国兰杂交育种技术规程
ICS 65.020.20 CCS B 62 福 35 建 省 地 方 标 准 DB35/T 2037—2021 国兰杂交育种技术规程 Technology standard for the cross-breeding of Chinese cymbidium 2021-12-29 发布 2022-03-29 实施 福建省市场监督管理局 发布 DB35/T 2037—2021 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 缩略语 ............................................................................. 1 5 亲本选择 ........................................................................... 1 6 杂交技术 ........................................................................... 2 7 F1 代无菌苗培育 ..................................................................... 2 8 子代测定 ........................................................................... 3 9 优良单株选择与扩繁 ................................................................. 3 10 档案管理 .......................................................................... 5 附录 A（资料性） 国兰主要病害防治表 ................................................... 6 附录 B（资料性） 国兰主要虫害等防治表 ................................................. 7 附录 C（资料性） 子代生物学性状类别和测定内容 ......................................... 8 附录 D（资料性） 国兰杂交育种技术档案记录表 ........................................... 9 参考文献 ............................................................................. 10 I DB35/T 2037—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福建省林业局提出并归口。 本文件起草单位：福建农林大学、福州市于山风景名胜公园管理处、福建省林业科技试验中心、 福建连城兰花股份有限公司、广东远东国兰股份有限公司、福建百秾生态科技有限公司。 本文件主要起草人：艾叶、刘江枫、兰思仁、何碧珠、彭东辉、刘仲健、李明河、王勇、汪长水、 饶春荣、陈少敏、陈南川、饶小琼、饶华芳、朱尾银、徐建球、陈桂珍、郝杨、陈进燎、徐喆、 周小琴、孙佳婷、石晓玲。 II DB35/T 2037—2021 国兰杂交育种技术规程 1 范围 本 文 件 规 定 了 国 兰 （ Chinese cymbidium ） 中 建 兰 （ Cymbidium ensifolium ） 、 墨 兰 （ C. sinense ） 、 寒 兰 （ C. kanran ） 、 春 兰 （ C. goeringii ） 、 蕙 兰 （ C. faberi ） 、 莲 瓣 兰 （ C. tortisepalum）、春剑（C. tortisepalum var. longibracteatum）共7种植物种间或品种间杂交育种 亲本选择、杂交技术、F1代无菌苗培育、子代测定及优良单株选择与扩繁、档案管理等。 