蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法与流程

1.本发明涉及蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁技术领域，具体涉及了一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法。

背景技术：

2.大花卡特兰是卡特兰属中的一种原生兰“王者”，属于单叶类卡特兰。种名maxima意思是“最大的”，因此又名“巨大卡特兰”，于1831年由john lindl ey记载登录。在基于当时认知，兰花这样大的花朵和艳丽的色彩是世界之最，就以“最大，最高，最高贵”一词来做它的种加词。蓝色卡特兰“马克西玛”(cattleya maxima fma.coerulea'hector')的有名个体“赫克托”是卡特兰原生种，并且是卡特兰里的珍贵种里有特有价值的个体。
3.目前，蓝色卡特兰“马克西玛”“赫克托”在淘宝上售价为为638元，而蓝色卡特兰“马克西玛”售价为350元，蓝色卡特兰“马克西玛”“赫克托
”ד
丹尼尔”售价为240元。市场上常见蝴蝶兰的价格多为50元左右。蓝色卡特兰“马克西玛”“赫克托”的价格不仅远高于市面上常见蝴蝶兰的价格，也高于蓝色卡特兰“马克西玛”或是其杂交种的价格，是一种很有商业价值的卡特兰。
4.卡特兰种子与其他兰花种子一样，不含胚乳和其他组织，在自然条件下，需要共生真菌提供养分萌发，因此自然播种萌发率极低；而分株繁殖，每株每年产生2-4株幼苗，繁殖系数低，不能满足市场需要。采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前卡特兰大规模生产的唯一途径。相关研究都集中在卡特兰杂交种中或是笼统以卡特兰或卡特丽亚兰称呼，没有明确的原生种组织培养研究的报导，因此，探索蓝色大花卡特兰赫克托组织培养的最佳条件是目前科研人员面临的一个重要课题。

