【发明专利】一种三花莸多糖的制备方法及其应用 CN113956369A.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202111226468.9(22)申请日 2021.10.21(71)申请人 河南省医药科学研究院地址 450052 河南省郑州市二七区五里堡街道大学北路40号(72)发明人 赵莹刘懿娴陈慧平周火祥王卫东谢巍许芳赵倩伟章金涛(74)专利代理机构 北京圣州专利代理事务所(普通合伙) 11818代理人 王宇航(51)Int.Cl.C08B 37/00(2006.01)A61K 8/73(2006.01)A61Q 19/08(2006.01)A61Q 19/02(2006.01) (54)发明名称一种三花莸多糖的制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种三花莸多糖的制备方法，所述方法包括： 取洗净干燥的三花莸叶， 粉碎， 过40目筛， 按照1:20料液比加入去离子水， 常温浸泡2h后， 加热煮沸提取6h， 收集提取液， 过滤， 并进行减压浓缩， 浓缩液用4倍体积的95乙醇醇析12h， 沉淀用去离子水复溶至原上清液体积， 重复用4倍体积的95乙醇醇析一次， 沉淀依次用95乙醇、 无水乙醇、 丙酮、 乙醚按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次， 挥干溶剂后复溶于去离子水中， 用Sevag法脱蛋白， 冷冻干燥即得所述的三花莸多糖。权利要求书1页 说明书3页CN 113956369 A2022.01.21CN 113956369 A1.一种三花莸多糖的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括： 取洗净干燥的三花莸叶，粉碎， 过40目筛， 按照1:20料液比加入去离子水， 常温浸泡2h后， 加热煮沸提取6h， 收集提取液， 过滤， 并进行减压浓缩， 浓缩液用4倍体积的95乙醇醇析12h， 沉淀用去离子水复溶至原上清液体积， 重复用4倍体积的95乙醇醇析一次， 沉淀依次用95乙醇、 无水乙醇、 丙酮、 乙醚按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次， 挥干溶剂后复溶于去离子水中， 用Sevag法脱蛋白， 冷冻干燥即得所述的三花莸多糖。2.一种利用如权利要求1所述的获得的三花莸多糖的用途， 其特征在于， 所述三花莸多糖作为天然的抗氧化剂。3.一种抗氧化、 美白淡斑效果的化妆品， 其特征在于， 所述化妆品中含有添加剂三花莸多糖， 其质量百分比为210。权利要求书1/1 页2CN 113956369 A2一种三花莸多糖的制备方法及其应用技术领域0001本发明涉及化妆品中天然提取物技术领域， 具体涉及一种三花莸多糖的制备方法及其应用。背景技术0002三花莸(Caryopteris terniflora Maxim.)为马鞭草科(Verbenaeeae)莸属(Caryopteris)植物， 亚灌木， 又名六月寒、 大风寒草、 红花野芝麻、 路边梢、 化骨丹、 野芝麻、峰子草、 野薄荷、 山卷莲、 野荆芥、 黄刺泡等。 三花莸资源丰富， 主要分布于四川、 河南、 河北、山西、 陕西、 甘肃等地， 多为阳性植物， 喜光， 喜干燥， 极耐旱， 耐低温， 耐瘠薄， 适应性强， 有很高的生态效益及绿化价值。 另外， 三花莸味辛、 微苦， 性平， 具有疏风解表、 宣肺止咳、 活血调经等功效， 为民间常用草药， 主治感冒、 咳嗽、 百日咳、 外障目翳、 产后腹痛、 水火烫伤等，有较高的药用价值。0003酪氨酸酶抑制剂是目前公认的用于美白类化妆品的美白添加剂， 如美白淡斑成分曲酸。 