1的第156023位核苷酸；smsnp042位点为scaffordsme2.5_00779.1的第102536位核苷酸；smsnp045位点为scaffordsme2.5_00830.1的第42228位核苷酸；smsnp055位点为scaffordsme2.5_01033.1的第46774位核苷酸；smsnp062位点为scaffordsme2.5_01164.1的第79852位核苷酸；smsnp078位点为scaffordsme2.5_01524.1的第79884位核苷酸；smsnp089位点为scaffordsme2.5_01952.1的第66166位核苷酸；smsnp091位点为scaffordsme2.5_01975.1的第34056位核苷酸；smsnp094位点为scaffordsme2.5_02088.1的第33644位核苷酸；smsnp097位点为scaffordsme2.5_02188.1的第62177位核苷酸；smsnp105位点为scaffordsme2.5_02691.1的第21028位核苷酸；smsnp107位点为scaffordsme2.5_02787.1的第8485位核苷酸；smsnp112位点为scaffordsme2.5_03121.1的第2761位核苷酸；smsnp114位点为scaffordsme2.5_03204.1的第62156位核苷酸；smsnp119位点为scaffordsme2.5_03307.1的第12208位核苷酸；smsnp128位点为scaffordsme2.5_03875.1的第38662位核苷酸；smsnp135位点为scaffordsme2.5_04296.1的第47115位核苷酸；smsnp140位点为scaffordsme2.5_04425.1的第7882位核苷酸；smsnp142位点为scaffordsme2.5_04541.1的第32932位核苷酸；smsnp146位点为scaffordsme2.5_04709.1的第15250位核苷酸；smsnp151位点为scaffordsme2.5_04909.1的第36446位核苷酸；smsnp161位点为scaffordsme2.5_05907.1的第24257位核苷酸；smsnp168位点为scaffordsme2.5_06427.1的第9613位核苷酸；smsnp173位点为scaffordsme2.5_06735.1的第10414位核苷酸；smsnp186位点为scaffordsme2.5_08231.1的第27728位核苷酸；smsnp196位点为scaffordsme2.5_09402.1的第3501位核苷酸；smsnp201位点为scaffordsme2.5_09994.1的第15682位核苷酸；smsnp205位点为scaffordsme2.5_11259.1的第10354位核苷酸；smsnp206位点为scaffordsme2.5_11468.1的第31976位核苷酸；smsnp216位点为scaffordsme2.5_18065.1的第3611位核苷酸；smsnp217位点为scaffordsme2.5_18208.1的第16094位核苷酸。

所述snp位点组合具体可由上述48个snp位点组成。

本发明还保护引物组合，可包括用于扩增所述smsnp001位点的引物组1、用于扩增所述smsnp002位点的引物组2、用于扩增所述smsnp003位点的引物组3、用于扩增所述smsnp004位点的引物组4、用于扩增所述smsnp005位点的引物组5、用于扩增所述smsnp006位点的引物组6、用于扩增所述smsnp007位点的引物组7、用于扩增所述smsnp011位点的引物组8、用于扩增所述smsnp012位点的引物组9、用于扩增所述smsnp013位点的引物组10、用于扩增所述smsnp016位点的引物组11、用于扩增所述smsnp021位点的引物组12、用于扩增所述smsnp024位点的引物组13、用于扩增所述smsnp027位点的引物组14、用于扩增所述smsnp030位点的引物组15、用于扩增所述smsnp031位点的引物组16、用于扩增所述smsnp035位点的引物组17、用于扩增所述smsnp038位点的引物组18、用于扩增所述smsnp042位点的引物组19、用于扩增所述smsnp045位点的引物组20、用于扩增所述smsnp055位点的引物组21、用于扩增所述smsnp062位点的引物组22、用于扩增所述smsnp078位点的引物组23、用于扩增所述smsnp089位点的引物组24、用于扩增所述smsnp091位点的引物组25、用于扩增所述smsnp094位点的引物组26、用于扩增所述smsnp097位点的引物组27、用于扩增所述smsnp105位点的引物组28、用于扩增所述smsnp107位点的引物组29、用于扩增所述smsnp112位点的引物组30、用于扩增所述smsnp114位点的引物组31、用于扩增所述smsnp119位点的引物组32、用于扩增所述smsnp128位点的引物组33、用于扩增所述smsnp135位点的引物组34、用于扩增所述smsnp140位点的引物组35、用于扩增所述smsnp142位点的引物组36、用于扩增所述smsnp146位点的引物组37、用于扩增所述smsnp151位点的引物组38、用于扩增所述smsnp161位点的引物组39、用于扩增所述smsnp168位点的引物组40、用于扩增所述smsnp173位点的引物组41、用于扩增所述smsnp186位点的引物组42、用于扩增所述smsnp196位点的引物组43、用于扩增所述smsnp201位点的引物组44、用于扩增所述smsnp205位点的引物组45、用于扩增所述smsnp206位点的引物组46、用于扩增所述smsnp216位点的引物组47和用于扩增所述smsnp217位点的引物组48。

