课件:兰花组织培养.ppt 免费在线阅读
各时期的培养条件 茎段的诱导时间在5~11天之间 培养温度23~25℃,光照强度2000lx,光照时间10h/d THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 壮苗培养 生根培养 炼苗(移栽驯化) 组培中可能出现的问题 污染 变异 玻璃化 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 褐化 黄化 蝴蝶兰组织培养 蝴蝶兰花梗生长点组织培养 使用花梗生长点来诱发出新芽体,待新芽体诱发出后,将其切下,移植至含有激素等药物的培养基瓶中,由于移植后的芽体受到药物的刺激,造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来,也会有从被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来,当这些芽体数量多到需要移植时,就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作,由于这些芽体都是相连的,移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植, 所以,也有人将其称为切片苗。 一般来说,以花梗生长点来进行组织培养,分生数量约在20棵以上,称之为花梗苗,若是以花梗生长点来进行组织培养,分生数量在20棵以上,就称为分生苗。而花梗苗与分生苗这两者它们都是属于无性繁殖。在理论上,遗传的特性与原植株的特性是一样的,但是却因为培养基的比例调配或是药物的刺激,常常会发生整批分生的植株 在形态上与原植株不同的情况。 花梗生长点组织培养具体操作: 1)将蝴蝶兰的花梗由植株上剪下,如果已开花的部份可以剪下?弃,留下未开花的节,再将花梗裁剪适当长度,再将包覆在梗节生长点外的苞片,小心的剥除,勿伤及生长点,置入超音波震荡器中,以稀释的漂白水溶液消毒。如无震荡器时,可置入装有稀释过的漂白水溶液的试管中,手动的大力摇晃试管,也可达到消毒的目的。 2)将震荡器或是试管中的花梗取出,置入无菌水中,摇晃瓶身,可重覆此一动作2~3次,但需取出花梗,置入?有无菌水的新瓶中,藉此洗净漂白水,洗净后,以镊子取出花梗,以酒精浓度75%的酒精棉花擦拭花梗,以梗芽生长点向下,酒精棉花擦拭由上而下单一方向擦拭,切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。 (3)将花梗两端切除?芽尖端切90度另一端则呈45度斜切 将切面为45度端插入培养基中 塞子消毒后塞住瓶口 瓶口处再以酒精灯消毒,覆盖上铝箔纸避免感染 成功长出新株体 消毒不彻底瓶内发霉 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛,为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上,喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境,不耐寒。一般均能耐-5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种,铁皮石斛为石斛之极品,它因表皮呈铁绿色而得名。 铁皮石斛的组织培养技术路线 外植体 丛生芽 培养基 生根发育 完整植株 蔗糖:30g 琼脂:6.8g 初代培养基的设计 诱导培养基 MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】 MS母液: I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液:BA10ml,NAA5ml 蔗糖:30g 琼脂:6.8g 土豆汁150ml 继代培养基的设计 增殖培养基 MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】 取MS母液: IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液:BA5ml,NAA2ml NAA BA IAA 增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基,添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。 土豆汁 香蕉汁 IBA 蔗糖:30g 琼脂:6.8g 香蕉汁:200ml 活性炭:20g 生根培养基的设计 生根培养基 1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】 取MS母液: IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液:NAA2~5ml Your Text here 生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养,约1~2周后即生根,以长成完整植株。 优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段 外植体的选择 接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 苗的高度为1~2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。 生长发育健壮苗优先 1 2 3 外植体的处理 Text 1 Text 2 Text 3 摘去叶片和膜质叶鞘,剪成约2cm长带节的小段。 用洗洁剂清洗后置流水下冲20~30 min。 在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5min后,用无菌水冲洗5~6次,放入垫有干无菌滤纸的培养皿中,以吸去多余水分,茎段两端各切0.2~
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