本文件适用于人工控制下的国兰杂交育种。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 根状原球茎 rhizomes-like protocorm 种子经诱导萌发的具有明显节和节间，能长出幼芽和根系的横生肉质茎。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 IBA：吲哚丁酸（Indolebutyric acid） MS：MS培养基（MS culture medium） NAA：萘乙酸（1-Naphthaleneacetic acid） 6-BA：6-苄氨基嘌呤（6-Benzylaminopurine） 5 亲本选择 选择花、叶等性状优良且配合力高、遗传力强、抗性强和生长势好的优良品种作为亲本。 1 DB35/T 2037—2021 6 杂交技术 6.1 杂交母株选择 从选定的亲本群体中选择健壮无病虫害的植株作为杂交母株。 6.2 授粉环境 选择晴朗天气进行人工授粉，授粉环境为遮光度75%、温度15 ℃～28 ℃、相对湿度65%～75%。 6.3 授粉过程 先将母本花粉块除去（去雄），并剪除萼片、花瓣和唇瓣后，取父本新鲜的花粉块放置于母本柱 头蕊腔内。每个母株授粉1个花葶，每个花葶授粉1～3朵花，剪除花葶其余花朵。所用工具均用75%酒 精擦拭消毒。 6.4 标记 授粉后用铅笔写好标记牌并记录父母本信息及授粉日期，系挂在授粉母株花序梗上。 6.5 授粉后管理 授粉后2 d～3 d，蕊腔闭合、柱头膨大，期间控制浇水，避免将水滴浇灌到柱头上；约5 d～10 d 子房开始膨大，加强水肥管理。主要病虫害防治见附录A和附录B，农药的使用应符合GB/T 8321（所有 部分）的规定。 6.6 蒴果采收及保存 6.6.1 蒴果采收 人工授粉后蒴果表皮由绿色转为黄色且尚未裂开时采收。 6.6.2 蒴果保存 蒴果采摘后应随即播种。如需保存可用75%酒精擦拭蒴果表面，用牛皮纸袋包好放置4 ℃冰箱内冷 藏，冷藏时间不宜超过10 d。 F1 代无菌苗培育 7 7.1 蒴果灭菌 将蒴果放入烧杯中，加少量洗衣粉，用流水冲洗干净，纯净水冲洗2～3遍后将材料置于超净工作 台内，用75%酒精浸泡10 s～15 s，用5%次氯酸钠浸泡消毒10 min～15 min，无菌水冲洗3～5遍备用。 7.2 无菌播种 将消毒后的蒴果取出放在消毒滤纸上吸干表面水分，解剖刀纵向切开蒴果，用镊子将种子取出并 均匀撒播到灭菌的萌发培养基上，培养基配方的主要成分为：基本培养基MS、细胞分裂素（ 6-BA ） 0.4 mg/L～2.0 mg/L、生长素（NAA/IBA）0.1 mg/L～0.5 mg/L、蔗糖20 g/L～25 g/L、琼脂5.5 g/L～ 6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L～1.0 g/L，pH值为5.4～5.8。 2 DB35/T 2037—2021 7.3 萌发诱导 接种后进行暗培养25 d～30 d，再提供光照，光照强度为500 lx～1 000 lx，光照时间5 h/d～ 8 h/d，培养室温度控制在23 ℃～26 ℃。 7.4 分化培养 初代根状原球茎诱导后，将其转接到增殖培养基上进行芽分化培养，培养基配方的主要成分为： 基本培养基MS、细胞分裂素（6-BA）0.5 mg/L～2.0 mg/L、生长素（NAA）0.1 mg/L～0.5 mg/L、 有机添加物（土豆泥、香蕉泥等）100 g/L～120 g/L、蔗糖20 g/L～25 g/L、琼脂5.5 g/L～6.5 g/L、 活性炭粉0.5 g/L～1.0 g/L，pH值为5.4～5.8。