所述引物组合中，所述引物组1可由seqidno:1所示的正向引物01f1、seqidno:2所示的正向引物01f2和seqidno:3所示的反向引物01r组成。所述引物组2可由seqidno:4所示的正向引物02f1、seqidno:5所示的正向引物02f2和seqidno:6所示的反向引物02r组成。所述引物组3可由seqidno:7所示的正向引物03f1、seqidno:8所示的正向引物03f2和seqidno:9所示的反向引物03r组成。所述引物组4可由seqidno:10所示的正向引物04f1、seqidno:11所示的正向引物04f2和seqidno:12所示的反向引物04r组成。所述引物组5可由seqidno:13所示的正向引物05f1、seqidno:14所示的正向引物05f2和seqidno:15所示的反向引物05r组成。所述引物组6可由seqidno:16所示的正向引物06f1、seqidno:17所示的正向引物06f2和seqidno:18所示的反向引物06r组成。所述引物组7可由seqidno:19所示的正向引物07f1、seqidno:20所示的正向引物07f2和seqidno:21所示的反向引物07r组成。所述引物组8可由seqidno:22所示的正向引物08f1、seqidno:23所示的正向引物08f2和seqidno:24所示的反向引物08r组成。所述引物组9可由seqidno:25所示的正向引物09f1、seqidno:26所示的正向引物09f2和seqidno:27所示的反向引物09r组成。所述引物组10可由seqidno:28所示的正向引物10f1、seqidno:29所示的正向引物10f2和seqidno:30所示的反向引物10r组成。所述引物组11可由seqidno:31所示的正向引物11f1、seqidno:32所示的正向引物11f2和seqidno:33所示的反向引物11r组成。所述引物组12可由seqidno:34所示的正向引物12f1、seqidno:35所示的正向引物12f2和seqidno:36所示的反向引物12r组成。所述引物组13可由seqidno:37所示的正向引物13f1、seqidno:38所示的正向引物13f2和seqidno:39所示的反向引物13r组成。所述引物组14可由seqidno:40所示的正向引物14f1、seqidno:41所示的正向引物14f2和seqidno:42所示的反向引物14r组成。所述引物组15可由seqidno:43所示的正向引物15f1、seqidno:44所示的正向引物15f2和seqidno:45所示的反向引物15r组成。所述引物组16可由seqidno:46所示的正向引物16f1、seqidno:47所示的正向引物16f2和seqidno:48所示的反向引物16r组成。所述引物组17可由seqidno:49所示的正向引物17f1、seqidno:50所示的正向引物17f2和seqidno:51所示的反向引物17r组成。所述引物组18可由seqidno:52所示的正向引物18f1、seqidno:53所示的正向引物18f2和seqidno:54所示的反向引物18r组成。所述引物组19可由seqidno:55所示的正向引物19f1、seqidno:56所示的正向引物19f2和seqidno:57所示的反向引物19r组成。所述引物组20可由seqidno:58所示的正向引物20f1、seqidno:59所示的正向引物20f2和seqidno:60所示的反向引物20r组成。所述引物组21可由seqidno:61所示的正向引物21f1、seqidno:62所示的正向引物21f2和seqidno:63所示的反向引物21r组成。所述引物组22可由seqidno:64所示的正向引物22f1、seqidno:65所示的正向引物22f2和seqidno:66所示的反向引物22r组成。所述引物组23可由seqidno:67所示的正向引物23f1、seqidno:68所示的正向引物23f2和seqidno:69所示的反向引物23r组成。所述引物组24可由seqidno:70所示的正向引物24f1、seqidno:71所示的正向引物24f2和seqidno:72所示的反向引物24r组成。所述引物组25可由seqidno:73所示的正向引物25f1、seqidno:74所示的正向引物25f2和seqidno:75所示的反向引物25r组成。所述引物组26可由seqidno:76所示的正向引物26f1、seqidno:77所示的正向引物26f2和seqidno:78所示的反向引物26r组成。所述引物组27可由seqidno:79所示的正向引物27f1、seqidno:80所示的正向引物27f2和seqidno:81所示的反向引物27r组成。所述引物组28可由seqidno:82所示的正向引物28f1、seqidno:83所示的正向引物28f2和seqidno:84所示的反向引物28r组成。所述引物组29可由seqidno:85所示的正向引物29f1、seqidno:86所示的正向引物29f2和seqidno:87所示的反向引物29r组成。所述引物组30可由seqidno:88所示的正向引物30f1、seqidno:89所示的正向引物30f2和seqidno:90所示的反向引物30r组成。所述引物组31可由seqidno:91所示的正向引物31f1、seqidno:92所示的正向引物31f2和seqidno:93所示的反向引物31r组成。所述引物组32可由seqidno:94所示的正向引物32f1、seqidno:95所示的正向引物32f2和seqidno:96所示的反向引物32r组成。所述引物组33可由seqidno:97所示的正向引物33f1、seqidno:98所示的正向引物33f2和seqidno:99所示的反向引物33r组成。所述引物组34可由seqidno:100所示的正向引物34f1、seqidno:101所示的正向引物34f2和seqidno:102所示的反向引物34r组成。所述引物组35可由seqidno:103所示的正向引物35f1、seqidno:104所示的正向引物35f2和seqidno:105所示的反向引物35r组成。所述引物组36可由seqidno:106所示的正向引物36f1、seqidno:107所示的正向引物36f2和seqidno:108所示的反向引物36r组成。所述引物组37可由seqidno:109所示的正向引物37f1、seqidno:110所示的正向引物37f2和seqidno:111所示的反向引物37r组成。所述引物组38可由seqidno:112所示的正向引物38f1、seqidno:113所示的正向引物38f2和seqidno:114所示的反向引物38r组成。所述引物组39可由seqidno:115所示的正向引物39f1、seqidno:116所示的正向引物39f2和seqidno:117所示的反向引物39r组成。所述引物组40可由seqidno:118所示的正向引物40f1、seqidno:119所示的正向引物40f2和seqidno:120所示的反向引物40r组成。所述引物组41可由seqidno:121所示的正向引物41f1、seqidno:122所示的正向引物41f2和seqidno:123所示的反向引物41r组成。所述引物组42可由seqidno:124所示的正向引物42f1、seqidno:125所示的正向引物42f2和seqidno:126所示的反向引物42r组成。所述引物组43可由seqidno:127所示的正向引物43f1、seqidno:128所示的正向引物43f2和seqidno:129所示的反向引物43r组成。所述引物组44可由seqidno:130所示的正向引物44f1、seqidno:131所示的正向引物44f2和seqidno:132所示的反向引物44r组成。所述引物组45可由seqidno:133所示的正向引物45f1、seqidno:134所示的正向引物45f2和seqidno:135所示的反向引物45r组成。所述引物组46可由seqidno:136所示的正向引物46f1、seqidno:137所示的正向引物46f2和seqidno:138所示的反向引物46r组成。所述引物组47可由seqidno:139所示的正向引物47f1、seqidno:140所示的正向引物47f2和seqidno:141所示的反向引物47r组成。所述引物组48可由seqidno:142所示的正向引物48f1、seqidno:143所示的正向引物48f2和seqidno:144所示的反向引物48r组成。

