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高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2024-12-09 18:03

本发明涉及高山杜鹃夏秋罗的无性繁殖技术领域，特别涉及一种高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法。

背景技术：

高山杜鹃为杜鹃花科杜鹃花属植物，高山常绿灌木或小乔木，生长在海拔2500～4000m山地阴坡的冷杉林中或林缘草坡上。高山杜鹃花形多种多样，色彩艳丽，颇具观赏价值，已成为木本花卉中重要的一族，在园林上占有重要的地位。近年来我国每年均有批量进口高山杜鹃，成品花价格特别高，且枝粗叶芽少，对扦插育苗和嫁接育苗均不利，成活率低，费用高。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是：提供一种移植成活率高的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法，包括以下步骤：

步骤1：截取高山杜鹃夏秋罗的茎尖进行消毒，制得无菌外植体；

步骤2：对无菌外植体植入丛生芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，得到丛生芽；

步骤3：截取从步骤2中得到的丛生芽的茎节，并分别平躺移植至继代培养基，进行继代培养，继代培养后，各茎节处长出不定芽；

步骤4：将长出不定芽的茎节移植至生根壮苗培养基，在光照强度4000-4500lx，环境温度20-28℃，培养20d后，在生根壮苗培养基中加入高山杜鹃夏秋罗共生菌液，继续培养2-4h后，进行炼苗移栽；

所述高山杜鹃夏秋罗共生菌液的制备方法如下：

步骤41：将1g高山杜鹃夏秋罗的根际土溶解于15ml的无菌水中，于摇床上100-150rpm震荡1-2h，得到根际土浸提液，然后将根际土浸提液涂布于氨苄青霉素的pda平板上，与20-28℃静置培养24h，挑取菌落，溶解于1ml无菌水中，摇匀后，于4℃贮藏。

本发明的有益效果在于：本发明提供的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，通过在高山杜鹃夏秋罗生根壮苗培养的后期向生根壮苗培养基内加入共生菌液，其共生菌液由高山杜鹃夏秋罗的根际土分离培养制得，使得高山杜鹃夏秋罗在生根壮苗培养后利用共生菌的共生效应，能够进一步促进其生长发育，使其在移栽至基质前提前适应非无菌的生长环境，从而提高移栽的存活率，经过试验，经过上述方法制得的组培苗在移栽至土壤后的存活率高达90％以上，而作为对照组即不加入共生菌液的组培苗在移栽至土壤后的存活率仅为83％以下，证明本发明涉及的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法的移栽存活率得到提升。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。

本发明最关键的构思在于：通过在高山杜鹃夏秋罗生根壮苗培养的后期向生根壮苗培养基内加入共生菌液，其共生菌液由高山杜鹃夏秋罗的根际土分离培养制得，使得高山杜鹃夏秋罗在生根壮苗培养后利用共生菌的共生效应，能够进一步促进其生长发育，提高移栽存活率。

本发明提供一种高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法，包括以下步骤：

步骤1：截取高山杜鹃夏秋罗的茎尖进行消毒，制得无菌外植体；

步骤2：对无菌外植体植入丛生芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，得到丛生芽；

步骤3：截取从步骤2中得到的丛生芽的茎节，并分别平躺移植至继代培养基，进行继代培养，继代培养后，各茎节处长出不定芽；

所述高山杜鹃夏秋罗共生菌液的制备方法如下：

上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，通过在高山杜鹃夏秋罗生根壮苗培养的后期向生根壮苗培养基内加入共生菌液，其共生菌液由高山杜鹃夏秋罗的根际土分离培养制得，使得高山杜鹃夏秋罗在生根壮苗培养后利用共生菌的共生效应，能够进一步促进其生长发育，使其在移栽至基质前提前适应非无菌的生长环境，从而提高移栽的存活率，经过试验，经过上述方法制得的组培苗在移栽至土壤后的存活率高达90％以上，而作为对照组即不加入共生菌液的组培苗在移栽至土壤后的存活率仅为83％以下，证明本发明涉及的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法的移栽存活率得到提升。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤4中的生根壮苗培养基的配方为1/2ms+蔗糖20g/l+活性碳2g/l+iba0.5mg/l。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤4中的炼苗移栽步骤具体为：将经过加入共生菌液共同生根壮苗培养后的组培苗取出，洗净根系的培养基，移栽于消毒过的基质，所述基质为珍珠岩和泥炭土按照1∶1配比而成，所述基质内加入高山杜鹃夏秋罗共生菌液，待组培苗培养至5cm以上，将高山杜鹃夏秋罗移栽至土壤中。

由上述描述可知，通过在移栽的基质中也加入高山杜鹃夏秋罗的共生菌液，能够进一步提高其移栽存活率。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤3中的继代培养的周期为30d，共继代培养2-3次。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤3中的继代培养基为1/4ms+zt0.5～1.0mg/l+iaa0.5mg/l+ga31.0mg/l。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述丛生芽诱导培养基为1/4ms+zt2.0mg/l+iaa0.5mg/l。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤4中，当生根壮苗培养至17d时，将组培瓶移至大棚继续培养3d。

