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一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-01-10 10:38

本发明涉及种子组织培养
技术领域：
，具体涉及一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法。
背景技术：
紫花三叉白芨有广泛的药用价值及园林价值，主要用于收敛止血，消肿生肌，花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏，可点缀花台、庭院一角，目前，紫花三叉白芨的供需量差额太大，造成大量采集和消耗植物资源，再加上南方各省的丘陵山区森林覆盖率进一步加大，也可加剧野生白芨产量年年下降，当采集和消耗量超过自然资源的再生能力时，会导致物种的濒危，因此将紫花三叉白芨快速繁殖成苗具有重大的意义。现有中国专利文献(公开号：cn106417011a)公开了一种野生白芨组织培养快速繁殖方法涉及一种植物的培育繁殖方法，特别涉及药物的培育繁殖方法，本发明所述的野生白芨组织培养快速繁殖方法，采用紫花白芨的假鳞茎进行组织培育，经培养基培养后，其分化度率得到了较大的提高，可达到500-900％，以适应快速扩大种源，经过缓苗、炼苗后移栽成活率达98％，中国专利文献(公开号：cn108308031a)公开了一种紫花三叉白及种子组织培养方法，属于白及组织培养领域，所提供的一种紫花三叉白及种子组织培养方法按留种、蒴果选择、蒴果处理、无菌播种、种子萌发及从生芽的诱导增殖、生根壮苗、炼苗、出瓶洗苗、消毒步骤进行组织培养育苗，两个文献中组培方法较为常规，成苗过程较长，苗成活率差，快速繁殖效果较差。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，以解决上述
背景技术：
中提出的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤4-5次，随后用10-20％食盐水浸泡20-30min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用300-400mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡1-2h，随后再用1-2％红树植物凋落叶水提取液处理15-25min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为400-500umol.m-2.s-1，光照时间为6-10h/天，培养8-14天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养15-25天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。作为本发明的进一步方案是：所述步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为2500-3500gy，辐射剂量率为1.5-2.5gy.min-1。作为本发明的进一步方案是：所述步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以200-300r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。作为本发明的进一步方案是：所述增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。作为本发明的进一步方案是：所述步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为300-400umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。作为本发明的进一步方案是：所述生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。作为本发明的进一步方案是：所述分化培养基为6-ba分化培养基。作为本发明的进一步方案是：所述补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照5-9天。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：本发明的紫花三叉白芨种子先进行辐射处理，再配合10％食盐水、75％乙醇溶液，不仅可起到杀菌作用，同时提高种子活性，采用300mg/l的硒酸钠溶液浸种、红树植物凋落叶水提取液处理，硒能被植物体内转化与积累，参与代谢，红树植物凋落叶水提取液含有丰富的物质，实验数据证明可提高紫花三叉白芨成活率，以及苗叶的生长，本发明步骤三后续的处理，可促进苗的生长，提高种子繁殖成苗的时间。具体实施方式下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1：本实施例的一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤4次，随后用10％食盐水浸泡20min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用300mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡1h，随后再用1％红树植物凋落叶水提取液处理15min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为400umol.m-2.s-1，光照时间为6h/天，培养8天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养15天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。本实施例的步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为2500gy，辐射剂量率为1.5gy.min-1。本实施例的步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以200r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。本实施例的增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。本实施例的步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为300umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。本实施例的生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。本实施例的分化培养基为6-ba分化培养基。本实施例的补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照5天。实施例2：本实施例的一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤5次，随后用20％食盐水浸泡30min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用400mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡1-2h，随后再用2％红树植物凋落叶水提取液处理25min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为500umol.m-2.s-1，光照时间为10h/天，培养14天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养25天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。本实施例的步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为3500gy，辐射剂量率为2.5gy.min-1。本实施例的步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以300r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。本实施例的增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。本实施例的步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为400umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。本实施例的生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。本实施例的分化培养基为6-ba分化培养基。本实施例的补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照9天。实施例3：本实施例的一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤5次，随后用15％食盐水浸泡25min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用350mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡1.5h，随后再用1.5％红树植物凋落叶水提取液处理20min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为400-500umol.m-2.s-1，光照时间为8h/天，培养11天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养20天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。本实施例的步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为2500-3500gy，辐射剂量率为2.0gy.min-1。本实施例的步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以250r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。本实施例的增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。本实施例的步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为350umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。本实施例的生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。本实施例的分化培养基为6-ba分化培养基。本实施例的补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照7天。实施例4：本实施例的一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤3次，随后用8％食盐水浸泡15min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用250mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡0.5h，随后再用0.8％红树植物凋落叶水提取液处理12min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为350umol.m-2.s-1，光照时间为5h/天，培养6天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养10天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。本实施例的步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为2000gy，辐射剂量率为1.0gy.min-1。本实施例的步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以1500r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。本实施例的增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。本实施例的步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为300-400umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。本实施例的生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。本实施例的分化培养基为6-ba分化培养基。本实施例的补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照3天。实施例5：本实施例的一种紫花三叉白芨种子快速繁殖成苗的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取健壮、籽粒饱满、大小一致的紫花三叉白芨种子，先进行辐射处理，随后用蒸馏水进行洗涤6次，随后用25％食盐水浸泡35min，再送入75％乙醇溶液中浸泡5min，再用去离子水进行洗涤，随后再用无菌纸沥干，备用；步骤二，将步骤一备用的种子采用300-400mg/l的硒酸钠溶液浸种，浸泡2.5h，随后再用3％红树植物凋落叶水提取液处理30min，随后用清水冲洗，沥干，移至培养皿中，随后将培养皿置于光照培养箱中，培养温度为26℃，光照强度为600umol.m-2.s-1，光照时间为12h/天，培养16天，形成原球茎；步骤三，将步骤二原球茎接种于增殖培养基中，温度保持在26℃，采用紫外照射辅助光照培养，随后再转入生根培养基中，再转入分化培养基中，随后进行补光处理，培养30天，得到小苗，随后再炼苗移栽，即可。本实施例的步骤一中辐射处理采用60co-γ射线进行辐射处理，辐射量为2500-3500gy，辐射剂量率为1.5-2.5gy.min-1。本实施例的步骤二中红树植物凋落叶水提取液制备方法将红树植物凋落叶研磨成粉，随后以料液比1:100加入蒸馏水，置于摇床上以350r/min浸提36h，随后进行离心，取上清液，即可。本实施例的增殖培养基为ms+6-ba+iba+蔗糖+琼脂。本实施例的步骤三中紫外照射辅助光照培养条件为以光照强度为450umol.m-2.s-1，光照7h/天，紫外辐照0.5h/天。本实施例的生根培养基为1/2ms+iaa+iba+naa+蔗糖+琼脂。本实施例的分化培养基为6-ba分化培养基。本实施例的补光处理为led黄色光灯源光照2h/天，光照11天。对比例1.采用中国专利文献(公开号：cn106417011a)公开了一种野生白芨组织培养快速繁殖方法涉及一种植物的培育繁殖方法中实施例1的方法组培紫花三叉白芨苗。对比例2.普通组培方法得到的紫花三叉白芨苗。实施例1-5及对比例1-2性能测量结果如下苗成活率(％)苗叶宽(mm)苗叶片基部直径(mm)实施例198.3114.0实施例298.5113.9实施例398.9124.2实施例497.7103.8实施例597.2103.7对比例193.593.3对比例291.473.1对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12