核酸检测结果为什么这么慢?检验人:我们已经拼尽全力了
正文共:2144字
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从前,你和小伙伴儿相约吃饭、唱歌、KTV
谁曾想到
现在相约核酸检测竟也成为一种社交
走到采样台前,总是有很多困惑
天天都在说的“核酸检测”
到底是什么呢?
Q1
什么是核酸检测?
“医生,我要做核酸!”
“请问你是做新冠病毒核酸检测么?”
“啊!肯定嘛,难不成还有其他核酸检测吗?”
“核酸检测=新冠检测”???其实,新冠病毒核酸检测只是核酸检测的其中一项。在新冠疫情发生以前,核酸检测方法就广泛应用于病原微生物检测中,作为诊断疾病和监测病毒载量的重要手段,例如,我们熟知的乙肝病毒DNA定量检测、人乳头瘤病毒(HPV)检测、人免疫缺陷病毒(HIV) RNA检测等。因此,从检测范围来讲,“核酸检测>新冠检测”。
那么,什么是核酸呢?
核酸是地球上几乎所有生物的遗传物质,核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。每种病毒只含有一种核酸,DNA或者是RNA,位于病毒的内部,外部是 “保护型蛋白外壳”。
新型冠状病毒是一种RNA病毒,如果能在患者样本中检测到新型冠状病毒的RNA,提示该患者可能被新型冠状病毒感染。
Q2
采嘴巴?捅鼻子?为啥不采血呢?
目前,新冠病毒核酸检测常规的样本采集方式包括咽拭子及鼻咽拭子。也就是俗称的“捅鼻子”和“捅喉咙”。
“医生,那到底哪种舒服点?”
“嗯……这个就因人而异了,每个人不同部位的敏感性不同嘛,但都不会很舒服。对检测而言,鼻咽拭子的准确性更高一些”。
“医生,那这个核酸检测能不能采血嘛?”
“不能……”
因为新冠病毒感染人体之后,首先会在呼吸道上皮细胞中“扎根”繁殖。因此,呼吸道标本(鼻咽拭子、咽拭子、痰液以及肺泡灌洗液)检测的阳性率是最高的。由于在感染病毒的初期,病毒可能还没有侵入到患者的血液,此时检测血液中的病毒核酸很可能会是阴性,这样的假阴性结果就会导致漏检。
Q3
核酸检测怎么“抓捕”新冠病毒?
第一步:保存及运输
采样后,将拭子放入病毒保存液中,运输至新冠病毒核酸检测实验室。病毒保存液可保持病毒的活性与完整性。同时保存液中含有多种抗生素,打倒了“竞争伙伴”,吃好喝好,病毒就可以独占“舒适”的环境,在这片乐园里“自由自在”地生活了。
第二步:震荡
病毒采样管送到检测实验室后,首先在生物安全柜中取出,进行充分震荡,将拭子上粘附的呼吸道上皮细胞及新冠病毒一个都不能少地“抖落”到保存液中。
第三步:提取核酸
① 裂解
在进行核酸检测前,必须先用胍盐把花花绿绿的蛋白质“马甲”给脱了,才能将病毒的核酸释放出来,露出病毒的“真面目”。
② 结合
加入磁珠与核酸结合。与各种细胞碎片、蛋白质说“拜拜”啦!
“我们的目标是?” “抓住核酸!”
③ 洗涤
结合一次就能抓到核酸了?哪有那么轻松哦!抓是抓到了,不过还是有少量的碎片、蛋白跟着核酸一起被黏上了。如何提高核酸的纯度?我们有两大法宝:加盐,加酸。
“吸附核酸-高盐低pH”、“洗脱核酸-低盐高pH”,反复两三次的吸附、洗脱,实现核酸的提取纯化。剩下的就是“赤裸裸”的核酸啦。
第四步:检测核酸
新冠病毒核酸检测常规筛查采用的是实时荧光PCR方法。PCR技术于1983年由美国著名化学家凯利·穆利斯(Kary Banks Mullis)发明,并获得1993年诺贝尔化学奖。PCR技术是通过模拟生物体体内DNA复制的方式,在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。
PCR反应就像一个大型装配车间。想要扩增某个病毒片段,首先根据它的特点设计一对引物。引物就是最有力的识别并定位的“抓手”,具有“指哪打哪”的精确性。在一群病毒核酸中,想抓新冠还是流感,抑或是鼻病毒、呼吸道合胞病毒等,只有你想不到,没有他抓不到。
当他识别到新冠病毒的“特点”——特异性的片段,马上一前一后“抓捕”,再添加dNTP、Mg2+、Taq酶等原材料,调节不同的温度,历经“变性-退火-延伸”三大步,完成病毒核酸组装。每扩增一次,DNA产量呈指数增长。新冠病毒扩增一般需要40个循环,理论上1个拷贝可以得到240=1,099,511,627,776个拷贝。即使样本中病毒含量很低,都可以通过PCR扩增检测出来。因此PCR反应有高特异性和高灵敏度的特点。
240个核酸片段拷贝,数量是很多,但无色无味又看不见,“敌在暗处”怎么办?那我们就让他在“明处”!实时荧光PCR反应就是在PCR反应基础上加入探针,每扩增出目标片段即会发出荧光,被荧光探测器捕获。
随着扩增次数的增加,荧光量累积,就是我们看到的曲线图了,我们就是通过它来判断有没有新冠病毒的。
“咦,医生,为啥阳性曲线图和阴性曲线图里面都有个阳性的曲线喃?是不是阴性被污染了哦?”
“莫慌,那个是人类管家基因,就是人类所有细胞都稳定表达的基因。”
“我是查新冠病毒,这个什么“管家”是来干啥呢?”
“这个是用来监测采样、运输以及检测过程的!”
“是不是管家基因阳性就代表采样部位没问题呢?”
“这可不一定,管家基因嘛,只能代表采到人体组织了,至于是否采到病毒潜伏部位,这可不一定。”
“哦!我终于知道为什么要第二天拿核酸报告了,我还以为你们采了样放上机器就出结果了,原来还有这么多步骤!”
对哒!一个小小的核酸检测囊括了那么多的奥秘,在新冠疫情防控工作中发挥了大大的作用!
来源:检验医学网
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