进一步的，上述高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，所述步骤4的炼苗移栽培养过程中，组培苗移栽至基质中培养时，每隔2d喷洒一次生根壮苗液体培养基。

实施例1

一种高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法，包括以下步骤：

步骤1：截取高山杜鹃夏秋罗的茎尖进行消毒，制得无菌外植体；

步骤2：对无菌外植体植入丛生芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，得到丛生芽；所述丛生芽诱导培养基为1/4ms+zt2.0mg/l+iaa0.5mg/l；

步骤3：截取从步骤2中得到的丛生芽的茎节，并分别平躺移植至继代培养基，进行继代培养，继代培养后，各茎节处长出不定芽；所述继代培养的周期为30d，共继代培养3次；所述继代培养基为1/4ms+zt1.0mg/l+iaa0.5mg/l+ga31.0mg/l；

步骤4：将长出不定芽的茎节移植至生根壮苗培养基，在光照强度4500lx，环境温度28℃，培养20d后，在生根壮苗培养基中加入高山杜鹃夏秋罗共生菌液，继续培养4h后，进行炼苗移栽；当生根壮苗培养至17d时，将组培瓶移至大棚继续培养3d；

所述生根壮苗培养基的配方为1/2ms+蔗糖20g/l+活性碳2g/l+iba0.5mg/l；

所述炼苗移栽步骤具体为：将经过加入共生菌液共同生根壮苗培养后的组培苗取出，洗净根系的培养基，移栽于消毒过的基质，所述基质为珍珠岩和泥炭土按照1∶1配比而成，所述基质内加入高山杜鹃夏秋罗共生菌液，待组培苗培养至5cm以上，将高山杜鹃夏秋罗移栽至土壤中；炼苗移栽培养过程中，组培苗移栽至基质中培养时，每隔2d喷洒一次生根壮苗液体培养基；

所述高山杜鹃夏秋罗共生菌液的制备方法如下：

步骤41：将1g高山杜鹃夏秋罗的根际土溶解于15ml的无菌水中，于摇床上150rpm震荡2h，得到根际土浸提液，然后将根际土浸提液涂布于氨苄青霉素的pda平板上，与28℃静置培养24h，挑取菌落，溶解于1ml无菌水中，摇匀后，于4℃贮藏。

实施例2

一种高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法，包括以下步骤：

步骤1：截取高山杜鹃夏秋罗的茎尖进行消毒，制得无菌外植体；

步骤2：对无菌外植体植入丛生芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，得到丛生芽；所述丛生芽诱导培养基为1/4ms+zt2.0mg/l+iaa0.5mg/l；

步骤3：截取从步骤2中得到的丛生芽的茎节，并分别平躺移植至继代培养基，进行继代培养，继代培养后，各茎节处长出不定芽；所述继代培养的周期为30d，共继代培养2次；所述继代培养基为1/4ms+zt0.5mg/l+iaa0.5mg/l+ga31.0mg/l；

步骤4：将长出不定芽的茎节移植至生根壮苗培养基，在光照强度4000lx，环境温度20℃，培养20d后，在生根壮苗培养基中加入高山杜鹃夏秋罗共生菌液，继续培养2h后，进行炼苗移栽；当生根壮苗培养至17d时，将组培瓶移至大棚继续培养3d；

所述生根壮苗培养基的配方为1/2ms+蔗糖20g/l+活性碳2g/l+iba0.5mg/l；

所述高山杜鹃夏秋罗共生菌液的制备方法如下：

步骤41：将1g高山杜鹃夏秋罗的根际土溶解于15ml的无菌水中，于摇床上100rpm震荡1h，得到根际土浸提液，然后将根际土浸提液涂布于氨苄青霉素的pda平板上，与20℃静置培养24h，挑取菌落，溶解于1ml无菌水中，摇匀后，于4℃贮藏。

对比试验：

将上述实施例1和实施例2的方法以及对比例1和对比例2的方法对同一批次高山杜鹃夏秋罗进行培养，上述对比例1采用与实施例1相同的试验条件，但对比例1中没有在生根培养基及基质中加入共生菌液，上述对比例2采用与实施例2相同的试验条件，但对比例2中没有在生根培养基及基质中加入共生菌液；试验结果如下表：

由上表可知，实施例1和实施例2的方法组培快繁得到的高山杜鹃夏秋罗的移栽存活率相比对比例均有明显提高。

综上所述，本发明提供的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法中，通过在高山杜鹃夏秋罗生根壮苗培养的后期向生根壮苗培养基内加入共生菌液，其共生菌液由高山杜鹃夏秋罗的根际土分离培养制得，使得高山杜鹃夏秋罗在生根壮苗培养后利用共生菌的共生效应，能够进一步促进其生长发育，使其在移栽至基质前提前适应非无菌的生长环境，从而提高移栽的存活率，经过试验，经过上述方法制得的组培苗在移栽至土壤后的存活率高达90％以上，而作为对照组即不加入共生菌液的组培苗在移栽至土壤后的存活率仅为83％以下，证明本发明涉及的高山杜鹃夏秋罗组培快繁方法的移栽存活率得到提升。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。