首页分享四种药用植物化学成分及生物活性研究

四种药用植物化学成分及生物活性研究

来源：花匠小妙招时间：2024-08-30 17:49

四种药用植物化学成分及生物活性研究

本论文对紫花列当Orobanche coerulescens Steph、睡莲花Nymphaea candidaPresl、新疆圆柏Juniperus sabina L.和黑紫橐吾Ligularia atroviolacea进行了化学成分分析、生物活性筛选以及药理作用研究。全文由以下五部分组成。第一部分紫花列当化学成分及生物活性研究紫花列当Orobanche coerulescens Steph为列当科列当属二年生或多年生寄生草本植物,性温、味甘,生长于沙丘、干草原、砾石沙地和戈壁之中,寄生在菊科蒿属植物的根上,具有补肾、强筋之功效,用于肾虚、腰膝冷痛、阳痿遗精和神经官能症等疾病的治疗。本论文在文献调研基础上对紫花列当化学成分及生物活性进行了研究,并从免疫抗病毒角度探讨紫花列当中特征性成分类叶升麻苷的肝保护作用及其机制。1)采用大孔树脂、硅胶和Sephadex LH-20等色谱技术对紫花列当进行系统的植物化学研究,从中分离得到19个化合物,利用UV和NMR等波谱手段及理化性质鉴定了其中的15个化合物,分别为类叶升麻苷(Ⅰ-1)、异类叶升麻苷(Ⅰ-2)、crenatoside(Ⅰ-3)、cistanoside F(Ⅰ-4)、sinapoyl-4-O-β-D-glucoside(Ⅰ-5)、腺苷(Ⅰ-6)、β-谷甾醇(Ⅰ-7)、齐墩果酸(Ⅰ-8)、琥珀酸(Ⅰ-9)、咖啡酸(Ⅰ-10)、原儿茶醛(Ⅰ-11)、对羟甲基苯甲酸(Ⅰ-12)、β-胡萝卜苷(Ⅰ-13)、D-半乳糖醇(Ⅰ-14)和甘露醇(Ⅰ-15);除化合物Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3外,其余化合物均为首次从该植物中分离得到。2)通过大孔树脂富集该药材有效部位苯乙醇总苷,并采用HPLC测得其所含特征性成分类叶升麻苷的含量可达80%以上。3)DPPH自由基清除试验显示紫花列当提取物(苯乙醇总苷)及其所含的苯乙醇苷类化合物均具有较好的抗氧化能力,其清除DPPH自由基能力接近于抗坏血酸。4)采用卡介苗(BCG)整体致敏、脂多糖(LPS)离体攻击构建大鼠原代肝细胞免疫性损伤模型,在体外观察类叶升麻苷的保肝作用。类叶升麻苷各剂量组在6、12和24h均可不同程度地使升高的AST和ALT下降,其作用与阳性对照药物联苯双酯DDB相似;类叶升麻苷高剂量组在3h可显著降低AST,并与低剂量组间存在显著差异。此外,类叶升麻苷各剂量组在6、12和24h均可不同程度地使升高的NO含量下降(P＜0.01,P＜0.05),其作用接近于阳性对照药物DDB。5)昆明种雄性小鼠72只,随机分为正常对照组、免疫性肝损伤模型组(BCG+LPS组)、DDB阳性对照组(200 mg/kg)以及类叶升麻苷低、中、高剂量组(50、150、300 mg/kg)共12组,测定并比较各组小鼠肝脏、脾脏系数,采用连续监测法或比测法测定并比较各组小鼠肝组织匀浆中ALT、AST和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)和NO的含量,采用流式细胞仪测定各组小鼠外周血中CD_4~+/CD_8~+细胞亚群的比例,采用酶链免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、白介素-2(IL-2)和白介素-4(IL-4)细胞因子的变化,采用免疫组化法观察细胞凋亡基因Bax和Bcl-2在小鼠肝组织中的表达,并采用HE染色,观察各组小鼠肝脏病理组织学变化。研究结果显示,类叶升麻苷各剂量组均能不同程度的使肝组织SOD活性增高,MDA含量降低,且类叶升麻苷高剂量组升高组织SOD活性和降低MDA含量的能力与联苯双酯组接近,提示类叶升麻苷具有一定的抗肝脏脂质过氧化能力。应用类叶升麻苷后,小鼠外周血中CD_4~+/CD_8~+细胞亚群的比例没有发生变化,但使Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ分泌量降低,Th2型细胞因子IL-4、IL-10的分泌量增加,降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2细胞比例的平衡,对肝组织损害具有保护和改善作用。此外类叶升麻苷各剂量组均能使小鼠肝细胞浆内Bax蛋白的表达显著降低,Bcl-2的表达显著增加;说明类叶升麻苷在肝损伤细胞调亡的过程中,起到了抑制肝细胞过度调亡的作用。体内试验结果进一步阐述了类叶升麻苷的肝保护作用,其作用机制可能与有效清除自由基,降低脂质过氧化产物生成,调节Th1和Th2型细胞因子分泌,恢复Th1/Th2细胞的平衡及调节细胞凋亡基因Bax/Bcl-2的表达有关。6)利用HepG2.2.15细胞考察了紫花列当中类叶升麻苷、异类叶升麻苷等三个苯乙醇苷类化合物的抗乙肝病毒作用,结果显示三个化合物均能抑制HBVsAg和HBV eAg的表达,并对HBV DNA的复制也有一定的抑制作用。