培养条件：光照强度为1 000 lx～1 500 lx，光照 时间8 h/d ～10 h/d，培养温度23 ℃～27 ℃。 7.5 生根培养 将带2～3片叶片芽苗转接到生根培养基，培养基配方的主要成分为：基本培养基1/2MS、生长素 （NAA/IBA）0.3 mg/L～1.5 mg/L、有机添加物（土豆泥、香蕉泥等）100 g/L～120 g/L、蔗糖 20 g/L～25 g/L、琼脂5.5 g/L～6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L～1.0 g/L，pH值为5.4～5.8。先暗培养5 d，然后转移到1 000 lx～1 500 lx，光照时间10 h/d～12 h/d，温度23 ℃～27 ℃的条件下培养。 7.6 炼苗 生根苗的根数达到1～3条、根长1 cm～3 cm时，连同培养瓶一起从培养室转移到炼苗棚，用遮光 度为60%～70%遮阳网覆盖，闭口炼苗7 d～15 d，炼苗温度为20 ℃～30 ℃。 7.7 移栽定植 出瓶定植前3 d～5 d打开培养瓶盖，移栽时取出生根苗，用清水冲洗干净根部残留培养基，再用 多菌灵1 500～2 000倍液浸泡3 min～5 min后，置阴凉处晾干至根系发白，采用细碎松树皮：珍珠岩 =2:1体积混合作为基质移栽定植。移栽后前7 d注意遮光，空气湿度保持在70%～80%，遮光率50%，光 照强度3 000 lx ～5 000 lx，环境温度控制在白天25 ℃～28 ℃，晚上23 ℃～26 ℃。 7.8 田间管理 从小苗到植株开花过程的田间管理参照LY/T 1735—2008的第7章施行。主要病虫害防治见附录A和 附录B，农药的使用应符合GB/T 8321（所有部分）的规定。 8 子代测定 对子代生物学性状进行测定，性状类别和测定内容见附录C。 9 9.1 优良单株选择与扩繁 优良单株选择 选择长势旺盛、根系健壮、叶姿优美、花葶高度适中、花朵排列整齐、花型圆整、花朵数多，花 瓣质地较厚、观赏期长等性状优良的单株作为扩繁母株。 3 DB35/T 2037—2021 9.2 优良单株扩繁 9.2.1 外植体选取 选取生长健壮、无病虫害的扩繁母株的侧芽作为外植体。 9.2.2 外植体消毒 将外植体放在烧杯中，加少量洗衣粉，用流水冲洗干净，纯净水冲洗2～3遍后将材料置于超净工 作台内用75%酒精浸泡10 s～20 s，用10%次氯酸钠浸泡消毒10 min～15 min，无菌水冲洗3～4遍备用。 9.2.3 诱导培养 在超净工作台上将消毒处理后的外植体置于培养皿上，剥出茎尖接种到诱导培养基上，培养基配 方的主要成分为：基本培养基MS、细胞分裂素（6-BA）0.5 mg/L～2.0 mg/L、生长素（NAA） 0.2 mg/L～1.0 mg/L、有机添加物（蛋白胨2.0 g/L～3.0 g/L、香蕉泥40 g/L～50 g/L等）、蔗糖 20 g/L～30 g/L 、琼脂5.0 g/L～6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L～2.0 g/L，pH值为5.4～5.8，每瓶接 1芽。先暗培养8 d～10 d后转至光培养，光照强度1 000 lx ～1 500 lx，光照时间10 h/d，培养 温度23 ℃～27 ℃。 9.2.4 增殖培养 将诱导出的根状原球茎切割成1.5 cm～2.0 cm的茎段接入增殖培养基中，培养基配方的主要成分 为：基本培养基1/2MS、细胞分裂素（6-BA）0.1 mg/L～2.0 mg/L、生长素（NAA）0.1 mg/L～2.0 mg/L、 有机添加物（蛋白胨2.0 g/L～2.5 g/L、椰汁50 mL/L～100 mL/L等）、蔗糖20 g/L～25 g/L、 琼脂5.0 g/L～6.5 g/L、活性炭粉0.5 g/L～1.0 g/L，pH值为5.4～5.8。