所述引物组合中，所述引物组1可由seqidno:1自5’末端起第22至45位所示的正向引物01f1、seqidno:2自5’末端起第22至45位所示的正向引物01f2和seqidno:3所示的反向引物01r组成。所述引物组2可由seqidno:4自5’末端起第22至46位所示的正向引物02f1、seqidno:5自5’末端起第22至47位所示的正向引物02f2和seqidno:6所示的反向引物02r组成。所述引物组3可由seqidno:7自5’末端起第22至51位所示的正向引物03f1、seqidno:8自5’末端起第22至50位所示的正向引物03f2和seqidno:9所示的反向引物03r组成。所述引物组4可由seqidno:10自5’末端起第22至52位所示的正向引物04f1、seqidno:11自5’末端起第22至54位所示的正向引物04f2和seqidno:12所示的反向引物04r组成。所述引物组5可由seqidno:13自5’末端起第22至50位所示的正向引物05f1、seqidno:14自5’末端起第22至51位所示的正向引物05f2和seqidno:15所示的反向引物05r组成。所述引物组6可由seqidno:16自5’末端起第22至46位所示的正向引物06f1、seqidno:17自5’末端起第22至45位所示的正向引物06f2和seqidno:18所示的反向引物06r组成。所述引物组7可由seqidno:19自5’末端起第22至53位所示的正向引物07f1、seqidno:20自5’末端起第22至50位所示的正向引物07f2和seqidno:21所示的反向引物07r组成。所述引物组8可由seqidno:22自5’末端起第22至53位所示的正向引物08f1、seqidno:23自5’末端起第22至53位所示的正向引物08f2和seqidno:24所示的反向引物08r组成。所述引物组9可由seqidno:25自5’末端起第22至46位所示的正向引物09f1、seqidno:26自5’末端起第22至46位所示的正向引物09f2和seqidno:27所示的反向引物09r组成。所述引物组10可由seqidno:28自5’末端起第22至46位所示的正向引物10f1、seqidno:29自5’末端起第22至46位所示的正向引物10f2和seqidno:30所示的反向引物10r组成。所述引物组11可由seqidno:31自5’末端起第22至45位所示的正向引物11f1、seqidno:32自5’末端起第22至46位所示的正向引物11f2和seqidno:33所示的反向引物11r组成。所述引物组12可由seqidno:34自5’末端起第22至57位所示的正向引物12f1、seqidno:35自5’末端起第22至56位所示的正向引物12f2和seqidno:36所示的反向引物12r组成。所述引物组13可由seqidno:37自5’末端起第22至51位所示的正向引物13f1、seqidno:38自5’末端起第22至50位所示的正向引物13f2和seqidno:39所示的反向引物13r组成。所述引物组14可由seqidno:40自5’末端起第22至46位所示的正向引物14f1、seqidno:41自5’末端起第22至47位所示的正向引物14f2和seqidno:42所示的反向引物14r组成。所述引物组15可由seqidno:43自5’末端起第22至54位所示的正向引物15f1、seqidno:44自5’末端起第22至54位所示的正向引物15f2和seqidno:45所示的反向引物15r组成。所述引物组16可由seqidno:46自5’末端起第22至49位所示的正向引物16f1、seqidno:47自5’末端起第22至51位所示的正向引物16f2和seqidno:48所示的反向引物16r组成。所述引物组17可由seqidno:49自5’末端起第22至48位所示的正向引物17f1、seqidno:50自5’末端起第22至49位所示的正向引物17f2和seqidno:51所示的反向引物17r组成。所述引物组18可由seqidno:52自5’末端起第22至46位所示的正向引物18f1、seqidno:53自5’末端起第22至47位所示的正向引物18f2和seqidno:54所示的反向引物18r组成。所述引物组19可由seqidno:55自5’末端起第22至46位所示的正向引物19f1、seqidno:56自5’末端起第22至47位所示的正向引物19f2和seqidno:57所示的反向引物19r组成。所述引物组20可由seqidno:58自5’末端起第22至52位所示的正向引物20f1、seqidno:59自5’末端起第22至51位所示的正向引物20f2和seqidno:60所示的反向引物20r组成。所述引物组21可由seqidno:61自5’末端起第22至48位所示的正向引物21f1、seqidno:62自5’末端起第22至49位所示的正向引物21f2和seqidno:63所示的反向引物21r组成。所述引物组22可由seqidno:64自5’末端起第22至44位所示的正向引物22f1、seqidno:65自5’末端起第22至46位所示的正向引物22f2和seqidno:66所示的反向引物22r组成。所述引物组23可由seqidno:67自5’末端起第22至49位所示的正向引物23f1、seqidno:68自5’末端起第22至51位所示的正向引物23f2和seqidno:69所示的反向引物23r组成。所述引物组24可由seqidno:70自5’末端起第22至51位所示的正向引物24f1、seqidno:71自5’末端起第22至50位所示的正向引物24f2和seqidno:72所示的反向引物24r组成。所述引物组25可由seqidno:73自5’末端起第22至51位所示的正向引物25f1、seqidno:74自5’末端起第22至49位所示的正向引物25f2和seqidno:75所示的反向引物25r组成。所述引物组26可由seqidno:76自5’末端起第22至49位所示的正向引物26f1、seqidno:77自5’末端起第22至48位所示的正向引物26f2和seqidno:78所示的反向引物26r组成。所述引物组27可由seqidno:79自5’末端起第22至54位所示的正向引物27f1、seqidno:80自5’末端起第22至53位所示的正向引物27f2和seqidno:81所示的反向引物27r组成。所述引物组28可由seqidno:82自5’末端起第22至48位所示的正向引物28f1、seqidno:83自5’末端起第22至46位所示的正向引物28f2和seqidno:84所示的反向引物28r组成。所述引物组29可由seqidno:85自5’末端起第22至44位所示的正向引物29f1、seqidno:86自5’末端起第22至43位所示的正向引物29f2和seqidno:87所示的反向引物29r组成。所述引物组30可由seqidno:88自5’末端起第22至44位所示的正向引物30f1、seqidno:89自5’末端起第22至46位所示的正向引物30f2和seqidno:90所示的反向引物30r组成。所述引物组31可由seqidno:91自5’末端起第22至47位所示的正向引物31f1、seqidno:92自5’末端起第22至46位所示的正向引物31f2和seqidno:93所示的反向引物31r组成。所述引物组32可由seqidno:94自5’末端起第22至47位所示的正向引物32f1、seqidno:95自5’末端起第22至48位所示的正向引物32f2和seqidno:96所示的反向引物32r组成。所述引物组33可由seqidno:97自5’末端起第22至45位所示的正向引物33f1、seqidno:98自5’末端起第22至44位所示的正向引物33f2和seqidno:99所示的反向引物33r组成。所述引物组34可由seqidno:100自5’末端起第22至39位所示的正向引物34f1、seqidno:101自5’末端起第22至40位所示的正向引物34f2和seqidno:102所示的反向引物34r组成。所述引物组35可由seqidno:103自5’末端起第22至46位所示的正向引物35f1、seqidno:104自5’末端起第22至48位所示的正向引物35f2和seqidno:105所示的反向引物35r组成。所述引物组36可由seqidno:106自5’末端起第22至43位所示的正向引物36f1、seqidno:107自5’末端起第22至46位所示的正向引物36f2和seqidno:108所示的反向引物36r组成。所述引物组37可由seqidno:109自5’末端起第22至46位所示的正向引物37f1、seqidno:110自5’末端起第22至48位所示的正向引物37f2和seqidno:111所示的反向引物37r组成。所述引物组38可由seqidno:112自5’末端起第22至48位所示的正向引物38f1、seqidno:113自5’末端起第22至48位所示的正向引物38f2和seqidno:114所示的反向引物38r组成。所述引物组39可由seqidno:115自5’末端起第22至53位所示的正向引物39f1、seqidno:116自5’末端起第22至54位所示的正向引物39f2和seqidno:117所示的反向引物39r组成。所述引物组40可由seqidno:118自5’末端起第22至39位所示的正向引物40f1、seqidno:119自5’末端起第22至39位所示的正向引物40f2和seqidno:120所示的反向引物40r组成。所述引物组41可由seqidno:121自5’末端起第22至51位所示的正向引物41f1、seqidno:122自5’末端起第22至49位所示的正向引物41f2和seqidno:123所示的反向引物41r组成。所述引物组42可由seqidno:124自5’末端起第22至54位所示的正向引物42f1、seqidno:125自5’末端起第22至54位所示的正向引物42f2和seqidno:126所示的反向引物42r组成。所述引物组43可由seqidno:127自5’末端起第22至48位所示的正向引物43f1、seqidno:128自5’末端起第22至46位所示的正向引物43f2和seqidno:129所示的反向引物43r组成。所述引物组44可由seqidno:130自5’末端起第22至52位所示的正向引物44f1、seqidno:131自5’末端起第22至54位所示的正向引物44f2和seqidno:132所示的反向引物44r组成。所述引物组45可由seqidno:133自5’末端起第22至52位所示的正向引物45f1、seqidno:134自5’末端起第22至54位所示的正向引物45f2和seqidno:135所示的反向引物45r组成。所述引物组46可由seqidno:136自5’末端起第22至48位所示的正向引物46f1、seqidno:137自5’末端起第22至50位所示的正向引物46f2和seqidno:138所示的反向引物46r组成。所述引物组47可由seqidno:139自5’末端起第22至45位所示的正向引物47f1、seqidno:140自5’末端起第22至46位所示的正向引物47f2和seqidno:141所示的反向引物47r组成。所述引物组48可由seqidno:142自5’末端起第22至47位所示的正向引物48f1、seqidno:143自5’末端起第22至48位所示的正向引物48f2和seqidno:144所示的反向引物48r组成。