因此， 加强酪氨酸酶抑制剂的开发可以丰富化妆品中美白淡斑添加剂的种类。0004植物多糖是大自然对人类的馈赠， 许多植物多糖具有生物活性， 如免疫调节、 抗肿瘤、 降血糖、 降血脂、 抗辐射、 抗菌抗病毒、 保护肝脏等保健作用。 所以植物多糖早已被广泛运用到医学界、 餐饮界等大众生活领域中。 将植物多糖应用于化妆品具有安全无刺激的优点。发明内容0005鉴于现有技术对三花莸中多糖的研究极少， 没有关于其抗氧化活性和对酪氨酸酶抑制作用的活性报道， 所以本发明提供一种三花莸多糖的制备方法及其应用。0006为了实现上述目的， 本发明采用的技术方案如下：0007一种三花莸多糖的制备方法， 所述方法包括： 取洗净干燥的三花莸叶， 粉碎， 过40目筛， 按照1:20料液比加入去离子水， 常温浸泡2h后， 加热煮沸提取6h， 收集提取液， 过滤，并进行减压浓缩， 浓缩液用4倍体积的95乙醇醇析12h， 沉淀用去离子水复溶至原上清液体积， 重复用4倍体积的95乙醇醇析一次， 沉淀依次用95乙醇、 无水乙醇、 丙酮、 乙醚按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次， 挥干溶剂后复溶于去离子水中， 用Sevag法脱蛋白， 冷冻干燥即得所述的三花莸多糖。0008进一步的， 基于上述发明的基础， 本发明还提供一种利用三花莸多糖的作为天然的抗氧化剂的应用。0009进一步的， 基于三花莸多糖的可作为天然的抗氧化剂的特性， 本发明再提供一种抗氧化、 美白淡斑效果的化妆品， 所述化妆品中含有添加剂三花莸多糖， 其质量百分比为210。0010本发明有益效果在于： 经本发明中的测试结果表明， 三花莸多糖具有较高的抗氧化活性， 并且对酪氨酸酶具有较高的抑制作用， 可用于开发成天然抗氧化剂， 以及具有抗氧说明书1/3 页3CN 113956369 A3化、 美白淡斑效果的化妆品添加剂。具体实施方式0011下将对本发明作进一步的描述， 需要说明的是， 本实施例以本技术方案为前提， 给出了详细的实施方式和具体的操作过程， 但本发明的保护范围并不限于本实施例。0012实施例10013一种三花莸多糖的制备方法， 所述方法包括： 取洗净干燥的三花莸叶， 粉碎， 过40目筛， 按照1:20料液比加入去离子水， 常温浸泡2h后， 加热煮沸提取6h， 收集提取液， 过滤，并进行减压浓缩， 浓缩液用4倍体积的95乙醇醇析12h， 沉淀用去离子水复溶至原上清液体积， 重复用4倍体积的95乙醇醇析一次， 沉淀依次用95乙醇、 无水乙醇、 丙酮、 乙醚按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次， 挥干溶剂后复溶于去离子水中， 用Sevag法脱蛋白， 冷冻干燥即得所述的三花莸多糖。0014对获得的三花莸多糖经苯酚硫酸法测定， 多糖含量为87.23， 多糖含量较高。 经考马斯亮蓝法测定， 多糖中蛋白含量为0.76， 蛋白含量很少。0015实施例20016三花莸多糖的抗氧化作用00171、 三花莸多糖对DPPH的清除活性0018(1)DPPH测试液的配制： 精确称取8.0mg的DPPH， 用100ml甲醇溶解配制成0.08mg/mL的DPPH溶液， 避光保存， 备用。0019(2)实验步骤： 将实施例1制备的三花莸多糖和阳性药物丁基化羟基甲苯(BHT)配制成1mg/mL、 0.5mg/mL、 0.25mg/mL、 0.125mg/mL、 0.06mg/mL五个系列浓度的待测液， 取2.0mL系列浓度的三花莸多糖溶液和1.0mL DPPH溶液混合记为溶液s； 取2.0mL系列浓度的多糖溶液和1.0mL甲醇混合记为溶液b； 取2.0mL甲醇和1.0mL DPPH溶液混合记为溶液c。 将以上溶液室温避光， 放置摇床中30min， 于517nm处测定吸光度值As， Ab， Ac， 每组设3个复孔，测定3次重复实验。 