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一种抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖及其制备方法与应用

来源：花匠小妙招时间：2024-11-05 03:59

本发明涉及一种植物多糖，具体涉及一种抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖及其制备方法。

背景技术：

1、快节奏的生活让高压状态的人群倍感疲劳和免疫力低下，诱发许多疾病。疲劳是一种非特异性的症状，不仅存在于许多疾病中，还可以作为一个单独的症状在普通人群中。在疲劳状态下，人们的免疫力被削弱变得更易感染各种疾病。长期累积的疲劳还会导致慢性综合征，这容易使机体产生一系列的健康问题，例如咽炎、肌痛、认知障碍等。因此，疲劳是一个重要的公共卫生问题。缓解疲劳获得高质量的生活是亟待解决的难题。

2、剧烈运动、缺氧严重或是长期疾病都能导致机体疲劳。在现代人群中，运动是疲劳的一个主要来源。适当运动可以增进健康，然而过度的运动会让机体处于极端的生理环境中，破坏身体平衡，影响系统和器官的正常功能，导致疲劳。

3、中医中通常将疲劳称作“疲极”“倦怠”“困顿”，更有“恍惚善忘”“四肢疼痛，百节劳倦”等描述[5]。历代医家把这种症状归于虚劳、虚损的范畴，认为五脏功能失调对疲劳的发生影响很大，中医中常采用补虚药治疗和改善疲劳征状[2]。

4、从中药补虚药中寻找抗疲劳活性成分是预防和缓解疲劳的一个重要方向。黄精是一种中药补虚药，也是药食同源类中药，其为百合科黄精属多年生草本植物滇黄精(polygonatum kingianum coll.et hemsl.)、黄精(polygonatum sibiricum red.)和多花黄精(polygonatum cyrtonema hua)的干燥根茎。黄精归脾、肺、肾经，主治脾气虚、肺阴虚、肾阴虚证，具有补气养阴、健脾润肺、益肾固精的功效，主要用于体倦乏力、劳嗽咳血、精血不足等。结合中医和现代医学理论，黄精的传统功效主要体现在抗疲劳、抗衰老、降血糖，是开发抗疲劳健康产品的良好选择。

技术实现思路

1、发明目的：本发明的目的是为通过系统分离纯化多花黄精多糖，并经过分子量、单糖组成、结构特点确定结构，并通过药理实验筛选出具有抗疲劳和提高免疫力的多花黄精多糖。

2、技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖，该多花黄精多糖的结构式如图13所示。

4、作为优选方案，以上所述的抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖，该多花黄精多糖是一种直链多糖，由10个α-fruf以(2→6)糖苷键连接而成，其两端果糖2号和6号位的碳原子分别以(2→4)和(1→6)糖苷键连接着α-galp和3-meo-β-glcp。

5、本发明所述的抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖的制备方法，包括以下步骤一种或多种：

6、(1)多花黄精粗多糖提取；(2)大孔树脂纯化；(3)sephadex g-100柱层析；(4)制备液相纯化得到。

7、一种抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖，它是通过以下方法制备得到的：

8、(1)多花黄精粗多糖提取：取多花黄精粗粉加适量水6～10倍浸泡后，加入煎煮提取1～2次，每次1～2h，合并煎煮液，浓缩，加75～80％乙醇沉淀，得多花黄精粗多糖；

9、(2)大孔树脂纯化：取步骤(1)的多花黄精粗多糖上d301型树脂纯化得到多花黄精多糖pcdp，工艺参数为多花黄精粗多糖样品浓度为5mg/ml，树脂用量为2g/20ml，吸附时间为2h，吸附温度为35℃。

10、作为优选方案，所述的抗疲劳提高免疫力的多花黄精多糖的制备方法，包括以下步骤：

11、(1)多花黄精粗多糖提取：取多花黄精粗粉加适量水6～10倍浸泡后，然后煎煮提取1～2次，每次1～2h，合并煎煮液，浓缩，加75～80％乙醇沉淀，得多花黄精粗多糖；

