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各国药典无菌检查法差异性

来源：花匠小妙招时间：2024-11-29 10:35

各国药典无菌检查法差异性

无菌检查法（Sterility Tests），从名称即检查是否无菌。此检查广泛适用于所有药典规定需保持无菌状态的药品、医疗器械、原材料及辅料等，所以是制药领域中不可或缺的一环。

尽管中国药典、美国药典等国际权威药典均对无菌检查法设有明确规定，但具体实施细节在不同国家间存在差异。对于同时在中美或其他多国进行药品注册申报的企业而言，明确区分各国药典中的无菌检查要求显得尤为重要。

业界普遍关心的一个焦点是：能否研发出一种统一的无菌检测方法，以同时满足多国申报的需求或者，如何设计实验方案，使之既经济高效又能顺应多国申报的标准。

一、认识无菌检查法

除去培养基制备、储存和稀释液、冲洗液配制等准备工作，无菌检查法实际包含3个部分的实验，分别为：培养基适用性检查、方法适用性试验和供试品的无菌检查。

（1）培养基适用性检查

培养基适用性检查主要目的有两个：首先就可以判断检测不到细菌真菌，不是培养基自身造成的。是验证所用培养基的无菌状态，即执行无菌性检查。这一过程通过在适宜的温度条件下静置观察培养基，以确认其未受微生物污染。其次，需确认培养基对目标细菌或真菌具有良好的生长支持能力，并确保这些微生物能在规定时间内被有效观测到，此即灵敏性检查。这一步骤通过向培养基接种特定菌种，并观察其生长状况来实现。完成上述两项实验后，就能排除因培养基自身问题导致无法检测到细菌或真菌的可能性。

（2）方法适用性试验

核心目的在于评估所选方法薄膜过滤法或直接接种法对于待测产品的适用性。特别是针对那些本身含有抑菌成分的产品，仅凭整个检验周期内结果为阴性，并不能直接断定其无菌状态。因为抑菌性可能影响检测结果的真实性。因此，必须排除检验操作不当及产品自身抑菌性对结果的干扰。每当引入新产品进行无菌试验或实验条件有所调整时，均需同步开展验证试验，以确保无菌检查的准确性和可靠性

（3）供试品的无菌检查

这是实实在在的对于产品无菌性的检测，涵盖了从检测数量、检验量到阴/阳性对照的设置、接种的具体要求、培养过程中的观察以及最终结果的判读，每一个环节都制定了详细的规则。

谈及检测数量与检验量，前者指的是在一批次产品中，为确保检测结果的代表性，需要随机抽取的样品数量；而后者，则是从每瓶或每支被抽样的产品中，取出的用于无菌检测的供试品体积。通过科学合理地设定检测数量和检验量，能够更全面、更准确地评估整批产品的无菌状态，确保每一环节都符合高标准的质量要求。

二、各国药典中无菌检查法章节

三、各国药典比较分析

关于无菌检查法，美国、日本、欧洲药典等基本实现药典协调，因此本文着重以中美之间的差异为切入点进行分析：

（1）菌种差异

在无菌检测中使用的“标准菌种”，尽管各国通常使用的种类相似，但每种菌种都拥有其独特的ID编号。以中国为例，主流机构为中国医学细菌保藏管理中心（CMCC），负责提供和认证这些菌种。而在欧美国家，被广泛认可的标准菌种来源包括美国标准菌种保藏中心（ATCC）、法国巴斯德研究所菌种保藏中心（CIP）、英国菌种保藏中心（NCTC）、日本菌种保藏中心（NBRC）以及英国食品工业与海洋细菌菌种保藏中心（NCIMB）。

针对不同来源的菌株，国家药典委员会在2018年ICH Q4药典相关检测方法专题研讨会上提出的协调建议是：“基本一致，可以协调，不同来源菌株一致性需进行验证”。中国药典的<9203>强调，“标准菌株应来自认可的国内或国外菌种保藏机构”。然而，在<1101>章节中，并未明确允许使用等效菌株作为替代。同样地，美国药典<71>章节中也未提及与<61>章节中“等效菌株”（equivalent strains）相关的内容。关于如何判断不同编号和机构的同一种菌具有等效性，以及如何开展相关的验证实验，目前尚未有明确的定论或统一标准。

（2）稀释液/冲洗液

通过对比中美两国药典，我们可以观察到在稀释液和冲洗液的使用上存在差异，特别是在薄膜过滤法的应用中。美国药典列出了三种不同的稀释液：溶液A、溶液D和溶液K。其中，溶液A的配方与中国药典中规定的0.1%无菌蛋白胨水溶液完全一致。溶液D则是在溶液A的基础上添加了表面活性剂，这与中国药典中“如有需要，可在上述溶液中添加表面活性剂或中和剂”的说明相吻合。

值得注意的是，中国药典并未严格限定稀释液或冲洗液的类型。因此，一个值得探讨的问题是：如果美国药典中的溶液K在经过充分验证后，被证明不会对无菌检查法造成不良影响，那么它是否有可能得到中国药典的认可？溶液K主要用于油剂和油性溶剂的稀释，而中国药典对于非水溶性供试品的规定是“取规定量，直接过滤；或混合溶于适量含Tween 80或其他适宜乳化剂的稀释液中”。

尽管已有众多文章或研究对用于非水溶性供试品检测的稀释液进行了改进，如采用磷酸盐溶液、探索Tween 80浓度梯度等，但笔者认为，在现有稀释液能够满足方法适用性的前提下，应优先考虑使用药典中明确规定的稀释液。这样做不仅符合法规要求，也有助于确保检测结果的准确性和可靠性。

（3）培养基差异

而主要培养基，硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨培养基，虽然中美药典要求大致相似，但仍需要注意细节问题。

本文聚焦于无菌检查法的介绍，并深入对比分析了该方法在不同国家药典中的具体规定。值得注意的是，中国药典在无菌检查法的标准上暂未与国际实现完全统一，这一现状给那些寻求药品双报或多报的企业带来了额外的挑战。为了确保注册流程的顺利进行，针对注册国的不同药典要求，建立与之相符合的无菌检查法，或许是一种更为稳妥和可靠的策略。