上述任一所述引物组中，名称中含有“f1”的引物、名称中含有“f2”的引物和名称中含有“r”的引物的摩尔比具体可为2:2:5。

上述任一所述引物组合具体可由所述引物组1—所述引物组48组成。

上文中，序列表中序列1自5′末端起第1至21位所示的核苷酸序列为荧光标签序列(即fam荧光标签序列)，荧光信号具体为蓝色。序列表中序列2自5′末端起第1至21位所示的核苷酸序列也为荧光标签序列(即hex荧光标签序列)，荧光信号具体为红色。

含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围。

所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。所述试剂盒的制备方法包括将上述任一所述引物组中的各条引物分别单独包装的步骤。

所述试剂盒的应用也属于本发明的保护范围。所述试剂盒的应用可为x3)或x4)：x3)鉴定茄子品种；x4)鉴别茄子品种真伪性。

本发明还保护上述任一所述snp位点组合或上述任一所述引物组合的应用，可为x1)至x4)中的任一种：x1)制备用于鉴定茄子品种的试剂盒；x2)制备用于鉴别茄子品种真伪性的试剂盒；x3)鉴定茄子品种；x4)鉴别茄子品种真伪性。

本发明还保护一种鉴定待测茄子属于370个茄子品种中哪个品种的方法，包括如下步骤：分别检测待测茄子和370个茄子品种基于所述48个snp位点的基因型，然后进行如下判断：如果待测茄子基于所述48个snp位点的基因型和370个茄子品种中某品种基于所述48个snp位点的基因型完全一致，则待测茄子与该茄子品种属于同一个品种；如果待测茄子基于所述48个snp位点的基因型和370个茄子品种中各个品种基于所述48个snp位点的基因型均不一致，则待测茄子与370个茄子品种的品种均不相同。

上述方法中，所述“检测待测茄子和370个茄子品种基于所述48个snp位点的基因型”的步骤可如下：

(1)分别以待测茄子的基因组dna和370个茄子品种的基因组dna为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；

(2)完成步骤(1)后，采用仪器检测pcr扩增产物的荧光信号，根据荧光信号的颜色获得待测茄子和370个茄子品种基于所述48个snp位点的基因型。

上述方法中，所述“检测检测待测茄子和370个茄子品种基于所述48个snp位点的基因型”的步骤可如下：

(1)分别以待测茄子的基因组dna和370个茄子品种的基因组dna为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；

(2)取步骤(1)得到的pcr扩增产物，测序；

(3)根据步骤(2)得到的测序结果，获得待测茄子和370个茄子品种基于所述48个snp位点的基因型。

本发明还保护一种鉴定待测茄子属于370个茄子品种中哪个品种的方法，可包括如下步骤：

(1)以待测茄子的基因组dna为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；以标准茄子品种群中的各个茄子品种的基因组dna为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；所述标准茄子品种群由370个茄子品种组成；

(2)将待测茄子得到的各个pcr扩增产物与每个标准茄子品种对应的pcr扩增产物进行聚类分析，聚类分析中待测茄子与哪个标准茄子品种为同一类，该待测茄子与该标准茄子品种即属于同一个品种。

