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花叶绿萝组培快繁技术研究.pdf

来源：花匠小妙招时间：2024-11-22 09:15

第 4 期绿萝（ Eipremnum aureumi）又名黄金葛、魔鬼藤、黄金藤等，为天南星科绿萝属常绿附生藤本植物.幼叶心脏形，长大后卵圆形，叶深绿色，有光泽，花叶绿萝表面有不规则的黄色斑块，叶色黄绿相间，别具风姿.绿萝的茎蔓粗壮，在热带地区终年常绿，有良好的耐阴性，是良好的室内观叶植物1.绿萝叶面具有较厚的角质层，成熟叶为长卵形，先端渐尖，基部深心形，叶片绿色而富有光泽，叶面上常有不规则黄色斑块或条纹 2-3.在室内能适应较干旱的环境条件，而且绿萝还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的 “ 空气净化器”.其常规繁殖一般采用压条和扦插的方法，但扦插的材料很有限，遗传稳定性差，繁殖系数低，难以满足工厂化生产.本试验以花叶绿萝带节茎段为外植体，通过组织培养方法研究其扩繁过程，为花叶绿萝的规模化生产提供理论依据. 1材料及方法 1.1试验材料供试材料取自银川天地缘花卉生产基地，选择生长正常、健壮的花叶绿萝植株，以带节茎段为外植体. 1.2试验方法 1.2.1外植体不同灭菌时间筛选试验以 0.1%升汞溶液灭菌，灭菌时间设 6，9，12，15，18 min 5 个处理，灭菌后用无菌水冲洗 3 次，将茎段切成 1.0 cm 的小段分别接种于 MS 培养基，每处理重复 4 次，每个重复接种 10 个外植体，接种 10 d 后，统计外植体的污染率和存活情况，筛选出最佳灭菌时间. 1.2.2不同激素质量浓度梯度愈伤组织诱导试验以 MS 为基本培养基，与不同激素种类（ 6-BA、NAA、 2,4-D）、不同质量浓度相组合，配比 3 因素、3 水平试验.3 因素为 3 种不同种类的激素，3 水平为激素的 3 种质量浓度，进行正交试验，共 9 个处理，MS 培养基为对照（ CK），每个处理重复 3 次，每个重复接种 10 瓶，筛选出诱导愈伤组织的最适培养基（表1）. 出愈率（ %）= 产生愈伤组织的外植体数（个）/ 接种外植体数（个）1004 1.2.3愈伤组织芽诱导培养基筛选试验以培育出的愈伤组织为供试材料，接入含有不同外源激素的培养基，采用 3 因素 3 水平正交试验.3 因素为 6-BA、IBA、KT，3 水平为每个激素的 3 种质量浓度，共 9 个处理，使用 MS 培养基为对照（ CK），每个处理 3 个重复，每个重复接 10 瓶愈伤组织，根据每花叶绿萝组培快繁技术研究张盛圣，李娜，张黎（宁夏大学农学院，宁夏银川 750021）摘要：以花叶绿萝带芽茎段为外植体，MS 为基本培养基，探讨不同灭菌时间对外植体成活的影响；不同质量浓度激素组合对愈伤组织诱导及其分化、不定芽诱导、生根的影响.结果表明：带芽茎段可产生愈伤组织和不定芽,诱导愈伤组织的最适培养基为 MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.7 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L,诱导愈伤组织分化的最佳培养基为 MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L,最适的生根培养基为 1/2 MS+NAA 0.1 mg/L. 关键词：花叶绿萝；外植体；培养基；愈伤组织；芽诱导中图分类号：Q943.1文献标志码：A 农业科学研究 Journal of Agricultural Sciences 2015年12月 Dec. 15 第36卷第4期 .36 .4 文章编号：30747 （ 15）40193 收稿日期：2015-07-12 基金项目：宁夏科技支撑计划项目宁夏设施园艺提升发展研究与示范子课题小盆花品种资源收集与种苗快繁技术研究与示范. 作者简介：张盛圣（1991），男，硕士研究生，主要从事观赏植物研究. 