技术实现要素：

5.本发明针对上述现有技术的不足而提供一种便于实现、繁殖率和成活率较高的蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法。
6.本发明为解决上述问题所采用的技术方案为：
7.本发明提供的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，包括以下步骤：
8.s1：材料的无菌处理
9.使用酒精对种子进行消毒处理，接着使用升汞对种子进行消毒处理，
10.消毒完成后，用无菌水进行冲洗，并通过滤纸将水分吸干备用，然后将处理好的种子移到超净工作台中进行接种，用解剖刀切开荚果，把种子散布到无菌蒸馏水中，用磁力搅拌器混合均匀，每瓶培养基中均匀散布种子混合液，
11.将种子接种到种子萌发培养基a，将接种后的培养基置于培养室培养，观察并记录种子萌发情况。
12.s2：原球茎诱导增殖
13.将原球茎接种到培养基b中培养，每瓶培养基原球茎，每种培养基3个重复，观察记录原球茎增殖及分化情况，数据取三次重复的平均值。
14.s3：原球茎分化
15.将原球茎接种到培养基c中，每瓶接20个原球茎，每个处理3个重复，观察植株状况并记录数据。
16.s4：壮苗及生根培养
17.将分化出茎叶的苗接种到培养基d中培养，每瓶培养基接种20株苗，每个处理3个重复，培养60天后，观察并记录植株生根状况及生长状况，所述培养基d中添加有有机添加剂。
18.s5：移栽
19.炼苗最佳环境出瓶前2周将组培试管苗置于苗床上进行过渡锻炼，出瓶前1周，将瓶口盖子逐步打开，即首先松盖1-2d，然后部分开盖1-2d，最后完全揭去盖，让瓶苗逐步适应外界的光照和湿度，组培苗根经过炼苗后进行移栽，洗净苗根部的培养基，定植于水苔为基质的穴盘中，适时喷水。
20.进一步地，步骤s1中所述种子萌发培养基a包括1/2ms+香蕉泥100g/l、1/2ms+ac 1g/l、1/2ms中的一种或几种的组合。
21.进一步地，步骤s2中培养基b中培养包括1/2ms+6-ba0.5 mg/l+na a0.2 mg/l、1/2ms+6-ba1.0 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.0 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba0.5 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.5 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba2.0 mg/l+naa0.2 mg/l中的一种或几种的组合。
22.进一步地，步骤s3中培养基c中培养包括1/2ms、
23.1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba0.3 mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba 0.2mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l中的一种或几种的组合。
24.进一步地，步骤s4中培养基d中培养包括1/2ms+naa0.2 mg/l+椰子汁100ml/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+椰肉100g/l、1/2ms+naa0.2 mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+ac 0.1g/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+香蕉泥100g/l中的一种或几种的组合。
25.进一步地，步骤s4中所述有机添加剂包括椰汁、椰肉和香蕉泥，所述椰汁的制备方法为：
26.选取椰子，将椰汁倒出后用3层纱布过滤，得到纯净椰汁；
27.所述椰肉的制备方法如下：
28.将椰肉切碎后倒进搅拌机内进行搅拌即可，
29.所述香蕉泥的制备方法如下：
30.选取橡胶，将香蕉去皮后倒进搅拌机内搅拌成泥状，得到所需香蕉泥有机添加剂。
31.进一步地，步骤s1-s5的光照为70％的自然光，环境通风透气，每30株为一个重复，共计3个重复，1个月后观察记录生长情况。
32.更进一步地，步骤s1-s5中培养温度(25
±
2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12h
·
d-1。
33.本发明的有益效果在于：
34.本发明所提供的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法具有
便于实现、繁殖率和成活率较高的优点，本技术分化后的植株经过90天的组织培养可进行移栽，用水苔作为栽培基质，在惠州可在露天通风透气大棚的培养，光照强度为自然光的70％，成活率可达85.6％。运用科学技术组织培养卡特兰，提高了兰花的自然繁殖率，使得更多的人可以在家里欣赏到自己喜爱的兰花。蓝色卡特兰“马克西玛”的有名个体“赫克托”是卡特兰原生种，并且是卡特兰里的珍贵种里有特有价值的个体，通过组织培养，可以获得大量组培苗，以满足该品种卡特兰的市场需求，对物种的保护和开发有积极的意义。具有极大的经济价值和社会价值。
附图说明
35.图1是本发明实施例1中授粉后180d的蒴果实物图；
36.图2是本发明实施例2中愈伤组织生成实物图；
37.图3是本发明实施例3中愈伤组织分化实物图；
38.图4是本发明实施例4中壮苗生根实物图；
39.图5是本发明实施例4中另一壮苗生根实物图；
40.图6是本发明实施例5中移栽苗实物图；
41.图7是本发明实施例5中另一移栽苗实物图；
42.图8是本发明实验流程图。
具体实施方式
43.下面结合附图具体阐明本发明的实施方式，附图仅供参考和说明使用，不构成对本发明专利保护范围的限制。
44.本实施例所提供的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，包括以下步骤：
45.s1：材料的无菌处理
46.使用75％的酒精对种子进行3分钟的消毒处理，接着使用0.1％的升汞对种子进行20分钟的消毒处理，
47.消毒完成后，用无菌水进行冲洗，并通过滤纸将水分吸干备用，然后将处理好的种子移到超净工作台中进行接种，用解剖刀切开荚果，把种子散布到100ml无菌蒸馏水中，用磁力搅拌器混合均匀，每瓶培养基中均匀散布1ml种子混合液，约含种子1000粒，
48.将种子接种到种子萌发培养基a(1)-(3)上，每瓶培养基集中1000粒种子，将接种后的培养基置于培养室培养，观察并记录种子萌发情况。每个处理3个重复，数据取三次重复的平均值。
