菊花WRKY基因的克隆及功能研究

菊花(Chrysanthemum morifolium Tzvel.)是我国十大传统名花和世界四大切花之一,具有良好的观赏性状和较高的经济价值,在花卉产业中占据着重要的位置。在菊花的自然生长过程中,会遭受来自环境变化和自然灾害的多种胁迫,包括盐害、干旱、冷害、高温等非生物胁迫,以及病虫害尤其是蚜虫的取食等生物胁迫。WRKY转录因子参与植物的生长发育,调控植物应对多种非生物和生物胁迫的防御反应。目前菊花中关于WRKY基因的克隆和功能分析尚未见报道。本研究旨在从菊花中克隆得到WRKY转录因子并分析其功能,主要内容及结论如下:1.通过RT-PCR和RACE-PCR技术,从菊花中克隆得到了 9个菊花WRKY基因,通过序列分析和系统进化树分析,发现这9个基因分属于WRKY家族的三个组别,并根据与拟南芥中WRKY基因的比对结果,分别命名为CmWRKY17、CmWRKY21、CmWRKY22、CmWRKY33、CmWRKY40、CmWRKY42、CmWRKY48、CmWRKY51、CmWRKY53。通过双酶切和LR重组技术,构建了 9个基因的亚细胞定位载体和酵母单杂载体。亚细胞定位研究发现:CmWRKY17、CmWRKY21、CmWRKY22、CmWRKY33、CmWRKY40、CmWRKY48、CmWRKY51、CmWRKY53 定位在细胞核中,CmWRKY42定位在细胞膜和细胞核中。酵母单杂交试验结果表明:CmWRKY17、CmWRKY21、CmWRKY40、CmWRKY42 不具有转录激活活性,CmWRKY22、CmWRKY33、CmWRKY48、CmWRKY51、CmWRKY53 具有转录激活活性。2.通过荧光定量PCR、载体构建和遗传转化等试验研究CmWRKY17的功能。组织特异性分析发现CmWRKY17在茎、叶片中的表达水平较高,其表达受盐处理的强烈诱导;转基因菊花对盐... （共122页)

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原文链接: 菊花WRKY基因的克隆及功能研究 https://www.huajiangbk.com/newsview673269.html