通信作者：张黎（1962），女，教授，硕士生导师，主要从事园林植物与观赏园艺.Email:zhang_. 第 36 卷农业科学研究瓶的出芽率、芽粗、芽长及整体长势，筛选出最适愈伤分化的培养基（表 2）. 1.2.4生根培养基筛选试验生根培养基设置 4 个处理，以 MS 和 1/2MS 为基础培养基，添加不同种类、不同质量浓度的激素，将生长健壮的无根苗转接到培养基中，每个处理 3 次重复，每个重复接 10 瓶，20 d 后观察生根数、根粗、根长.筛选出最适生根培养基（表 3）. 2结果与分析 2.1不同灭菌时间对茎段污染情况的影响由表 4 可知，带节茎段在不同灭菌时间的处理下，污染率不同，灭菌时间为 6 min 时，接种外植体污染率最高，灭菌时间为 15 min 时污染率最低，灭菌 18 min 时，污染率也较低，但是植株死亡较多，因此，茎段作为外植体最佳灭菌时间为 15 min. 2.2不同激素及不同质量浓度配比对愈伤组织的诱导将供试材料接种到诱导培养基中培养 20 d 后，外植体开始萌动，培养 30 d 后，首先在外植体的切口处及外围逐渐产生浅绿色的愈伤组织.将健康植株继续在无激素的培养基（ CK）上培养，植株的出愈率为零. 由表 5 可知，绿萝的出愈率较高，浅绿色为正常的愈伤，半透明的愈伤有玻璃化的趋势，表中标出的褐色愈伤是指长出的愈伤组织其中有一部分出现褐化现象，根据愈伤的质量、出愈率，得出处理 6 是最适诱导愈伤组织的激素浓度组合. 2.3外源激素对芽诱导的影响将茎段诱导形成的愈伤组织切下后转入设置好的分化培养基中，经过 50 d 的诱导培养，在愈伤组织上开始分化出芽，继而很快形成丛生芽. 表 6 是在不同激素浓度的组合中，对芽诱导后，每种处理每次重复中随机选择 3 个小芽测其芽长、芽粗及叶片数，并进行显著性分析. 灭菌时间 /min接种瓶数 / 瓶污染瓶数 / 瓶污染率 /% 6401025.0 940717.5 124037.5 154012.5 184025.0 总计2002311.5 处理6-BA/（mgL-1）NAA/（mgL-1）2,4-D/（mgL-1） 11（1.5）1（0.3）1（0.3） 212（0.5）2（0.5） 313（0.7）3（0.7） 42（2.0）12 5223 6231 73（2.5）13 8321 9332 10（CK）000 表1愈伤组织诱导正交实验设计表3生根培养基设置处理 NAA/（mgL-1）IBA/（mgL-1） 1MS0.1 2MS0.2 31/2MS0.1 41/2MS0.2 培养基激素种类表4绿箩茎段接种污染状况表5不同激素质量浓度对愈伤组织的诱导的影响处理接种个数出愈率 /%愈伤状态 13096.67褐色愈伤 23093.33浅绿色愈伤 330100.00 浅绿色愈伤（有半透明状） 43090.00褐色愈伤 530100.00 浅绿色愈伤（有半透明状） 630100.00浅绿色愈伤 73086.67褐色愈伤 83093.33褐色愈伤 930100.00褐色愈伤 10 （ CK） 300无明显效果表2愈伤组织分化正交实验设计处理6-BA/（mgL-1）IBA/（mgL-1）KT/（mgL-1） 11（1.0）1（0）1（0.5） 212（0.5）2（1.0） 313（1.0）3（1.5） 42（2.0）11 5223 6232 73（3.0）13 8321 9332 10（CK）000 20 第 4 期由表 6 可知，供试材料的愈伤组织分化率为 100%.芽长，处理 6 和其他处理之间有显著差异.芽粗，处理 6 与其他处理之间有显著差异.叶片数，处理 6 与处理 2、处理 1 无显著差异，但处理 6 与处理 5、处理 4、处理 9、处理 7、处理 3、处理 8 及 CK 之间有显著性差异.综合表现，处理 6 芽体健壮，叶色浓绿，植株存活率高，处理 6 最适合诱导愈伤组织的分化. 2.4生根培养基的筛选待小苗长到 35 cm 时，即可将其转移到相应处理中进行培养. 由表 7 可知，各处理生根率均为 100%.