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DNA、RNA及细胞保存策略

来源：花匠小妙招时间：2025-05-04 17:09

DNA、RNA

一、DNA的保存

DNA作为双螺旋结构的遗传物质，具有较高的化学稳定性，但在野外采集与运输过程中仍需采取严格措施以防止降解。以下是针对植物DNA采集与保存的优化策略。

（一）组织的采集

用于测序的植物材料应优先选择当年生、新鲜且健康的幼嫩组织（如叶片），采集量为3-5克（鲜重），叶片表面积建议不小于50平方厘米。若叶片难以获取，可采集其他组织（如芽、花、果实或种子）。每份样品建议分为两份独立保存，以确保数据的可靠性。

采集后，样品应立即置于液氮或冷藏设备中运输至实验室，并在-80℃超低温冰箱中长期保存。若条件受限，可采用干燥保存法。具体操作为：将植物材料置于透气纸袋中，与硅胶干燥剂共同干燥。透气纸袋可有效避免样品与硅胶直接接触，防止运输过程中样品破碎或交叉污染。对于易失水的植物材料（如纸质叶），需立即干燥；而对于革质叶或蜡质叶等不易失水的材料，可在采集后短时间内进行干燥。对于较厚或多浆的组织（如种子或厚叶片），建议将材料切割成小块后与硅胶共同干燥。

硅胶干燥是目前植物材料快速脱水的最佳方法，推荐使用粉末状硅胶（粒径20-30 Å）与变色硅胶（蓝色）的混合组合。粉末状硅胶可加速干燥效率，而变色硅胶能直观反映干燥状态。干燥时需确保硅胶完全覆盖样品，并定期检查干燥效果。

（二）组织的保存

干燥处理后的植物组织需置于适宜环境保存。理想条件为温度4-15℃、相对湿度低于30%。若条件受限，可在室温下保存，但需确保通风良好且干燥。低温保存（-20℃或-80℃）虽可延长保存时间，但需保持样品干燥状态。需注意，室温保存超过两年的植物材料可能导致基因组DNA降解，因此建议定期检测样品质量。

（三）总DNA的保存

提取总DNA前，需对样品进行完整性、纯度、浓度及含量的严格检测。总DNA的保存建议采用干粉状态，若以溶液形式保存，则需使用pH值为8.0-8.5的1×TE缓冲液稀释。低温保存时，优先选择-80℃或液氮环境，条件受限时可在-20℃保存，但需避免频繁冻融。建议每份样品保存3-5个独立样本，以确保实验重复性。总DNA的保存时限通常超过两年，但长期保存需定期抽测，对降解样品及时更新。

二、RNA的保存

RNA为单链分子，稳定性较差，极易因内源性核酸酶（RNAase）的作用而降解。外源性RNA酶（如头发、体液、灰尘等）亦可能引入污染。因此，RNA的保存需采取极端谨慎措施。

从组织采集到实验全过程，样品需始终处于液氮环境中（-196℃），以确保细胞生理生化过程完全停止，从而最大限度减少RNA降解。实验操作时，需佩戴无菌橡胶手套、帽子及口罩，并在洁净、低尘环境中进行。需注意，-80℃或更低温度虽可延长保存时间，但无法完全阻止RNA的局部或完全降解，因此液氮保存为最优选择。