百合三种病毒的多重RT

园艺学报2007,34(2):443-448ActaHorticulturaeSinica

收稿日期:2006-07-10;修回日期:2007-03-14基金项目:国家社会公益研究项目(2005DIB022);国家科技支撑项目(2006BAD01A18);北京市花卉重点项目(YL2HH2006001,YLHH2006002)3通讯作者Authorforcorrespondence(E2mail:mingjunmail@yahoo1com1cn)百合三种病毒的多重RT-PCR检测徐榕雪1,2,明军13,穆鼎1,刘春1,汤庚国2,王晓武1(1中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081;2南京林业大学森林资源与环境学院,南京210037)摘要:根据基因库中黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)、百合斑驳病毒(Lilymottlevirus,LMoV)、百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)的外壳蛋白基因序列,设计了3对特异引物,通过对扩增条件进行优化,建立了同时检测CMV、LMoV和LSV的多重RT-PCR检测方法。该方法可以从带有CMV、LMoV和LSV的样品中同时扩增出3条大小与试验设计相符的657bp(CMV)、428bp(LMoV)、171bp(LSV)的特异性多重RT-PCR扩增带。扩增产物测序表明,CMV、LMoV和LSV三种病毒与GenBank中登录的亚洲和荷兰多数分离物核苷酸同源性在90%以上,地域差异不明显,外壳蛋白序列高度保守。关键词:百合;多重RT-PCR;病毒检测;黄瓜花叶病毒;百合斑驳病毒;百合无症病毒中图分类号:S68212文献标识码:A文章编号:05132353X(2007)0220443206DetectionofThreeLilyVirusesbyMultiplexRT-PCRXURong2xue1,2,MINGJun13,MUDing1,LIUChun1,TANGGeng2guo2,andWANGXiao2wu1(1InstituteofVegetablesandFlowers,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081,China;2NanjingAgriculturalUniversity,CollegeofForestResourcesandEnvironment,Nanjing210037,China)Abstract:AmultiplexRT-PCRmethodwasdevelopedtosimultaneouslydetectthreevirusesofLilybyusing3setsofspecificprimersdesignedaccordingtoCMV(Cucumbermosaicvirus),LMoV(Lilymottlevi2rus)andLSV(Lilysymptomlessvirus).AllsamplesinfectedbyCMV,LMoVandLSVcouldbeamplifiedbymultiplexPCR,andyieldingthreespecialbandsofCMV(657bp),LMoV(428bp)andLSV(171bp).SequenceidentitiesofthethreeamplifiedvirusfragmentscorrelatedwellwithotherisolatesfromAsiaandtheNetherlandsregisteredintheGenBank.Remarkablyhighhomologyinthecoatproteinsequencesofthethreeviruseshasbeenobservedrespectivelydespitetheirdifferentorigins.Keywords:Lily;MultiplexRT-PCR;Virusdetection;Cucumbermosaicvirus;Lilymottlevirus;Lilysymptomlessvirus我国栽培百合普遍受到病毒侵染,病原和田间症状均相当复杂。其中,黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)、百合斑驳病毒(Lilymottlevirus,LMoV)和百合无症病毒(Lilysymptomlessvi2rus,LSV)是目前严重危害百合的三种主要病毒(Asjes,2000;刘文洪等,2004)。CMV和LMoV单独侵染时分别表现为花叶、花瓣斑驳,LSV一般无症状。但是,它们常复合侵染后表现为幼叶向下反卷扭曲、系统花叶、坏死斑、花扭曲或畸形呈舌状、花瓣斑驳、花期缩短、植株矮化呈丛簇状,甚至无花、植株无主秆等症状,造成百合切花与鳞茎品质和产量的严重下降(Chang&Chen,1998;Bellardietal.,2002)。感病植株终生带毒,可通过蚜虫或汁液传播给下一代籽球或其他百合种群。由于百合种球生产主

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