49.s2：原球茎诱导增殖
50.将原球茎接种到培养基b(4)-(9)中培养，每瓶培养基接种20个原球茎，每种培养基3个重复，观察记录原球茎增殖及分化情况，数据取三次重复的平均值。
51.s3：原球茎分化
52.将原球茎接种到培养基c(10)-(13)中，每瓶接20个原球茎，每个处理3个重复，观察植株状况并记录数据。
53.s4：壮苗及生根培养
54.将分化出茎叶的苗接种到培养基d(14)-(18)中培养，每瓶培养基接种20株苗，每个处理3个重复，培养60天后，观察并记录植株生根状况及生长状况，所述培养基d中添加有有机添加剂。
55.s5：移栽
56.炼苗最佳环境出瓶前2周将组培试管苗置于苗床上进行过渡锻炼，出瓶前1周，将瓶口盖子逐步打开，即首先松盖1-2d，然后部分开盖1-2d，最后完全揭去盖，让瓶苗逐步适应外界的光照和湿度，组培苗根经过炼苗后进行移栽，洗净苗根部的培养基，定植于水苔为基质的穴盘中，适时喷水。
57.本实施例中，步骤s1中所述种子萌发培养基a包括1/2ms+香蕉泥100g/l、1/2ms+ac 1g/l、1/2ms三种。
58.本实施例中，步骤s2中培养基b中培养包括1/2ms+6-ba0.5 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba1.0 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.0 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba0.5 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.5 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba2.0 mg/l+naa0.2 mg/l六种。
59.本实施例中，步骤s3中培养基c中培养包括1/2ms、
60.1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba0.3 mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba 0.2mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l四种。
61.本实施例中，步骤s4中培养基d中培养包括1/2ms+naa0.2 mg/l+椰子汁100ml/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+椰肉100g/l、1/2ms+naa0.2 mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+ac 0.1g/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+香蕉泥100g/l四种。
62.本实施例中，步骤s4中所述有机添加剂包括椰汁、椰肉和香蕉泥，所述椰汁的制备方法为：
63.选取椰子，将椰汁倒出后用3层纱布过滤，得到纯净椰汁；
64.所述椰肉的制备方法如下：
65.将椰肉切碎后倒进搅拌机内进行搅拌即可，
66.所述香蕉泥的制备方法如下：
67.选取橡胶，将香蕉去皮后倒进搅拌机内搅拌成泥状，得到所需香蕉泥有机添加剂。
68.本实施例中，步骤s1-s5的光照为70％的自然光，环境通风透气，每30株为一个重复，共计3个重复，1个月后观察记录生长情况。
69.本实施例中，，步骤s1-s5中培养温度(25
±
2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12h
·
d-1。
70.下面结合具体实施例进行进一步的分析和阐释：
71.实施例1
72.如图1所示，本实施例对不同成熟期种子的萌发情况进行实验
73.授粉后120d的种子，在剥除种荚时，种子与种荚粘连,种子成团状置于培养集中，种子不能萌发。授粉210d后的种子不萌发。
74.授粉后180d的种子在播种45d后可以看到原球茎生成，播种65天后，统计种子萌发率。种子在3种培养基中均能萌发，在1/2ms培养基中萌发率最高，达91％，其次为在1/2ms+ac 1g/l培养基，萌发率为83％。在1/2ms+香蕉泥100g/l培养基中，萌发率最低为74％。授粉
后150d的种子在播种30d后生成绿色原球茎。
75.表1卡特兰不同成熟期种子的萌发情况
[0076][0077]
实施例2
[0078]
如图2所示，不同激素浓度下卡特兰增殖的状况的实验
[0079]
将种子萌发生成的原球茎到培养基(4)-(9)中培养,均能诱导原球茎分化。培养40天后，繁殖体产生大量绿色愈伤组织。20天后，在愈伤组织周边出现原球茎的分化。
[0080]
70天后统计原球茎诱导和增殖情况。培养基(5)的原球茎诱导率最高为80.3％，但是培养基(6)的原球茎诱导率80.0％，略低与培养基(5)，但是增殖倍数最高为4.6倍，高于培养基(5)的3.9倍。培养基(7)原球茎增殖倍数为4.0倍，高于培养基(5)，但是诱导率63.3％，远低于培养基(5)和(6)。培养基(4)诱导率65.0％，略高于培养基(7)，但是增值倍数最低为2.8倍。
[0081]
表2不同激素浓度下卡特兰增殖的状况
[0082][0083]
实施例3
[0084]
如图3所示，不同激素对原球茎分化的状况的实验
[0085]
原球茎接种到培养基(10)-(13)后，培养30天后，发现均能分化出茎、叶和根，但是分化率和生长状况有较大差异。
[0086]
在培养基(10)中，根系最长，但是叶片瘦小，叶色暗绿。培养基(11)中，植株发育最好，叶色呈正常绿色，根系较少。在培养基(12)和(13)中，叶片较窄，根系少。在培养基(13)中，叶片最窄，根系较多。
[0087]
表3不同激素对原球茎分化的状况
[0088]
[0089]
实施例4
[0090]
如图4-5所示，不同有机添加物下卡特兰壮苗生根状况的实验
[0091]
根据表4的数据，可以得知在5个含有不同有机添加物的培养基中，株高和根系发育状况有明显差异。添加有机添加物的培养基的生根率较高。
[0092]
在(18)培养基中，植株生根率最高达88.3％，根系发达，生根数量最多达6.2条/株，株高达1.83cm，根长且粗壮。在(16)培养基中，植株生根率、生根数量最低，根系不发达且细长，株高达最矮，为1.02cm，明显低于其他培养基。(15)培养基中，根系较发达，株高1.82cm略低于(18)培养基。(14)培养基植株生根率、生根数量，根系发育，株高明显低于(15)培养基。(17)培养基中，株高仅略高于(16)培养基。
[0093]
