土壤微生物学特征的测定..doc

土壤微生物学特征的测定.

土壤微生物学特征的测定 一 土壤微生物量碳、氮的测定 将新鲜的土壤样品含水量调节至田间含水量的30%~50%，25℃下密封预培养7~10d,以保持土壤均匀和不同的地方所得结果的可比性。然后迅速测定土壤微生物量碳氮，或在低温4℃下保存。采用氯仿熏蒸-K2SO4提取法测定土壤微生物量碳氮，即称取预处理的湿润土壤每份20.0g（烘干基重）放入50ml烧杯中，将其置于底部有少量NaOH、少量水（约200ml）和去乙醇氯仿的真空干燥器中，抽真空后保持氯仿沸腾3-5min；然后，将干燥器移置在黑暗条件下25℃熏蒸土壤24h，再次抽真空完全去除土壤中的氯仿。将熏蒸好的土壤转移到200ml提取瓶中，加入约80ml 0.5mol/LK2SO4提取液（土水比为1∶4），振荡30min后过滤，得土壤提取液每份土样重复3次。同时做未熏蒸空白和试剂空白。 土壤微生物量碳：用重铬酸钾氧化法测定 吸取10ml土壤提取液于150ml消化管中，加入0.2mol/LKCrO和浓硫酸各5.0ml，再加入少量沸石，混匀，于175℃磷酸浴中煮沸10min。冷却后全部移入150ml三角瓶中，使总体积约80ml，加入2滴邻啡罗啉指示剂，用0.05mol/LfeSO滴定至砖红色。 土壤微生物量碳（Bc）=Ec/Kc，Ec表示未熏蒸与熏蒸对照土壤的浸取有机碳的差值，Kc未转换系数，取值0.38。 土壤微生物量氮：用凯氏定氮法测定 取20ml土壤提取液于250ml消化管中，加入0.19mol/LcuSO溶液0.4ml、浓硫酸6.7ml消化至澄清，冷却后进行定氮。 土壤微生物量氮（Bn）=En/Kn，En为熏蒸与未熏蒸对照土壤矿质态氮的差值，Kn为转换系数，取值0.45。 二 土壤酶活性的测定 土壤过氧化氢酶活性用高锰酸钾滴定法、脲酶活性用靛酚蓝比色法测定。过氧化氢酶活性以20min后每克土消耗。0.02mol/L高锰酸钾毫升数表示，脲酶活性一24h后每百克土NH3-N的毫克数表示。每各土样重复三次测定。 三 土壤基本理化性状测定 一、土壤pH值的测定 土壤样品用水浸提或用中性盐溶液浸提（如酸性土壤可用1mol／L氯化钾溶液；中性和碱性土壤可用0．0lmol／L氯化钙溶液浸提）。水土比一般为2.5：1；盐碱土水土比5：1；泥炭为10：1。经充分搅拌，平衡30min，用酸度计或pH计测定试剂配制1 、pH4.01标准缓冲溶液：将21g苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4，分析纯，105℃烘干）溶于1000m1蒸馏水中。???2、?pH6．87标准缓冲溶液：将3．39g磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯，45℃烘干）和53g无水磷酸氢二钠（Na2HP4，分析纯，45℃烘干）溶于1000m1蒸馏水中。????3、pH18标准缓冲溶液：称取80g硼砂（Na2B4O7·10H2O溶于1000ml煮沸冷却的蒸馏水中。装瓶密封保存。??4、1mol/L氯化钾溶液：将6g氯化钾（KCl，分析纯）溶于1000m1蒸馏水中。该溶液的pH值为-6.0???? 5、01mol/L氯化钙溶液：将02g氯化钙（CaCl2·2H2O，分析纯）溶于1000ml蒸馏水中，即1mol／L氯化钙溶液。取1mol／L氯化钙溶液于500ml烧杯中，加入500ml蒸馏水，滴加氢氧化钙或盐酸溶液调节pH＝6，然后用蒸馏水定容至1000ml，即01mol／L氯化钙溶液。??? [仪器]????pH计或酸度计；pH复合电极（或pH玻璃电极和甘汞标准电极）。[样品处理]????将土壤样品风干磨细过2mm筛，称取10．0g样品于50ml烧杯中，加入25ml无二氧化碳的蒸馏水或1mol／L氯化钾溶液（酸性土壤），或0．01mol／L氯化钙溶液（中性和碱性土壤），用玻璃棒剧烈搅拌1-2min，静置30min，以备测定。此时应注意实验室氨气和挥发性酸雾的影响。[测定]????按仪器说明书开启pH计（或酸度计），选择与土壤浸提液pH值接近的pH标准缓冲溶液（酸性的用pH01缓冲溶液，中性的用pH87缓冲溶液，碱性的用pH18缓冲溶液）作为标准，校正仪器指示的pH值与标准值一致。将pH计的复合电极（或pH玻璃电极和甘汞标准电极）插入土壤浸提液中，轻轻转动烧杯，读出pH值。每份样品测定后，用蒸馏水冲洗电极，并用滤纸将水吸干。 [计算]?pH计读出的pH值。 [备注] 1．分析精度0．1pH值，但精密的pH计可准至0．02pH单位，并使用温度补偿。???2．土壤样品不要磨得过细，以2mm筛为宜。磨好的样品如果不能马上测定，应装瓶密封保存，以防的空气中的氨气和挥发性酸影响。电极插入土壤浸提液后轻轻转动烧杯是必要的，可加速平衡时间，这对于缓冲性较弱或pH较高的土壤尤为重要。若用标准甘汞电极作参比

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