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GB T 36844

来源：花匠小妙招时间：2024-11-30 19:51

ICS 65.020.01 B 16 国中华人民共和国国家标准 GB/T 36844-2018 十字花科细菌性黑斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Pseudomonαs syringae pv. maculicolα ( McCulloch) Young et al. 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施国家市场监督管理总局峪非中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/ T 36844-20 18 目u 昌本标准按照GB 1.1-2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准向全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提归井归I Io 本标准主要起草单位：中华人民共和同湖南出入境检验检疫局、中华人民共和同上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：唐连飞、周慧平、莫瑾、易建平、朱金｜司、黄迎波、谭建锡。 I GB/ T 36844-20 18 采用商品化DNA 提取试剂盒时，按试剂盒操作说明进行。 C .4 PCR 检测 C .4. 1 PCR 反应体系检测lj 十字花科细菌性黑斑病菌采用的 PCR 反应体系见表C. 2 。表 C.2 检测十字花科细菌性黑斑病菌的PCR 反应体系组成力I I 样体积／µL 2×PCR 预混液 10.0 正｜句号｜物（l O pmol/µL) 1.0 反J oJ 习｜物。O pmol/µL) 1.0 模极 DN八Cl ng/ µL~ 10 ng/ µL) 5 3.0 双蒸7j( 20 总体积 C.4.2 PCR 反应循环参数 94 ℃预变性3 min ; 94 ℃： 30 日， 63 ℃： 30 s, 72 ℃： 30 日，进行 35 个循环；72 ℃延伸5 min;4 ℃保存。 C.4.3 PCR 扩增产物的检测用 TAE 电泳缓冲液制备2 %的琼脂糖凝胶，按比例混匀电泳上样缓冲液和PCR 产物，将泪有上样缓冲液的PCR 扩增产物力11 至样品孔中，用 DNA Marker 做分子量的标记，进行电泳分析，电泳结束后，在凝胶成像分析仪下观察是再扩增出预期的特异性DNA 电泳带，拍摄并记录实验结果。 C .5 实时荧光PCR 检测 C.5 .1 反应体系实时荧光定性PCR 反应体系见表C. 3 。每个样品进行实