上述任一所述370个茄子品种可为圣茄1号、圣茄3号、盛圆一号圆茄、超亮黑冠、超亮黑峰圆茄、17z23、17z24、17z25、17z27、黑又亮、16-359、北京黑茄王、黑帅、兴圆3号、日本黑茄王、黑园207、黑园209、黑玉三号、国益106、国益604、墨星-16、超亮黑霸、超早黑圆宝、黑亮王、yc17-5、yc17-6、yc17-9、acy8-2017、acy24-2017、acy50-2017、acy69-2017、acy113-2017、acy128-2017、6*7-2017、紫帅七号、超九叶茄、九叶茄、精选邯郸大圆茄、黑圆茄、新研五号、新研三号、黑神1号、盛圆二号、黑元帅七号、黑丽圆307、天宝圆茄、墨冠圆茄、改良短把黑茄、改良墨宝、永红黑硕圆茄、睿丰圆茄、黑盛圆茄、京茄黑宝、京茄黑骏、tc-12、黑大帅、黑大帅超九叶、紫圆茄、黑优亮、蓟农快圆茄、金太阳、隔叶茄、盛圆三号、紫丽圆1183、紫红圆茄、黄色茄、灰圆茄、qz-01、18yy-3、嘉信精选牛心茄、优选牛心茄、吉星2号、北斗早冠、紫丽灯310、甜糯烧烤茄、紫冠香茄、睿丰绿冠茄、汉旺八号茄子、汉旺七号茄子、松田紫罐茄、盛冈515长茄、兴茄王、黑钸莉、圣禧、航丰紫红鼎、松田双优、早红茄1号、十吨茄、精选紫罐茄、精品紫罐茄、紫冠军、华星早茄、群兴早罐王、特大牛心茄(群兴)、紫露彩茄子、洁白玉、白罐王、白云、糙青茄、盛美、大绿果、通茄一号、天顿绿杂、大田绿丰、北斗绿王、绿茄、早罐2318、绿罐、嫩绿绿茄、绿杂209、绿丰2033、绿杂鼎丰、秦优绿罐、绿衣天使、嘉信绿罐茄、绿茄王、翠冠绿茄、新绿秀1号、青丰一号、萨曼莎，10-912、安吉拉、萨拉波娃，10-203、紫塔、安德烈、sharapova，10-203、新荣、aretussa、qz-03、qz-04、qz-06、qz-08、qz-05、18yy-6、京茄13号、京茄10号、京茄204号、京茄218、川茄1号、京茄黑霸、京茄黑龙王、sy83、sy112、tz16062、m02、京茄315、松田烧烤茄、非洲黑大长、黑燕1号、黑燕2号、黑又长茄子、黑亮长茄、法国长茄、顺金一号、黑又亮长茄、璐真长茄、黑剑长茄、美娇子五号、南韩黑蛟龙长茄、超级黑先锋、黑美人、黑仙子、黑无敌、黑霸王、萬豪9868、墨茄、黑剑一号、嘉信黑长茄、黑娇子长茄、黑帅茄、黑将军、墨玉长茄、黑龙黑长茄、黑油亮、海丰长茄1号、海丰长茄3号、qz04、qz05、qz06、ce27-2017、ce33-2017、ce47-2017、龙杂茄11号、龙杂茄12号、农丰三号紫长茄、韩国紫龙、天杂1818、4010茄子、15040茄子、17z29、17z30、17z31、17z32、17z33、17z35、17z36、东京2号、紫长城、紫龙、盼玉神茄、海丰长茄2号、sh18-2、sh18-3、sh18-6、qz01、qz02、qz03、黑龙长美、大帅长茄、黑帅长茄、天优长茄、天优玉颈、黑娇长茄、丽丰长茄、西雅图516长茄、黑旋风长茄、黑飞狐长茄、黑衣天使长茄、高科墨茄、万吨早茄、长征1号长茄、长征3号长茄、昊天黑亮剑、盛冈301长茄、盛冈313长茄、盛冈512长茄、盛冈712长茄、盛冈713长茄、黑紫龙长茄、永红龙悦长茄、绿萼长茄1277、黑衣天使早茄、黑妞、墨玉烧烤茄、宝丽娇长茄、黑亮85长茄、天娇长茄、日本剑龙、美国黑龙王、荷兰瑞丽、布尼塔、汉旺十号长茄、墨龙长茄、墨宝烧烤茄、东方娇龙、长黑金228、传奇天宝、神州黑龙、9318长茄、长杂8号、长杂218、京茄808、京茄16、京茄62、京茄320、亚蔬早d茄、天龙8号、亚蔬17-1墨茄、亚蔬16-1长茄、亚蔬16-2长茄、亚蔬16-4长茄、环球明月、农夫长茄、野狼头长茄、精选9318、京茄20号、黑金龙、超布尔、群兴黑芙蓉、富贵黑长茄、黑金茄子、娜塔丽、京茄204、京茄15号、2029-2017、2760-2017、2160-2017、汉旺11号、tc-2、tc-5、tc-7、tc-10、tc-11、东洋黑川、布丽塔、俊朗、科斯迪、18yy-1、18yy-4、18yy-5、18yy-9、农夫2号、紫荣6号长茄、长丰紫红长茄、福将紫红长茄、紫荣8号、沈茄六号、早熟三月茄、1560、16101、喜贵人、广佳紫红长茄、嘉信紫红长茄、紫冠先锋、盼玉长城、春晨特早红茄、春晨早红茄、天丰3号紫长茄、杭茄2010、维特长茄、紫红长茄、大田红枫、九源广茄、松田大红鼎、先丰8号、粵茄红紫龙、新育特快茄、京茄30号、国茄红秀、松田雪茄、白马王子、白天使长茄、睿丰玉长茄、汉琦白玉、象牙白茄、沈茄七号、天顿绿长茄、北斗绿棒、绿宝长茄、竹丝茄、绿美特、1618、翡翠绿茄、竹花春花茄、昊天花茄子、昊天银花、红花郎、胭脂花茄、玫瑰紫花茄、法国黑长茄、松田绿霸、南洋黑佳人、盛冈517长茄、贝里斯、改良长野狼、亮剑111、京茄32号、京茄171、新娘长茄、新天秀201、江南紫长茄、黑龙王子、绿柄黑龙、黑又亮茄子、早熟黑长茄、璐真线茄、北国超龙、关东早美818、睿丰紫红长茄、浙茄1号、引茄1号、群兴紫红杭茄、杭茄一号、法兰德骄龙、丰田一号、丰田二号、丰田五号、佳美紫红长茄、浙茄5号、红美玉和松田白芙蓉。

上述任一所述的方法中，“分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行pcr扩增”的反应程序具体可为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touchdown程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。若pcr扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。

本发明建立了基于等位基因竞争性特异pcr法鉴定茄子品种真实性的dna指纹数据库，可用于对茄子品种在种子或幼苗期进行早期鉴定，保证品种的真实性，切实保护生产者和育种家的权益，并为茄子种质资源和新品种保护提供技术支持。本发明提供的方法既可以对未知茄子品种进行鉴定，也可以对已知品种的真实性进行鉴定。本发明提供的方法具有高通量、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力等有点，具有十分广阔的应用前景。本发明具有重要的应用价值。

附图说明

图1为48个引物组在部分供试茄子品种中的snp分型效果。

图2为建立在48个snp引物组上的370个供试茄子品种的聚类图。

图3为snp标记个数(即snp位点个数)与区分370个供试茄子品种的关系图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。

以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、用于鉴定茄子品种真实性的引物组合的获得

一、48个snp位点的发现

本发明基于43份茄子代表资源的重测序数据，获得48个snp位点。这43份茄子代表资源类型丰富，涵盖黑紫长棒型茄子(4份)、圆果型茄子(10份)、紫红色长条型茄子(5份)、紫红色卵型茄子(8份)、紫红色长果型茄子(4份)、紫色卵圆型茄子(5份)和紫色棒型茄子(7份)，基本包括了茄子主要的生态类型，在农艺性状方面具有较高的遗传多样性，尽可能多地体现了种质代表性。

具体的，snp位点的筛选标准如下：在全基因组范围内选择位置均匀、多态性好、杂合度小、maf>0.3、pca聚类效果好、区分度高且两翼50bp序列保守(无indel，无ssr，无其它snp)的snp位点。

48个snp位点的基本信息详见表1中第1至4列。其中snp位点在scaffold上的位置是基于茄子67/3参考基因组序列比对确定的(下载地址为：ftp://ftp.kazusa.or.jp/pub/eggplant/)。

表1.48个snp位点基本信息

二、用于鉴定茄子品种真实性的引物组合的获得

根据步骤一发现的48个snp位点，开发出具有较高的多态性信息量(pic值)(见表1中第5列)且适合用等位基因竞争性特异pcr法鉴定茄子品种真实性的引物组合。

引物组合由48个引物组组成。每个引物组的名称见表2中第2列。每个引物组由3条引物序列组成，用于扩增一个snp位点。48个引物组中各个引物的核苷酸序列如表2中第4列所示。

表2.48个引物组及其引物的核苷酸序列

注：单下划线为fam荧光标签序列，双下划线为hex荧光标签序列。

实施例2、实施例1开发的引物组合的有效性检验

随机选择370个供试茄子品种对实施例1开发的引物组合的有效性检验。

370个供试茄子品种的基本信息见表3。370个供试茄子品种均为常见的优良品种或部分国外引进品种。

表3.370个供试茄子品种的基本信息

1、供试茄子品种的基因组dna的获得

采用ctab法分别提取370个供试茄子品种的叶片(混取30粒种子的真叶)的基因组dna，得到供试茄子品种的基因组dna。

供试茄子品种的基因组dna的质量和浓度均须满足pcr要求，达标标准为：琼脂糖电泳显示dna条带单一，没有明显弥散；紫外分光光度计nanodrop2000(thermo)检测a260/a280比值在1.8左右，a260/a230比值大于1.8；供试茄子品种的基因组dna的浓度在20-30ng/μl。