按照公式： 清除率()1(AsAb)/Ac100计算对DPPH自由基清除率， 同时以抑制率对抑制剂浓度作图， 根据抑制曲线求得三花莸多糖和阳性抗氧化剂BHT的IC50值。 结果如表1所示。00202、 三花莸多糖对OH的清除活性0021将实施例1制备的三花莸多糖和阳性药物VC配制2.0mg/mL的样品溶液。 取5支具塞试管， 向其中各加入2.0mmol/L FeSO4 1.0mL、 6.0mmol/L水杨酸乙醇溶液1.0mL， 振荡， 摇匀， 分别加入多糖溶液0、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 1.0mL， 再分别添加蒸馏水1、 0.8、 0.6、 0.4、 0.2、0.0mL， 再分别加入1.0mmol/L H2O2 1.0mL， 振荡， 摇匀， 于37水浴加热30min， 以蒸馏水调零， 应用紫外分光光度计于510nm处测定吸光度。 按如下公式计算对OH的清除率， 清除率()1(AsAb)/Ac100， 其中Ac为加1mL蒸馏水的吸光度值， As为加不同浓度样本的吸光度值， Ab为不加H2O2的吸光度值。 同时以抑制率对抑制剂浓度作图， 根据抑制曲线求得三花莸多糖和阳性抗氧化剂VC的IC50值。 结果如表1所示。说明书2/3 页4CN 113956369 A400220023实施例30024三花莸多糖对酪氨酸酶的抑制活性00251、 三花莸多糖对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用0026将实施例1制备的三花莸多糖和阳性药物曲酸分别配制成不同浓度的样品溶液，该反应在96孔培养板中进行， 总反应体系为200 L： 不同浓度的样品溶液40 L； 67mmol/L磷酸盐缓冲液80 L； 100U/mL酪氨酸酶溶液40 L； 2.5mmol/L L酪氨酸40 L。 调零孔仅加67mmol/L磷酸盐缓冲液200 L。 加样完毕后， 混匀， 将其置于37水浴孵箱中孵育20min， 用酶联免疫检测仪检测反应产物在490nm波长处的特异性吸光值， 重复测试3次。0027按照以下公式计算样品和曲酸对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用。 抑制率()1(A1A2)/(A3A4)100， 式中： A1、 A2、 A3、 A4分别是样品组、 样品背景组(PBS代替酪氨酸酶)、 空白组(蒸馏水代替样品)、 空白背景组(蒸馏水代替样品、 PBS代替酪氨酸酶)的吸光度。 同时以抑制率对抑制剂浓度作图， 根据抑制曲线求得三花莸多糖和阳性药物曲酸的IC50值。 结果如表2所示。00282、 三花莸多糖对酪氨酸酶双酚酶的抑制作用0029参照上述单酚酶抑制作用步骤， 以2.5mmol/L L多巴溶液替代2.5mmol/L L酪氨酸溶液， 于37下继续孵育20min， 振荡后立即于490nm处测定吸光度。 按照式3.1中公式计算样品和曲酸对酪氨酸酶双酚酶抑制率， 并计算IC50值。 结果如表2所示。00300031综上所述， 通过本发明的测试结果可以表明， 三花莸多糖具有较高的抗氧化活性，并且对酪氨酸酶具有较高的抑制作用， 可用于开发成天然抗氧化剂， 以及具有抗氧化、 美白淡斑效果的化妆品添加剂。0032对于本领域的技术人员来说， 可根据以上描述的技术方案以及构思， 做出其它各种相应的改变以及变形， 而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。说明书3/3 页5CN 113956369 A5

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