第二部分睡莲花化学成分及生物活性研究睡莲花Nymphaea candida Presl为睡莲科睡莲属多年生水生草本植物雪白睡莲的干燥花蕾,主要分布于我国新疆的南部地区,在维吾尔族民间用于热症引起的头痛、热感咳嗽及小儿急、慢惊风等病症的治疗。本研究采用各种色谱技术方法对睡莲花乙醇提取物进行系统地化学成分研究;并利用抗氧化能力测定、体外保肝和抗病毒等试验对其进行生物活性研究。1)采用大孔树脂、硅胶和Sephadex LH-20等色谱技术从睡莲花提取物中分离得到21个化合物,通过UV、MS和NMR等波谱技术及理化分析方法鉴定了其中的19个化合物,分别为没食子酸(Ⅱ-1)、没食子酸甲酯(Ⅱ-2)、芦丁(Ⅱ-3)、槲皮素(Ⅱ-4)、山奈酚(Ⅱ-5)、槲皮素3-甲醚(Ⅱ-6)、小麦黄素7-甲醚(Ⅱ-7)、异槲皮苷(Ⅱ-8)、黄芪苷(Ⅱ-9)、槲皮素3-O-甲基-3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅱ-10)、槲皮素3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅱ-11)、山萘酚3-O-芸香糖(Ⅱ-12)、对二没食子酸(Ⅱ-13)、间二没食子酸(Ⅱ-14)、豆甾醇(Ⅱ-15)、1-二十二烷酸甘油酯(Ⅱ-16)、1-二十四烷酸甘油酯(Ⅱ-17)、正十六烷醇(Ⅱ-18)和正二十二烷(Ⅱ-19);其中Ⅱ-6～8、11～13和15～18为睡莲属植物首次报道。2)DPPH·自由基清除试验和还原能力测定显示睡莲花提取物及其所含的酚酸及黄酮类化合物均具有较好的抗氧化能力,其结果接近于阳性对照抗坏血酸;其中活性较强的乙酸乙酯部位(NCE)还具有较强的超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基清除能力。3)采用卡介苗整体致敏、脂多糖离体攻击诱导的大鼠原代肝细胞免疫性肝损伤模型考察了睡莲花乙酸乙酯提取物NCE的保肝能力,试验结果显示NCE对血清中AST、ALT以及NO的影响接近于阳性对照药甘利欣GRZ,说明NCE具有一定的保肝降酶作用。4)利用HepG2.2.15细胞考察了睡莲花乙酸乙酯提取物NCE的抗乙肝病毒作用。结果显示无毒剂量的NCE能显著抑制HBVsAg和HBVeAg的表达,同时也能抑制HBVDNA的复制。5)DPP-Ⅳ高通量筛选显示睡莲花提取物有一定的降血糖作用。第三部分新疆圆柏化学成分及生物活性研究新疆圆柏Juniperus Sabina L,又名沙地柏,为柏科Cupressaceae常绿匍匐灌木,主要分布于我国的新疆、青海、甘肃等地,药用果实和枝叶,具有驱风镇静、活血止痛之功效,维吾尔族民间用于风湿性关节炎、小便不利等病症的治疗。本研究通过各种色谱技术对新疆圆柏新鲜叶进行系统的植物化学研究,从中分离了23个化合物,采用UV、MS、NMR和2DNMR等波谱技术及理化手段鉴定了其中的21个化合物,分别为α-雪松醇(Ⅲ-1)、园柏香豆素(Ⅲ-2)、异柏油酸(Ⅲ-3)、β-谷甾醇(Ⅲ-4)、鬼臼毒素(Ⅲ-5)、柏木双黄酮(Ⅲ-6)、柏木双黄酮4′,4′″-二甲酯(Ⅲ-7)、芹菜素(Ⅲ-8)、穗花杉双黄酮(Ⅲ-9)、罗汉松双黄酮A(Ⅲ-10)、槲皮素3-O-β-D-6″-乙酰吡喃葡萄糖苷(Ⅲ-11)、异高黄芩素7-O-β-D-木糖苷(Ⅲ-12)、儿茶素(Ⅲ-13)、杨梅素3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ-14)、槲皮素(Ⅲ-15)、芦丁(Ⅲ-16)、茵芋苷(Ⅲ-17)、undulatoside A(Ⅲ-18)、hypolaetin 7-O-β-xylopyranoside(Ⅲ-19)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅲ-20)和紫丁香苷(Ⅲ-21);其中化合物Ⅲ-7、9～12、14和17～21为首次从该植物中分离得到。体外抗氧化试验结果显示新疆圆柏乙醇提取物及部分化学成分可有效清除DPPH自由基,具有一定的抗氧化作用。第四部分黑紫橐吾化学成分研究黑紫橐吾Ligularia atroviolacea为菊科千里光族橐吾属多年生草本植物,生长于海拔3000-4000米的高山草地之中,广泛分布于我国云南西北部、四川、贵州、湖北西部和甘肃西南部等地。橐吾属植物在我国有一百余种,其中有二十余种在民间有药用记载,具有消炎止痛、止咳祛痰、活血化癖之功效,在民间用于咳嗽、流行性感冒等疾病的治疗。本课题组在前期研究基础上,对产自云南丽江橐吾属植物黑紫橐吾地上部分乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行了化学成分研究,从中分离得到了4个化合物,并通过各种理化手段及现代波谱技术鉴定出了它们的结构:呋喃雅槛蓝烷-3烯-15,6α-内酯(Ⅳ-1)、1α-氯-6β-异丁酰基-9酮-10β-羟基-呋喃雅槛蓝烷(Ⅳ-2)、8α-[艾里莫芬烷-3′,7′(11′)-二烯-12′,8′α;5′,6′α-二内酯]-艾里莫芬烷-二烯-12,8α;15,6α-3,7(11)-二内酯(Ⅳ-3)、黑紫橐吾A(Ⅳ-4)。第五部分综述近年来苯乙醇苷类化合物的研究进展