2、分别以370个供试茄子品种的基因组dna为模板，分别采用48个引物组进行pcr扩增，得到pcr扩增产物。各个pcr反应体系中，名称中含有“f1”的引物、名称中含有“f2”的引物和名称中含有“r”的引物的浓度比为2:2:5。

反应程序为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touchdown程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。

3、完成步骤2后，待pcr扩增产物温度降至40℃以下时通过酶标仪的fam、hex光束扫描读取荧光值(fam荧光标签序列在激发光485nm，发射光520nm波长下观察读值，hex荧光标签序列在激发光528nm，发射光560nm波长下观察读值)，根据荧光信号颜色判断370个供试茄子品种基于每个snp位点的基因型。具体的判断原则如下：如果某供试茄子品种基于某snp位点显示蓝色荧光信号，则该供试茄子品种基于该snp位点的基因型为“扩增该snp位点且名称中含有“f1”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”纯合型；如果某供试茄子品种基于某snp位点显示红色荧光信号，则该供试茄子品种基于该snp位点的基因型为“扩增该snp位点且名称中含有“f2”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”纯合型；如果某供试茄子品种基于某snp位点显示绿色荧光信号，则该供试茄子品种基于该snp位点的基因型为杂合型，一个碱基为“扩增该snp位点且名称中含有“f1”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”，另一个碱基“扩增该snp位点且名称中含有“f2”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”。

需要说明的是，若pcr扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。

部分结果见图1。结果表明，各个引物组在供试茄子品种中可以得到很好的分型效果。

4、聚类分析

根据370个供试茄子品种基于48个snp位点的基因型，利用minimarker和mega7软件对370个供试茄子品种进行聚类分析。

建立在48个引物组上的370个供试茄子品种的聚类图如图2所示。结果表明，48个引物组可以完全区分表3中的370个供试茄子品种。由此可见，实施例1开发的引物组合可以应用于茄子品种dna指纹数据库构建和品种真实性鉴定。

5、效率评价

品种真实性鉴定可以采用序贯分析方式减少工作量。本发明的发明人比较了snp标记个数(即引物组数)与区分370个供试茄子品种区分率的关系。

实验结果表明(图3)，48个引物组(即48个snp标记个数)在370个供试茄子品种中的区分率达到100％。

实施例3、建立检测待测茄子属于实施例2中370个茄子品种中哪个品种的方法

一、建立检测待测茄子属于实施例2中370个茄子品种中哪个品种的方法

1、待测茄子的基因组dna的获得

按照实施例2中步骤1的方法，将“供试茄子品种的叶片”替换为“待测茄子的叶片”，其它步骤均不变，得到待测茄子的基因组dna。

2、以待测茄子的基因组dna为模板，分别采用48个引物组进行pcr扩增，得到pcr扩增产物。各个pcr反应体系中，名称中含有“f1”的引物、名称中含有“f2”的引物和名称中含有“r”的引物的浓度比为2:2:5。

反应程序为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touchdown程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。

3、完成步骤2后，待pcr扩增产物温度降至40℃以下时通过酶标仪的fam、hex光束扫描读取荧光值(fam荧光标签序列在激发光485nm，发射光520nm波长下观察读值，hex荧光标签序列在激发光528nm，发射光560nm波长下观察读值)，根据荧光信号颜色判断待测茄子基于每个snp位点的基因型。需要说明的是，若pcr扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。

具体的判断原则同实施例2中步骤3的判断原则。

4、完成步骤3后进行如下判断：如果待测茄子基于48个snp位点的基因型和370个茄子品种中某品种相应的snp位点的基因型完全一致，则待测茄子与该茄子品种属于同一个品种；如果待测茄子基于48个snp位点的基因型和370个茄子品种中各个品种相应的snp位点的基因型均不一致，则待测茄子与370个供试茄子品种的品种均不相同。

二、步骤一建立的方法的准确性鉴定

待测茄子1-待测茄子5的品种依次为圣茄1号、圣茄3号、盛圆一号圆茄、超亮黑冠和超亮黑峰圆茄。待测茄子1-待测茄子5的叶片均取自北京市农林科学院蔬菜研究中心试验基地。

1、按照步骤一中1-3的方法，获得待测茄子1-待测茄子5基于48个snp位点的基因型。

2、将待测茄子1-待测茄子5基于48个snp位点的基因型和370个茄子品种基于48个snp位点的基因型进行比较。

结果表明，待测茄子1基于48个snp位点的基因型和圣茄1号相应的snp位点的基因型完全一致，待测茄子1属于圣茄1号；待测茄子2基于48个snp位点的基因型和圣茄3号相应的snp位点的基因型完全一致，待测茄子2属于圣茄3号；待测茄子3基于48个snp位点的基因型和盛圆一号圆茄相应的snp位点的基因型完全一致，待测茄子3属于盛圆一号圆茄；待测茄子4基于48个snp位点的基因型和超亮黑冠相应的snp位点的基因型完全一致，待测茄子4属于超亮黑冠；待测茄子5基于48个snp位点的基因型和超亮黑峰圆茄相应的snp位点的基因型完全一致，待测茄子5属于超亮黑峰圆茄。检测结果与预期结果完全一致。