根长，各处理间无显著差异；根粗，处理 3、处理 4 与处理 1、处理 2 有显著差异，处理 3、处理 4 之间无显著性差异；根数，处理 3 和处理 1、处理 2 有显著差异，处理 3 和处理 4 无显著差异，处理 4 和处理 1 间有显著性差异，处理 4 和处理 2 间无显著差异. 处理 3 根数多，根长的粗壮，根为褐色，根尖为白色，由数据分析可知，NAA 对绿萝生根影响较大，且最适生根培养基为 1/2MS+NAA （ 0.1mg/L）. 3结论与讨论 3.1结论（ 1）带节茎段培养最适灭菌时间为 15 min. （ 2）最适诱导愈伤组织的激素质量浓度组合为 MS+6-BA/2.0 mg/L+NAA 0.7 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L. （ 3） MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L 培养基是最适合绿萝愈伤组织分化的外源激素组合. （ 4）1/2MS+NAA 0.1 mg/L 培养基中，植株生根根数多，根粗壮. 3.2讨论该试验在各阶段组织培养激素质量浓度配比的筛选中，主要筛选愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、以及最适生根培养基.诱导愈伤组织试验中，出现的玻璃化、褐化现象较严重，在不改变其他条件的情况下试验操作时，倒掉培养瓶内的水或者培养基中加入活性炭可以减轻症状；愈伤组织分化的最佳培养基与郭英等的结果一致5，但与王越铭等报道的 3.0 mg/L 的 6-BA 略有不同6；最适生根培养基与陈广玉的结果一致7，与黄凤兰等的结果不一致8；绿萝组织培养在对愈伤组织进行芽诱导培养时，可以生根，但是数量较少. 试验通过组织培养实现离体再生，该途径能达到繁殖周期短、种苗质量好的目的.虽然组织培养的方法变异小，但在试验过程中也有发现，在对花叶绿萝继代过程中会出现绿叶绿萝，对绿叶绿萝继代过程中也会偶尔出现花叶品种，因此，其稳定遗传率和稳定遗传的能力还需进一步试验探索. 参考文献： 1黄玉源,张施君.天南星科观赏植物重要品种及其繁育技术J.仲恺农业技术学院学报，2002,15 （ 4）:54-59. 2包满珠.花卉学M.北京:中国农业出版社,2004. 3吴征镒.云南植物志M.北京：科学出版社,2004： 749-750. 4李浚明.植物组织培养教程M.北京:中国农业大学出版社，1996. 5郭英,梁国鲁.小叶绿萝同源多倍体诱导研究初报J.西南园艺,2002 （ 4）:1-3. 6王越铭,李康.绿萝的组织培养及快速繁殖J.新疆农业科学,1998 （ 3）:138-139. 7陈广玉.绿萝的组织培养及快速繁殖的研究J.北京农业, 2011（ 1）:16-17. 8黄风兰,梁冰,卢宝伟，等.小叶绿萝组织培养技术研究 J.北方园艺,2004 （ 6）:76-78. 注：表中数据采用新复极差法进行差异显著性比较，不同小写字母之间表示差异显著（ P0.05）；同一列中不同字母代表差异程度. 表6外源激素对芽诱导的影响处理芽长 /cm芽粗 /mm叶片数 12.50e3.07f2.30ab 21.70g2.90g2.30ab 32.00f4.87b1.33cd 42.92c3.97d2.00bc 52.50e3.87de2.00bc 65.74a5.17a3.00a 72.57d4.60c1.67bcd 81.97f2.27h0.33e 93.42b3.83e2.00bc 10 （ CK）2.50e2.10i1.00de 处理根长 /cm根粗 /mm根数 12.20d0.50b3.0c 23.20c0.67b4.3bc 35.17a1.70a7.3a 44.00b1.27a6.0ab 表7生根培养基的筛选注：表中数据采用新复极差法进行差异显著性比较，不同小写字母之间表示差异显著（ P0.05）；同一列中不同字母代表差

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