在光照强度1 000 Lx～ 1 500 Lx、光照时间12 h/d、温度23 ℃～27 ℃的条件下培养。 9.2.5 分化培养 参照7.4执行。 9.2.6 生根培养 参照7.5执行。 9.2.7 炼苗 参照7.6执行。 9.2.8 移栽定植 参照7.7执行。 9.2.9 田间管理 参照7.8执行。 4 DB35/T 2037—2021 10 档案管理 建立技术档案，记录杂交亲本、杂交日期、子代的生物学特性、选出的优良单株、配制培养基时 间、配方、接种继代代数、种植地点、种植时间、浇水次数、施肥情况、用药情况以及天气变化情况， 记录内容见附录D。 5 DB35/T 2037—2021 A A 附 录 A （资料性） 国兰主要病害防治表 表A.1给出了国兰主要病害的危害症状和防治方法。 表A.1 国兰主要病害防治表 病害名称 炭疽病 线虫病 白绢病 枯萎病 叶枯病 软腐病 6 发生时间 危害症状 防治方法 为害叶片，多发生在叶尖或叶缘，初期表 注意通风透光；及时剪除叶部病斑；发病初期 5 月 上 旬 至 面产生浅褐色凹陷小点，周围组织浅黄色， 可用 50%甲基托布津或 50%多菌灵 800～1 000 倍 11 月下旬 后期病斑扩大为不规则或椭圆形，中间灰褐 液喷洒，连续 2～3 次，每次间隔 7 d～10 d 色，边缘颜色变深褐色 线虫寄生于根部，引起根系腐烂，地上叶 栽培前栽培基质应消毒，可用 100 ℃蒸汽灭菌 多在 3 月下 片生长不良，叶色褪绿、发黄，甚至造成植 消毒，或者棉隆混合基质消毒，杀死虫卵；生长 旬至 4 月上 株萎焉。线虫危害造成大量伤口，还会引起 期危害严重的需要立即换盆，将病株泡入 40%克 旬，5 月进 其他土传病菌的侵染，导致植株发病，加速 线磷乳剂 1 000 倍液中 20 min～30 min，捞出晾 入发病盛期 植株枯死 干，用新基质重新栽种 改善基质排水透气条件，注意通风透光；感病 病害从叶片基部开始，最初呈水渍状，逐 后植株，应及时切除感病部位，并将兰根和假鳞 高 温 多 雨 季 渐变褐腐烂，并产生白绢丝状菌丝体，不断 茎泡入 20%甲基立枯磷 600～800 倍或 25%速克灵 节 向上或在根际基质表面蔓延，最后使植株枯 800 倍液中 30 min～40 min，反复浸泡 2～3 次 死 后，用新基质重新栽种 改善基质排水透气条件，注意通风透光；感病 植株发病后叶变黄而萎蔫，假鳞茎皱缩， 后植株，应及时切除感病部位，并将兰根和假鳞 4 月上旬至 根系腐烂。病情严重时，假鳞茎深度腐烂， 茎泡入 20%甲基立枯磷 600～800 倍或 30%恶霉灵 10 月下旬 后期发臭 1 000 倍液中 30 min～40 min，反复浸泡 2～3 次 后，用新基质重新栽种 叶尖受害初期表现为淡褐色斑点形，中期 浅褐色 ，后期 深褐色 ，病斑融合后叶尖枯 及时剪除病叶，喷施 80%代森锰锌 800 倍或 25% 6 月上旬至 死；叶片中部受害，病斑呈圆形或椭圆形， 施保克乳油 1 500 倍液，连续 2～3 次，每次间 12 月下旬 中央黑褐色，边缘有黄绿色晕圈；严重时， 隔 7 d～10 d 整片叶枯死 通 常在 当年 新发 的幼 苗上发病，感病后 注意喷水后及时加强通风；感病后植株，应及 高 温 多 雨 季 叶基部产生水渍状黑褐色坏死斑块，后迅 时切除感病部位，并将兰根和假鳞茎用农用链霉 节 速扩大，并出现腐烂，整株苗易被拔起， 素 1 000 倍液浸泡 1 h～2 h 后，用新基质重新栽 且有恶臭味 种 DB35/T 2037—2021 B B 附 录 B （资料性） 国兰主要虫害等防治表 表B.1给出了国兰主要虫害的危害症状和防治方法。 