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根结线虫的人工培养和繁殖研究.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-01-05 15:01

根结线虫的人工培养和繁殖研究钱骅;钱康英;陈斌;黄晓德;朱羽尧;赵伯涛【摘要】以感染根结线虫的栝楼和番茄根为材料,用简化改良的贝尔曼漏斗法分离、纯化获得实验所需要的线虫;对根结线虫的体外培养进行研究,比较了灰霉菌 (Botrytis cinerea)和腐皮镰孢菌(Fusarium solani) ZZG-1制备二重培养基对根结线虫生长影响,确定灰霉菌适宜作二重培养基培养根结线虫;通过接种根结线虫悬液, 在室内 15 ～25℃环境下培养3 ～4 周,可获得大量生长一致的幼龄期(J2)线虫,解决了根结线虫培养时寄主依赖性的问题. 【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2018(037)002 【总页数】5 页(P13-16,25) 【关键词】根结线虫;人工培养;繁殖;灰霉菌【作者】钱骅;钱康英;陈斌;黄晓德;朱羽尧;赵伯涛【作者单位】南京野生植物综合利用研究院,江苏南京 210042;南京师范大学生命科学学院,江苏南京 210023;南京野生植物综合利用研究院,江苏南京 210042;南京野生植物综合利用研究院,江苏南京 210042;南京野生植物综合利用研究院,江苏南京 210042;南京野生植物综合利用研究院,江苏南京 210042 【正文语种】中文【中图分类】S435.6 根结线虫(Meloidogyne spp.)是一种地理分布范围广、寄主广泛、极具破坏力的植物根系专性内寄生线虫。我国危害最严重，分布最广的主要有如下四种线虫：花生根结线虫(M. arenaria), 北方根结线虫(M. hapla), 南方根结线虫(M. incognita), 和爪哇根结线虫(M. javanica)。为了有效控制根结线虫的发生与为害，人们对该类线虫的生物学特性、致病性以及各种防治方法等进行广泛深入地研究，而根结线虫培养和保存的研究相对较少。寄主的抗根结线虫活性鉴定、体外抗根结线虫活性试验的物质筛选等，均需要大量生育阶段一致的线虫。从自然染病土壤或染病植物根中分离线虫虫龄不一致。一直以来，根结线虫的繁殖和保存多利用活体寄主植物，如盆栽番茄[1-2]、马铃薯[3]、空心菜[4]培养根结线虫等。鲍时翔 [5]、刘丽[6]分别利用香蕉枯萎病镰刀菌(Fusarium oxysporum f. spcubense) 和牡丹根腐病镰刀菌(Fusarium solani)培养和繁殖根结线虫的方法，解决了根结线虫的培养依赖寄主植物的问题，使得根结线虫的全部生命周期能在培养皿中完成，但仍然存在供试菌种单一，操作过程繁琐等缺陷。为了扩大供试菌种和进一步简化操作过程，本试验在此基础上探索发现，灰霉菌(Botrytis cinerea)制作的二重培养基接种栝楼和番茄根结线虫，在较短培养时间内可培养出大量根结线虫，具有操作更简便，可高效繁殖和长期保存根结线虫的优点。 1 材料与方法 1.1 材料根结线虫侵染的番茄根部由江苏省农业科学院蔬菜所提供，根结线虫侵染的栝楼根部采自安徽省潜山县梅城镇的栝楼种植地。灰霉菌(Botrytis cinerea)为南京师范大学微生物实验室保存菌种。腐皮镰孢菌(Fusarium solani)ZZG-1 菌珠，中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心。 1.2 方法 1.2.1 根结线虫分离 (1) 贝尔曼漏斗法参考钟雪超 [7]法,将病根用清水洗净，用 1%的 NaClO 浸泡消毒 3 min ，再用无菌水漂洗 3 遍；将根部用解剖刀切成约 1 cm 的小段，置于漏斗中，加无菌水漫过根部组织块，线虫遇水从植物组织内游出，同时在地心引力及线虫自身的重量的作用下，下沉至漏斗下方连接的小管中，收集小管中的根结线虫。这种方法仅能分离活动性的蠕虫型线虫，即分离得到的是幼虫或雄性成虫，而卵和雌性成虫无法通过此方法获得。 (2)直接挑取卵囊与雌性成虫将病根用清水洗净，用 1%的 NaClO 浸泡消毒 3 min ，再用无菌水漂洗3 遍；取病根至培养皿中，左手持镊子固定，右手持解剖刀将病根沿导管方向竖直切开。在解剖镜下寻找根结线虫的卵囊和雌性成虫，并用解剖针挑出，置于 3 cm 培养皿内。 1.2.2 二重培养基的制备在新配制的培养基上，28℃恒温条件下活化菌种，待菌丝长满培养皿后，挑取少量菌丝于 PDA 液体培养基中扩大培养，培养条件为：150 r/min ，28℃恒温培养。 4 天后出现许多大小不一的菌丝球,挑取菌丝球，接种至固体 PDA 培养基，培养基厚度