由此可见，步骤一建立的方法具有较高的准确性。

<110>北京市农林科学院

<120>一种鉴定茄子品种真实性的方法及其使用的引物组合

<160>144

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>1

gaaggtgaccaagttcatgcttgtttgtgtcattgtactagccga45

<210>2

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>2

gaaggtcggagtcaacggatttgtttgtgtcattgtactagccgt45

<210>3

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>3

ccacaaatgatgatagatataaaaaaacaagaac34

<210>4

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>4

gaaggtgaccaagttcatgctctgcaagcacaacacattagtaacc46

<210>5

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>5

gaaggtcggagtcaacggattcctgcaagcacaacacattagtaact47

<210>6

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>6

actttaaggtgtcttttcagtaatgaatgttatt34

<210>7

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>7

gaaggtgaccaagttcatgctgcagcttaagaagaagattgaaaaatcatt51

<210>8

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>8

gaaggtcggagtcaacggattcagcttaagaagaagattgaaaaatcatc50

<210>9

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>9

cgcagcatttagctttcccaatgctat27

<210>10

<211>52

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>10

gaaggtgaccaagttcatgctaaatatgatatgatatgatagtgagcaaacc52

<210>11

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>11

gaaggtcggagtcaacggattaaaaatatgatatgatatgatagtgagcaaaca54

<210>12

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>12

tcaaatgaacaaaagaagcacttgtcaacaa31

<210>13

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>13

gaaggtgaccaagttcatgcttagaactatttctaggattaaatgttggc50

<210>14

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>14

gaaggtcggagtcaacggattctagaactatttctaggattaaatgttggt51

<210>15

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>15

gtttgacttcatttaccaatgagttcgcat30

<210>16

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>16

gaaggtgaccaagttcatgctgtaggagctcacacaattggaagaa46

<210>17

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>17

gaaggtcggagtcaacggatttaggagctcacacaattggaagag45

<210>18

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>18

gtataacctgtattgtagtgattcacatgtt31

<210>19

<211>53

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>19

gaaggtgaccaagttcatgctaatctagattagctagatagtaaatcaataaa53

<210>20

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>20

gaaggtcggagtcaacggattctagattagctagatagtaaatcaataag50

<210>21

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>21

ctactccttaatgatttgacatgtatttgtg31

<210>22

<211>53

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>22

gaaggtgaccaagttcatgctgtttaaaataaactaatccattctcctcatta53

<210>23

<211>53

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>23

gaaggtcggagtcaacggattgtttaaaataaactaatccattctcctcattt53

<210>24

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>24

gtggtcgtttcagttaattatttggaggaa30

<210>25

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>25

gaaggtgaccaagttcatgctgagaagcaatgctgcagaacagata46

<210>26

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>26

gaaggtcggagtcaacggattgagaagcaatgctgcagaacagatt46

<210>27

<211>33

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>27

gttagagctaaatgaaagcatgtattgactatt33

<210>28

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>28

gaaggtgaccaagttcatgctgtggaagatcagtggattaatggtc46

<210>29

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>29

gaaggtcggagtcaacggattgtggaagatcagtggattaatggtg46

<210>30

<211>36

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>30

catttatcataagattcaacataattagactgattt36

<210>31

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>31

gaaggtgaccaagttcatgcttttctttatgccgcgatacctctg45

<210>32

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>32

gaaggtcggagtcaacggattctttctttatgccgcgatacctcta46

<210>33

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>33

caacagcatggaaaggttcaaaagtaaaaat31

<210>34

<211>57

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>34

gaaggtgaccaagttcatgctcatataatatattaatcttttatgcttcaatcatat57

<210>35

<211>56

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>35

gaaggtcggagtcaacggattatataatatattaatcttttatgcttcaatcatac56

<210>36

<211>33

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>36

cacaagaaagttaataatgactatagttgcaac33

<210>37

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>37

gaaggtgaccaagttcatgctctcatactttggactggataacttttaata51

<210>38

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>38

gaaggtcggagtcaacggatttcatactttggactggataacttttaatg50

<210>39

<211>36

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>39

gttatgaatgtcaatacattatgtccatatatttat36

<210>40

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>40

gaaggtgaccaagttcatgcttacctctcaactgaacgagaagaac46

<210>41

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>41

gaaggtcggagtcaacggattttacctctcaactgaacgagaagaat47

<210>42

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>42

ctcagcgttttgcttttccaaatcaagtaa30

<210>43

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>43

gaaggtgaccaagttcatgctcaaatgaaaacaaaaattacaatgaaacaatgg54

<210>44

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>44

gaaggtcggagtcaacggattcaaatgaaaacaaaaattacaatgaaacaatgt54

<210>45

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>45

attcttgctaatcctggatttcttgtctatt31

<210>46

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>46

gaaggtgaccaagttcatgctccatgacttatgctcacaaaatttcaac49

<210>47

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>47

gaaggtcggagtcaacggattaaccatgacttatgctcacaaaatttcaat51

<210>48

<211>33

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>48

cgcacaatttgctcctttgataataatgtaatt33

<210>49

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>49

gaaggtgaccaagttcatgctctgttgatgtatgtctggatatgatac48

<210>50

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>50

gaaggtcggagtcaacggattgctgttgatgtatgtctggatatgatat49

<210>51

<211>25

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>51

ggaaaagggttctgactagcgacta25

<210>52

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>52

gaaggtgaccaagttcatgctaactgacctaaacgcagattgaagc46

<210>53

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>53

gaaggtcggagtcaacggattgaactgacctaaacgcagattgaaga47

<210>54

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>54

gataggtgcgtgaagagattgagagaa27

<210>55

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>55

gaaggtgaccaagttcatgctgattcagaaactaaatgcagagggc46

<210>56

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>56

gaaggtcggagtcaacggatttgattcagaaactaaatgcagagggt47

<210>57

<211>32

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>57

cttcctttcttggtttctttcttctctaattt32

<210>58

<211>52

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>58

gaaggtgaccaagttcatgctcttaatttgaattgggtttgcatttggatta52

<210>59

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>59

gaaggtcggagtcaacggattttaatttgaattgggtttgcatttggattg51

<210>60

<211>33

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>60

gaattctttacatacctcaaacattctccaaat33

<210>61

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>61

gaaggtgaccaagttcatgctgcaaactaatcaatcaagactcaatcc48

<210>62

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>62

gaaggtcggagtcaacggattcgcaaactaatcaatcaagactcaatct49

<210>63

<211>28

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>63

acaatggctgcaagttgtaggaaagaaa28

<210>64

<211>44

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>64

gaaggtgaccaagttcatgctcttccaacaaatcgccatagacg44

<210>65

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>65

gaaggtcggagtcaacggatttgcttccaacaaatcgccatagaca46

<210>66

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>66

cggtggattaggaaaatgctcctgtta27

<210>67

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>67

gaaggtgaccaagttcatgctacttcttttctgtgcgttgatgaataac49

<210>68

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>68

gaaggtcggagtcaacggattttacttcttttctgtgcgttgatgaataat51

<210>69

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>69

ctgcataaaaatcaacaattcgtaaaatctctta34

<210>70

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>70

gaaggtgaccaagttcatgcttccttcttatgcaagttatatctaggatat51

<210>71

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>71

gaaggtcggagtcaacggattccttcttatgcaagttatatctaggatac50

<210>72

<211>32

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>72

ggaattgtaggatgggaagttaatttatacat32

<210>73

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>73

gaaggtgaccaagttcatgctttcaaagattacaagcattcaagatgacat51

<210>74

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>74

gaaggtcggagtcaacggattcaaagattacaagcattcaagatgacac49

