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菜豆几丁质酶基因的克隆,序列分析及其表达.PDF文档全文免费阅读、在线看

来源：花匠小妙招时间：2024-11-20 12:21

第２６卷　第２期大豆科学Ｖｏｌ．２６　Ｎｏ．２２００７年　　４月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＡｐｒ．　　２００７菜豆几丁质酶基因的克隆、序列分析及其表达１，２２２曲　敏，王全伟，李新玲（１．哈尔滨商业大学食品工程学院生物系，哈尔滨１５００７６；２．哈尔滨师范大学生命与环境科学学院，哈尔滨１５００８０）摘要　根据ＧｅｎＢａｎｋ中收录的菜豆几丁质酶基因ｍＲＮＡ序列设计一对引物，以菜豆品种五常油豆总ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增获得一个约１．１ｋｂ的ＤＮＡ片段Ｂｃｈｉ，将其克隆入ｐＵＣ１８载体。测序和序列分析结果表明，该序列全长１０８８ｂｐ，含有一个９８１ｂｐ的完整开放读码框，无内含子，编码３２７个氨基酸，编码产物在结构上具有ＣｌａｓｓＩａ几丁质酶的结构特征：Ｎ－端具有一个２６个氨基酸的信号肽，其后是富含８个半胱氨酸、长４１个氨基酸的几丁质结合区和由２４９个氨基酸组成的高度保守的催化区，Ｃ－端为由１１个氨基酸组成的液泡定位多肽。序列与结构上的同源性分析表明Ｂｃｈｉ基因是菜豆ＣｌａｓｓＩａ几丁质酶基因。此序列已在ＧｅｎＢａｎｋ中注册，登录号为ＡＹ３５７３００。以ｐＱＥ－３０为原核表达载体，构建成ｐＱＥ－Ｂｃｈｉ重组表达载体，转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５，经ＩＰＴＧ诱导后表达出一个约３５ｋＤ的蛋白，与推测的Ｂｃｈｉ基因编码产物的大小一致，表明Ｂｃｈｉ基因在大肠杆菌中能够表达，是一个具有表达功能的基因。关键词　菜豆；几丁质酶基因；克隆；序列分析；表达　中图分类号　Ｓ５６５．１　文献标识码　Ａ　文章编号　１０００－９８４１（２００７）０２－０１２１－０６ＣＬＯＮＩＮＧ，ＳＥＱＵＥＮＣＩＮＧＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＣＨＩＴＩＮＡＳＥＧＥＮＥＦＲＯＭＫＩＤＮＥＹＢＥＡＮ１，２２２ＱＵＭｉｎ，ＷＡＮＧＱｕａｎｗｅｉ，ＬＩＸｉｎｌｉｎｇ（１．ＢｉｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅ，ＨａｅｒｂｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｏｍｍｅｒｃｅ，Ｈａｅｒｂｉｎ，１５００７６；２．ＬｉｆｅＳｃｉ ｅｎｃｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＨａｒｂｉｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００８０）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｄｅｓｉｇｎｅｄｐａｉｒｏｆｐｒｉｍｅｒｓ，ｗｈｉｃｈｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｃｈｉｔｉｎａｓｅｇｅｎｅｏｆｂｅａｎｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ，ｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｉｓｇｅｎｅｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆＷｕｃｈａｎｇｂｅａｎｂｙＰＣＲ．ＷｅｇｏｔａＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｏｆａｂｏｕｔ１．１ｋｂ，ｗｈｉｃｈｗａｓｎａｍｅｄＢｃｈｉ，ｔｈｅｎｗｅｃｌｏｎｅｄｔｈｉｓＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｉｎｐＵＣ１８ｖｅｃｔｏｒ．Ｂｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｉｓｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓ１０８８ｂｐａｎｄｈａｄａＯＲＦｏｆ９８１ｂｐ，ｗｈｉｃｈｈａｄｎｏｉｎｔｒｏｎｓ．Ｔｈｉｓｓｅｑｕｅｎｃｅｅｎｃｏｄｅｄ３２７ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｗｈｏｓｅｐｒｏｄｕｃｔｈａｄｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｔｒａｉｔｏｆＣｌａｓｓＩａｃｈｉｔｉ ｎａｓｅ：Ｔｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｏｆ２６ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｏｎｔｈｅＮｅｎｄｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｃｈｉｔｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｏｆ４１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓａｎｄｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｃａｔａｌｙｔｉｃｒｅｇｉｏｎｏｆ２４９ａｍｉｎｏａｃｉｄ；ｏｎｔｈｅＣｅｎｄ，ｔｈｅｒｅｗａｓＶＴＰｏｆ１１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＴｈｅｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｉｓＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｔｈｅｇｅｎｅｏｆＣｌａｓｓＩａｃｈｉｔｉｎａｓｅｏｆｂｅａｎ，ｗｈｉｃｈｗａｓｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ，ｔｈｅａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