表4不同有机添加物下卡特兰壮苗生根状况
[0094][0095]
实施例5
[0096]
如图6-7所示，卡特兰移栽状况
[0097]
移栽的组培苗在水苔基质中生长良好，叶片呈正常绿色，根系发达，成活率达85.6％。
[0098]
如图8所示，本发明所提供的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法具有便于实现、繁殖率和成活率较高的优点，本技术分化后的植株经过90天的组织培养可进行移栽，用水苔作为栽培基质，在惠州可在露天通风透气大棚的培养，光照强度为自然光的70％，成活率可达85.6％。运用科学技术组织培养卡特兰，提高了兰花的自然繁殖率，使得更多的人可以在家里欣赏到自己喜爱的兰花。蓝色卡特兰“马克西玛”的有名个体“赫克托”是卡特兰原生种，并且是卡特兰里的珍贵种里有特有价值的个体，通过组织培养，可以获得大量组培苗，以满足该品种卡特兰的市场需求，对物种的保护和开发有积极的意义。具有极大的经济价值和社会价值。
[0099]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：材料的无菌处理使用酒精对种子进行消毒处理，接着使用升汞对种子进行消毒处理，消毒完成后，用无菌水进行冲洗，并通过滤纸将水分吸干备用，然后将处理好的种子移到超净工作台中进行接种，用解剖刀切开荚果，把种子散布到无菌蒸馏水中，用磁力搅拌器混合均匀，每瓶培养基中均匀散布种子混合液，将种子接种到种子萌发培养基a，将接种后的培养基置于培养室培养，观察并记录种子萌发情况。s2：原球茎诱导增殖将原球茎接种到培养基b中培养，每瓶培养基原球茎，每种培养基3个重复，观察记录原球茎增殖及分化情况，数据取三次重复的平均值。s3：原球茎分化将原球茎接种到培养基c中，每瓶接20个原球茎，每个处理3个重复，观察植株状况并记录数据。s4：壮苗及生根培养将分化出茎叶的苗接种到培养基d中培养，每瓶培养基接种20株苗，每个处理3个重复，培养60天后，观察并记录植株生根状况及生长状况，所述培养基d中添加有有机添加剂。s5：移栽炼苗最佳环境出瓶前2周将组培试管苗置于苗床上进行过渡锻炼，出瓶前1周，将瓶口盖子逐步打开，即首先松盖1-2d，然后部分开盖1-2d，最后完全揭去盖，让瓶苗逐步适应外界的光照和湿度，组培苗根经过炼苗后进行移栽，洗净苗根部的培养基，定植于水苔为基质的穴盘中，适时喷水。2.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s1中所述种子萌发培养基a包括1/2ms+香蕉泥100g/l、1/2ms+ac 1g/l、1/2ms中的一种或几种的组合。3.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s2中培养基b中培养包括1/2ms+6-ba0.5 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba1.0 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.0mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba0.5 mg/l+naa0.5 mg/l、1/2ms+6-ba1.5 mg/l+naa0.2 mg/l、1/2ms+6-ba2.0 mg/l+naa0.2 mg/l中的一种或几种的组合。4.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s3中培养基c中培养包括1/2ms、1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba0.3 mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+6-ba 0.2mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l中的一种或几种的组合。5.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s4中培养基d中培养包括1/2ms+naa0.2 mg/l+椰子汁100ml/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+椰肉100g/l、1/2ms+naa0.2mg/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+ac 0.1g/l、1/2ms+naa0.2 mg/l+香蕉泥100g/l中的一种或几种的组合。
6.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于，步骤s4中所述有机添加剂包括椰汁、椰肉和香蕉泥，所述椰汁的制备方法为：选取椰子，将椰汁倒出后用3层纱布过滤，得到纯净椰汁；所述椰肉的制备方法如下：将椰肉切碎后倒进搅拌机内进行搅拌即可，所述香蕉泥的制备方法如下：选取橡胶，将香蕉去皮后倒进搅拌机内搅拌成泥状，得到所需香蕉泥有机添加剂。7.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s1-s5的光照为70％的自然光，环境通风透气，每30株为一个重复，共计3个重复，1个月后观察记录生长情况。8.如权利要求1所述的一种蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，其特征在于：步骤s1-s5中培养温度(25
±
2)℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12h
·
d-1。

技术总结
本发明提供蓝色大花卡特兰赫克托无菌播种及小苗组培快繁方法，包括以下步骤：S1：材料的无菌处理，S2：原球茎诱导增殖，S3：原球茎分化，S4：壮苗及生根培养，S5：移栽，本申请具有便于实现、繁殖率和成活率较高的优点，本申请分化后的植株经过90天的组织培养可进行移栽，用水苔作为栽培基质，在惠州可在露天通风透气大棚的培养，光照强度为自然光的70％，成活率可达85.6％，可以获得大量组培苗，以满足该品种卡特兰的市场需求，对物种的保护和开发有积极的意义。具有极大的经济价值和社会价值。具有极大的经济价值和社会价值。具有极大的经济价值和社会价值。

技术研发人员：郑洲翔 刘德浩 陈兆贵 吴新泉
受保护的技术使用者：泉州市洛江绿盛农业综合开发有限公司
技术研发日：2023.06.14
技术公布日：2023/10/15

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