秀丽隐杆线虫的冷冻保存方法建立

秀丽隐杆线虫的冷冻保存方法建立

【摘要】： 秀丽隐杆线虫在实验室经常作为模式生物使用,因此,为了可以长期使用秀丽隐杆线虫,实验室需要不断地进行传代培养,十分麻烦,而且不经济。最近一些国家已经开始使用秀丽隐杆线虫来研究程序性细胞死亡的机理,用于开发治疗恶性肿瘤等疾病的新方法,还将可能在研究治疗癌症和艾滋病的方式上发挥重要作用。此外通过研究秀丽隐杆线虫的减缓衰老和延长寿命的机制,有望将研究成果应用于其他动物,对治疗人体疾病和延长人类的自身寿命起到关键性作用。因此,秀丽隐杆线虫的基础研究就显得尤为重要。综上所述,本文所研究的秀丽隐杆线虫的冷冻保存方法的目的是为以后关于秀丽隐杆线虫的研究的各领域起到基础性作用。为了研究最适合秀丽隐杆线虫的冷冻保护液,本试验使用了甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、葡萄糖(Glucose)、白蛋白五种冷冻保护液进行对比试验;为了探究不同温度下冷冻保存秀丽隐杆线虫的存活率,本试验采用-80℃和-20℃两种温度分别保存;为了探究秀丽隐杆线虫各个时期哪个时期的虫体更适合冷冻保存,本试验采用在NGM平板上涂不同量大肠杆菌OP50的方法来控制虫体发育,将虫体分为两组,一组含有大量Dauer期幼虫的虫体,另一组含有L1期幼虫、L2期幼虫、L3期幼虫、L4期幼虫及成虫;为了使试验更加具有参考价值和实用性,本试验分三个批次进行,分别冻存1个月,3个月,6个月。研究结果表明:冻存一个月,使用甘油,二甲基亚砜,乙二醇为冷冻保护液在-80℃条件下,含有大量Dauer期幼虫的虫体和含有L1期幼虫、L2期幼虫、L3期幼虫、L4期幼虫及成虫的虫体均可大量存活;冻存三个月,含有大量Dauer期幼虫冷冻保存的存活率比含有L1期幼虫、L2期幼虫、L3期幼虫、L4期幼虫及成虫冷冻保存的存活率更高,使用含有10%甘油的PBS液和含有10%二甲基亚砜的PBS液在-80℃的条件下虫体存活率均可达60%以上;冻存六个月,含有大量Dauer期幼虫冷冻保存的存活率比含有L1期幼虫、L2期幼虫、L3期幼虫、L4期幼虫及成虫冷冻保存的存活率更高,使用含10%的二甲基亚砜的PBS液在-80℃的条件下冻存效果最好,含有大量Dauer期幼虫冷冻保存的存活率可达65%。研究结果揭示,长期保存秀丽隐杆线虫最有效的方法是使用含10%的二甲基亚砜的PBS液在-80℃的条件下冻存,该项试验为以后深入研究秀丽隐杆线虫的各项试验打下基础。

【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016

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