<210>75

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>75

ctctttttttacattttgttttaggttagtaggt34

<210>76

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>76

gaaggtgaccaagttcatgctcatttttccccaaattaggtggagaaaa49

<210>77

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>77

gaaggtcggagtcaacggattatttttccccaaattaggtggagaaag48

<210>78

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>78

cgcgtccttccctcttcataaattgta27

<210>79

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>79

gaaggtgaccaagttcatgcttgaaaatagtttttactgatccactgattattt54

<210>80

<211>53

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>80

gaaggtcggagtcaacggattgaaaatagtttttactgatccactgattattc53

<210>81

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>81

gtactttgtgcatctgcaccaacagaa27

<210>82

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>82

gaaggtgaccaagttcatgcttttcctccatcacaatcacatactact48

<210>83

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>83

gaaggtcggagtcaacggatttcctccatcacaatcacatactacc46

<210>84

<211>24

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>84

ggctgattctgggtccttggactt24

<210>85

<211>44

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>85

gaaggtgaccaagttcatgctgaaggggtgtcaagtgacactat44

<210>86

<211>43

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>86

gaaggtcggagtcaacggattaaggggtgtcaagtgacactac43

<210>87

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>87

gtttcttttaatcgtagaaacgtacttagca31

<210>88

<211>44

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>88

gaaggtgaccaagttcatgctggccttttgtaagtggatccgac44

<210>89

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>89

gaaggtcggagtcaacggatttaggccttttgtaagtggatccgat46

<210>90

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>90

tcacaattgactatgtaaagtcaaaggataattt34

<210>91

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>91

gaaggtgaccaagttcatgctgaaacttgggaataatgggttcgctt47

<210>92

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>92

gaaggtcggagtcaacggattaaacttgggaataatgggttcgctc46

<210>93

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>93

cacgcaatctaagcctgggattttgaa27

<210>94

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>94

gaaggtgaccaagttcatgctgtattgtatcagcaacagtggctatg47

<210>95

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>95

gaaggtcggagtcaacggatttgtattgtatcagcaacagtggctata48

<210>96

<211>28

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>96

acatttgattttgaatcagaggcggcaa28

<210>97

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>97

gaaggtgaccaagttcatgctcacaccattgggtgccacttattt45

<210>98

<211>44

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>98

gaaggtcggagtcaacggattacaccattgggtgccacttattc44

<210>99

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>99

cttattgattctgaaaggcatttcaaagaatgtt34

<210>100

<211>39

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>100

gaaggtgaccaagttcatgctcggggcagcagacgacac39

<210>101

<211>40

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>101

gaaggtcggagtcaacggattgcggggcagcagacgacat40

<210>102

<211>27

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>102

cgcttgtaattggttccttgttgccat27

<210>103

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>103

gaaggtgaccaagttcatgcttaagaagctgttttgagccttctgg46

<210>104

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>104

gaaggtcggagtcaacggattaataagaagctgttttgagccttctgt48

<210>105

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>105

ttgtctgaattctctaaaggtaaatgttctataa34

<210>106

<211>43

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>106

gaaggtgaccaagttcatgctcttcagttggagcagttcagcg43

<210>107

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>107

gaaggtcggagtcaacggattattcttcagttggagcagttcagca46

<210>108

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>108

ctaaagcaggagcttacaaagcataacttt30

<210>109

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>109

gaaggtgaccaagttcatgctgtcgtaaaacgagccatgtgatttg46

<210>110

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>110

gaaggtcggagtcaacggattaagtcgtaaaacgagccatgtgattta48

<210>111

<211>26

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>111

gcttcgatttaaggctgtctggtcat26

<210>112

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>112

gaaggtgaccaagttcatgctttctcagcatgtgatttaaaccttcca48

<210>113

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>113

gaaggtcggagtcaacggattttctcagcatgtgatttaaaccttcct48

<210>114

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>114

cccatgtcaccattcttattattctagcta30

<210>115

<211>53

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>115

gaaggtgaccaagttcatgctaatctttagaatgtttcttagatttggttttg53

<210>116

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>116

gaaggtcggagtcaacggattgaatctttagaatgtttcttagatttggtttta54

<210>117

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>117

gtaagagagagagattaaccagcatgataa30

<210>118

<211>39

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>118

gaaggtgaccaagttcatgctcccctcgcggtgctgtga39

<210>119

<211>39

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>119

gaaggtcggagtcaacggattcccctcgcggtgctgtgg39

<210>120

<211>35

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>120

tgatttccataatcaagatagaaaacttcaaattt35

<210>121

<211>51

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>121

gaaggtgaccaagttcatgctttttgcttcttattctcaaagtgaatgtct51

<210>122

<211>49

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>122

gaaggtcggagtcaacggattttgcttcttattctcaaagtgaatgtcc49

<210>123

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>123

cttttcctggtaataagacaaatatgtaatgcta34

<210>124

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>124

gaaggtgaccaagttcatgcttactattactttagctatttgataatcctaatg54

<210>125

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>125

gaaggtcggagtcaacggatttactattactttagctatttgataatcctaata54

<210>126

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>126

tcacttagattttccaactgaatagtagaatatt34

<210>127

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>127

gaaggtgaccaagttcatgctttccattgatgattgccatgttactga48

<210>128

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>128

gaaggtcggagtcaacggattccattgatgattgccatgttactgg46

<210>129

<211>28

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>129

cagcgacatttcatctggcaaaaagtta28

<210>130

<211>52

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>130

gaaggtgaccaagttcatgctttgattacgctaataatagtgcatcatatag52

<210>131

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>131

gaaggtcggagtcaacggatttattgattacgctaataatagtgcatcatataa54

<210>132

<211>34

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>132

gtgctcaaacacattacttttgattacaagaaat34

<210>133

<211>52

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>133

gaaggtgaccaagttcatgctttaccaatttccaatttattcaacttgttcg52

<210>134

<211>54

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>134

gaaggtcggagtcaacggattaattaccaatttccaatttattcaacttgttca54

<210>135

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>135

ctgaatattggacacttggagtagaactat30

<210>136

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>136

gaaggtgaccaagttcatgctatgctagttcagtagacatgaattgtg48

<210>137

<211>50

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>137

gaaggtcggagtcaacggattatatgctagttcagtagacatgaattgta50

<210>138

<211>30

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>138

ccaaaactggtcagctatagaagataagat30

<210>139

<211>45

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>139

gaaggtgaccaagttcatgctagtcttgtcaacctgaagaacatg45

<210>140

<211>46

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>140

gaaggtcggagtcaacggattaagtcttgtcaacctgaagaacatt46

<210>141

<211>29

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>141

atgcatttccttcccaaattgagttttag29

<210>142

<211>47

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>142

gaaggtgaccaagttcatgcttagtcgatataactgttcagttcctg47

<210>143

<211>48

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>143

gaaggtcggagtcaacggattgtagtcgatataactgttcagttcctt48

<210>144

<211>31

<212>dna

<213>artificialsequence

<400>144

cttggataattttttgacgtagcgaaatcta31

相关知识

一种鉴定樱花品种湘妍和敬翁杂交后代的InDel标记引物组合及检测方法技术
一种鉴定湘妍和湘韵樱花杂交F1代的InDel标记引物组合及检测方法技术
用于鉴定Me毒性根结线虫的LAMP引物组及其方法与流程
一种快速检测和鉴定凤仙花坏死斑病毒的分子生物学方法及其引物.pdf
一种鉴定棉花花药颜色性状的分子标记组合及方法和应用
一种检测丰华21西瓜种子真实性和纯度的方法.pdf
一种基于杜鹃花转录组数据的ssr分子标记引物及其筛选方法与应用
一种用于稻田土壤中拟禾本科根结线虫qPCR定量检测的引物组合物、试剂盒及其应用的制作方法
一种基于微滴式数字PCR技术的南方根结线虫引物探针组合和检测方法技术
一组基于荧光毛细管电泳的猕猴桃性别分子标记引物及其应用

网址: 一种鉴定茄子品种真实性的方法及其使用的引物组合与流程 https://www.huajiangbk.com/newsview2050085.html