12、(2)大孔树脂纯化：取步骤(1)的多花黄精粗多糖上d301型树脂纯化得到多花黄精多糖pcdp，工艺参数为多花黄精粗多糖样品浓度为5mg/ml，树脂用量为2g/20ml，吸附时间为2h，吸附温度为35℃；

13、(3)sephadex g-100柱层析：称取步骤(2)的多花黄精多糖pcdp溶解于蒸馏水中，10000rpm离心5min，取上清液过0.22μm水系滤膜，滤液用于进样分析，将多花黄精多糖pcdp滤液装载到sephadex g-100柱上，用蒸馏水以0.4ml/min流速洗脱，每管1ml收集洗脱液，并用苯酚硫酸法测定，绘制洗脱曲线，依照曲线合并主要馏分，冷冻干燥得多花黄精多糖细分产物pcdp-2；

14、(4)制备液相纯化得到：取步骤(3)得到的多花黄精多糖细分产物pcdp-2配制成浓度10mg/ml水溶液，进样hplc制备分离系统，单次进样体积20μl，流动相为0.5mm乙酸铵，流速为0.5ml/min，色谱柱为tsk g4000pwxl(7.8*300mm)，柱温保持30℃，收集保留时间在18～22min的洗脱液，合并收集液，装入截留分子量为500da透析袋中，纯净水静置透析48h，后冷冻干燥可得pcdp-2b样品。

15、本发明所述的多花黄精多糖在制备抗疲劳、提高免疫力和改善胃肠道菌群的药物或保健品中的应用。

16、发明可将多花黄精多糖和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或丸剂剂型的药物。

17、本发明在制成片剂时，在多花黄精多糖中添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

18、在制成胶囊剂时，将多花黄精多糖和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

19、本发明在制成颗粒剂时，把多花黄精多糖和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

20、有益效果：本发明提供的多花黄精多糖和现有技术相比具有以下优点：

21、本发明提取多花黄精多糖后进行分离纯化，主要有两步：首先对d301型大孔树脂纯化工艺进行优化得到最佳纯化工艺(吸附温度为35℃，样品浓度为5mg/ml，吸附时间为2h，树脂用量为2g/20ml)，在此条件下，pccp的多糖保留率、脱色率和脱蛋白率分别为93.5％、79.15％和23.85％，由此获得了多花黄精精制多糖pcdp；对纯化后的多糖pcdp进行了sephadex g-100柱层析，发现其主要有pcdp-1和pcdp-2组成，对量丰组分pcdp-2进行富集与分析，结果表明其仍然为非单一组分，接着采用液相制备获得了其量丰组分pcdp-2b，其在hpgpc谱中为一单峰，是一种均质多糖。

22、pcdp的抗疲劳活性研究：研究多花黄精精制多糖抗疲劳作用的可能机制，结果显示，pcdp能显著提高小鼠胸腺指数，增强机体免疫力，降低肌肉中ck、la含量，减缓力竭运动过程中atp的耗竭和肌肉中乳酸的堆积，并减少肌肉损伤；pcdp还能提高肝脏中sod、cat和gsh-px酶活力，减少肝脏中过氧化氢和mda的产生，减少力竭运动过程中大量自由基对体内细胞和器官的损伤；此外，本文还对口服pcdp的小鼠肠道菌群进行测序分析，结果表明，pcdp能增加一些有益菌的相对丰度，提高机体免疫，是一种潜在的益生元。

23、pcdp对过氧化氢诱导的l02人正常肝细胞氧化应激损伤的保护作用：首先采用mtt法对pcdp的细胞毒性考察，确定干预实验汇总pcdp的低中高三个剂量浓度分别为100、200和400μg/ml；其次对过氧化氢造模剂时间和温度进行考察，确定造模浓度为1200μmol/l、造模时间为6h；最后考察pcdp对过氧化氢诱导的l02细胞氧化应激损伤的保护作用，发现不同浓度的pcdp预孵育12h后造模，能提高细胞活力，减少细胞死亡、漂浮。