首页分享 2024年真菌学实验报告

2024年真菌学实验报告

来源：花匠小妙招时间：2025-05-07 00:01

该【 2024年真菌学实验报告】是由【书犹药也】上传分享，文档一共【19】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【 2024年真菌学实验报告】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:。。。:真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林,从海洋、高空到赤道、两极,到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖,但它的孢子却成群的漂浮在天空,只要稍微注意你会发觉人类本来生活在真菌的汪洋大海中。当今世界,生物技术已迈入世界经济的支柱产业,真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物,具备广泛的多样性,真菌生长我繁殖迅速,在很短的时间内就能够得到比动物和植物多得多的后裔,能够直接、迅速地进行遗传性状分离的分析。因此,真菌能够作为研究基础生物学过程中的一个重要工具,真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展,为生物技术产业提供了一个宽广的天地。植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性,植物物种的年代越久远,其生物内生真菌的多样性越丰富:抗病原性能越强的植物,其所含的内生真菌具备抗菌活性的也许行就越大;其所含的内生真菌有也许产生与植物相同或相同的抗菌无知或产生抗菌活性物质也许参加了药用植物的抗菌过程,本试验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制试验发觉茎,根,花,种子或果实内生真菌的代谢产物具备不一样程度的抑菌能力,并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具备广泛的应用前景。::在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。:葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,马铃薯、琼脂。孟加拉红,青霉素,链霉素,甲基蓝,蛋白胨,酵母膏,蔗糖,磷酸盐,葡萄糖,琼脂条,无菌水等。消毒剂:75%的乙醇,%升汞(HgCl2),次氯酸钠溶液(含活性氯10%),30%双氧水。双蒸水、琼脂糖,Tris饱和酚、巯基乙醇(β-Mercaptoethanol),石英砂,Tris饱和酚,氯仿,异戊醇,无水乙醇,硼酸,冰醋酸,氯化钠,盐酸,氢氧化钠,EDTA,CTAB。:、葡萄糖琼脂培养基马铃薯汁1000ml,葡萄糖20g,琼脂20g(注:取去皮马铃薯200克,切成小块,加水1000毫升煮沸30分钟,滤去马铃薯块,将滤液补足至1000毫升,加葡萄糖20克,琼脂15克,溶化后分装,,NaNO33g,,,,K2HPO41g,琼脂13g,蒸馏水1000ml,,葡萄糖或麦芽糖4g,,水100ml。制法:1将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(无须调PH即有5左右)分中号试管(约4毫升)包扎,高压115℃20分钟。趁热斜好,凝固备用。,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4?,1%,琼脂20g,水1000mL,pH值自然。抗生素使用方法与用量:培养基灭菌之后分装前按链霉素40U/mL,青霉素30U/mL用量加入,冷却到45℃左右未凝固时加入抗生素,混匀倒平板。::在校园内找到银杏、喜树、桂花树并用刀采集叶、茎、根、皮、种子。:分别取根、茎、叶、果实,用洗涤剂在自来水下洗净。老树皮用75%酒精进行表面消毒后,用镊子取出,于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊,切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒:75%的酒精漂(浸)洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→%升汞不一样的消毒时间(见表2-2,共设置7个梯度)→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多出水分→无菌刀片将材料切成小块将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大体分开,×。将果实的外种皮去掉,消毒之后将内种皮去掉。灭菌时,沥干的植物材料转放到烧杯中,记好时间,倒入消毒溶液,不时用玻璃棒轻轻搅动,以促进材料各部分与消毒溶液充足接触,驱除气泡,使消毒彻底。在快届时间之前1-2分钟,开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内,要注意勿使材料倒出,倾净后立即倒入无菌水,轻搅漂洗。灭菌时间是从倒入消毒液开始,至倒入无菌水时为止。灭菌液要充足浸没材料。宁可多用些灭菌液,切勿勉强在一个体积偏小的容器中使用诸多材料灭菌。:将上述组织块置于分离培养基上(每一平皿培养5块组织块)于27℃恒温培养,同时将上述消毒过程中最后一次冲洗组织块后的无菌水滴在培养基上平行培养,用以检测消毒是否彻底。观测菌丝生长情况及污染情况。:培养3-4天后及时采取尖端菌丝挑取法,挑取形态不一样的菌丝或菌落移种到新鲜PDA培养基上。纯化3-4次以确保所得菌落为纯培养。:::查氏培养基、沙氏培养基和PDA培养基。℃保存菌种活化2次;、沙氏、察氏平板,℃恒温培养箱培养7天;,取一个平行进行制片(胶带子粘片法),观测个体形态;,取出;,作为最后描述成果;。:胶带粘贴法:选用在显微镜油镜下观测细致不粗糙且粘性好的胶带。取一小段胶带从菌落表面的中心向边缘粘,75%乙醇固定,乳酸石炭酸棉蓝染色液染色,将粘有菌丝的一面对上,盖上盖玻片,于显微镜下观测产孢结构等特性。:观测的要点::大小:以菌落的直径(mm)表示。颜色:包括菌落表面和背面的颜色,及色素是否渗透培养基。菌落表面的纹饰:如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。菌落的质地:毡状、毯状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状、有无成束状或绳状的气生菌丝。菌落的高度:扁平、凸起或隆起,及菌落中心部分情况等。菌落边缘:全缘、锯齿状、树枝状等。渗出物:菌落表面有无液滴及液滴的颜色等。:菌丝的特性:表面性状(粗糙或光滑),宽度等分生孢子梗:分支情况--简单或复杂,轮生或单生等;长短;基部粗糙或光滑等。产孢结构的形态特性:形状,大小,着生情况(位置,单生、互生或成轮生体)分生孢子的形态:形状,大小,表面情况,聚集方式(直链、斜链或聚集成头)::培养基成份与不加琼脂的PDA固体培养基成份相同。将液体培养基以100mL每瓶分装至250mL三角瓶中,用8层纱布封口。121℃,蒸汽灭菌20min。将菌丝致密的真菌接种到液体培养基中,于恒温振荡培养箱中27℃、120rpm培养5-7天。用两层灭菌纱布过滤菌丝球,用无菌蒸馏水冲洗菌丝球5次,防止培养基中的糖类和蛋白对DNA提取的影响。40℃下烘干菌丝,不过不要过于干燥,然后进行DNA的提取。。CTAB(cetyltriethylammoniumbromide,十六烷基三乙基溴化铵)是一个去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中是可溶的,当减少溶液盐浓度到一定程度时,从溶液中沉淀,通过离心可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开,然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液,再加乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇。CTAB法的好处是能很好地去掉糖类杂质,提取前期可得到高含量的DNA。:将CTABbuffer在65℃水浴锅中预热,研钵用液氮预冷;,在液氮中迅速研磨成粉末后,迅速加入5mL预热的提取液及10μLβ-巯基乙醇,;℃-1h,。保温期间要轻轻振摇几次;,加入等体积(700μL)的饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),充足混匀后静置10min。(1rpm,10min,室温),去沉淀,将上清液转入洁净离心管中。、5数次,直至无杂质;:异戊醇(24:1)抽提一次以清除饱和酚,离心(1rpm,10min,室温);-20℃预冷无水乙醇,以沉淀出DNA。室温放置10-20min,能够过夜;(10000rpm,5min)的措施取出DNA;用75%乙醇洗涤两次;<10>37℃保温箱中干燥后溶于适量的TE缓冲液中4℃备用。

2024年真菌学实验报告来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.