表B.1 国兰主要虫害等防治表 虫害名称 危害症状 防治方法 在高温多湿、空气流动不畅的情况下，繁 在少量发生时，可用软刷刷除，再用水冲干净。若蚧壳虫较 殖快。主要生于叶上，不仅吮吸液汁，造成 多，可在幼龄孵化盛期喷洒 40%速扑杀乳油 1 000 倍液或 50%马 蚧壳虫 叶子发黄，且会影响光合作用并引起病害， 拉硫磷乳油 1 000～1 500 倍液，连续 3 次以上，每次间隔 5 d～ 严重的则造成叶枯 7 d 喷洒 2.5%溴氰菊酯乳油或 20%速灭杀丁 2 000 倍液等，连续 成虫及若虫生于叶上，不仅吮吸液汁，使 粉虱 用药 2 次至 3 次，每次间隔 5 d～7 d；成虫可使用黄色粘板诱 叶片形成黄斑，并能分泌蜜露，诱发煤烟病 杀 常出现在潮湿而阴暗的地方，夜间出来活 在栽培架周围撒生石灰、饱和食盐水或 10%四聚乙醛颗粒 蜗牛及蛞 动，啃 食幼叶 、幼根 和花等 部位。 因食量 剂，并注意场地的卫生清洁，及时清除枯枝败叶；也可采用人 蝓 大，危害较严重 工捕捉和诱杀法 成虫、若虫危害花蕾和花朵，有时也危害 使用 45%马拉硫磷乳油或 2.2%阿维·吡虫啉乳油 1 000 倍液 蓟马 幼嫩叶片，造成花蕾和花朵变褐、枯死 进行喷洒 成 螨 、 若 螨 吸 食 叶 片 汁 液 ， 造 成叶片失 化学防治一般在虫卵孵化后进行，使用 22%阿维·螺螨酯 螨类 绿，叶背密布黄白色小点及细丝状物，严重 1 500～2 000 倍或 75%克螨特乳油 1 000～1 500 倍液进行喷 时叶片枯死 洒，连续用药 2 次至 3 次，每次间隔 5 d～7 d 采取“挑治苗蚜、主治穗蚜”的策略。当田间百株蚜量达 常成群危害嫩叶、花蕾等，以若虫、成虫 500 头、益害比≥1∶500 时，每亩用 25%蚜螨清乳油 50 mL，或 蚜虫 刺吸汁液且会传播病毒 吡虫啉系列产品 1 500～2 000 倍液喷雾 7 DB35/T 2037—2021 C D C D 附 录 C （资料性） 子代生物学性状类别和测定内容 表C.1给出了子代生物学性状类别和测定内容。 表 C.1 子代生物学性状类别和测定内容 性状类别 植株 假鳞茎 叶 开花性状 花葶 花 适应性 繁殖力 8 株高 株型 — — — 形状 长 直径 — — 叶色 叶形 叶姿 叶质地 叶片数 开花时间 开花整齐度 — — — 花葶数 花葶高 花葶粗 花朵数 — 花色 花径 瓣型 花香 萼片长 抗病性 抗虫性 生长势 — — 新芽数 — — — — 测定内容 — — — — 叶片长 叶片宽 — — — — 萼片宽 花瓣长 — — — — — — 叶片厚 — — 花瓣宽 — — — — — — — — — — — — — — — — — 唇瓣长 中裂片长 中裂片宽 — — — — — — DB35/T 2037—2021 E E 附 录 D （资料性） 国兰杂交育种技术档案记录表 表D.1给出了国兰杂交育种技术档案记录的样式。 表 D.1 国兰杂交育种技术档案记录表 杂交父本 父本照片 杂交母本 母本照片 杂交日期 负责人 杂交花朵数 座果数 F1代无菌苗培养 培养配方 种子父母本 培养时间 接种瓶数 培养环境 子代性状测定和优良单株筛选 优良单株性状描述 优良单株代码 萌芽瓶数 负责人 照片 优良单株扩繁 诱导培养 增殖培养 分化培养 生根培养 栽植地点 种植数量 生长状况 培养配方 优良单株代码 培养时间 培养配方 优良单株代码 培养时间 培养配方 优良单株代码 培养时间 培养配方 优良单株代码 培养时间 接种瓶数 培养环境 诱导情况 负责人 接种瓶数 培养环境 增殖情况 负责人 接种瓶数 培养环境 分化情况 负责人 接种瓶数 培养环境 田间管理 生根情况 负责人 栽植时间 施肥情况 栽培基质 负责人 记录时间 9 DB35/T 2037—2021 参 考 文 献 [1] LY/T 1735—2008 建兰生产技术规范与质量等级 10
