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花叶豆瓣绿组培技术研究.doc

来源：花匠小妙招时间：2024-12-30 02:15

花叶豆瓣绿组培技术研究.doc

花叶豆瓣绿组培技术研究　　摘要：以花叶豆瓣绿品种的叶片、叶柄、茎段为外植体接种于MS附加不同激素的培养基中诱导愈伤组织，并进一步诱导分化出芽及再生植株，结果表明：叶柄诱导效果好于叶片及茎段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最适宜初代诱导。诱导获得的愈伤组织在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L的培养基上进一步分化成苗，以无根苗培养在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培养基中，经23d培养生根。　　关键词：花叶豆瓣绿；组织培养；生长调节剂　　中图分类号 S68 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）06-36-03 　　花叶豆瓣绿（Peperomia obtusifoli）又名花叶椒草，属胡椒科豆瓣绿属变种，多年生草本植物。花叶型植株无主茎，叶簇生，近肉质较肥厚，倒卵形，其叶中部绿色，边缘为一阔金黄色镶边。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶几、装饰柜、博古架、办公桌上，十分美丽。多适用于室内观赏，在我国南方亦可作为地被植物栽植。　　花叶豆瓣绿很难获得种子，故以无性繁殖为主。其无性繁殖有2种方法：一种为水插，只要温度适宜，一年四季均可进行繁殖，简单，成活率较高；另一种为土插，但由于豆瓣绿生长缓慢，采用此法扦插繁殖培养周期长，增殖系数低[1]。本实验在前人研究的基础上，进一步试验了花叶豆瓣绿组织培养和工厂化快繁程序，以筛选出适合花叶豆瓣绿组织培养快速繁殖的最佳外植体，建立花叶豆瓣绿组培快繁技术体系，以期探索出利于花叶豆瓣绿工厂化生产的有效途径[2-3]。　　1 材料与方法　　1.1 材料供试材料取自福州建新园艺场，选取生长健壮、无病虫危害的盆栽花叶豆瓣绿品种。　　1.2 材料处理将剪取的花叶豆瓣绿叶片、叶柄、茎段用自来水流水冲洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用无菌水漂洗，转入0.1%HgCl2中分别消毒4min、6min、8min、10min、12min，用无菌水漂洗5～8次，将叶片切为0.5～0.7cm2的方块，将叶柄、茎段切为0.3～0.5cm的小节备用。　　1.3 培养基配制以MS培养基为基本培养基，不同阶段附加不同浓度的BA、NAA等生长调节剂（表1～3）。培养基煮沸后调pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高压锅中在121℃，1.1kg/cm2下灭菌30min。　　1.4 培养条件将处理好的花叶豆瓣绿叶片切块与茎段分别接种在不同配方培养基上，置于光照培养室内，室温保持25±2℃，光照强度1 500～2 000lx，光照时间12h/d的条件下诱导。　　1.5 继代增殖培养将形成的愈伤组织转移到含⑤、⑥培养基中培养，每瓶接种3块，培养25d左右后，将形成的丛生芽继续分割接种，进一步扩大增殖。　　1.6 生根培养选择生长健壮的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培养基上，观察记录生根和小苗生长状况，并统计生根率。　　1.7 小苗移栽为了使小苗适应盆载环境，可将已经生根的试管苗在室温下开瓶练苗3～5d。取出试管苗，将小苗根部附着的培养基用清水洗净，移入育苗盆中，培养土用消毒过的蛭石及泥炭土。　　1.8 观察记载接种后每隔10d观察一次，记录成活数、污染率、出愈绿、萌芽率、生根率等情况。　　2 结果与分析　　2.1 消毒时间对花叶豆瓣绿无菌系建立的影响外植体不同消毒时间处理效果如表3所示。通过表3数据可见，消毒时间不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植体的污染率显著高于其他消毒时间的外植体的污染率。而消毒12min，HgCl2残留难以清洗，外植体全部死亡。经比较可知，消毒时间在8～10min为最优。　　2.2 不同外植体的选择外植体接入时采用了叶片、叶柄与茎段3个部分，经过观察记录如表4所示。在相同条件下，叶柄分化速度较快，叶片其次，茎段较慢。但叶片褐化问题较其他部位严重。因此，从外植体来源上看，以叶柄效果最好，且诱导时间短，增殖率高。　　2.3不同激素配比对愈伤组织诱导的影响将消毒后的豆瓣绿叶柄外植体分别接入培养基①、②、③、④中，培养25d以后叶柄切口及基部周围产生黄绿色愈伤组织。具体情况如表5所示。由表5可见，在不同激素配比和添加物情况下，花叶豆瓣绿叶柄的成芽率不同。在①、②、③培养基配比中，随着BA与NAA使用比例提高，出愈率有显著提升，但在④号培养基中BA用量超过一定比例时，出愈率显著下降。因此，花叶豆瓣绿诱导最适配方为：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。　　2.4 不同培养基对芽增殖的影响外植体产生小苗以后，继续采用同样的培养基做继代增殖，小苗高2～3cm时将转移的丛生小苗切成较小