甘薯种质资源圃脱毒试管苗保存技术规程.docx

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甘薯种质资源圃脱毒试管苗保存技术规程

1范围

本文件规定了甘薯种质资源圃脱毒试管苗保存的程序和技术要求。

本文件适用于甘薯种质资源圃甘薯种质资源的安全保存，其他地区甘薯种质资源圃资源保存可参考执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

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3术语和定义

3.1下列术语和定义适用于本文件。

试管苗保存invitropreservation

3.2采用组织培养技术，在试管中保持无性繁殖的作物种质材料。

组织培养tissueculture

在无菌和人工控制条件下，对生物的原生质体、细胞、组织和器官进行离体培养，并控制其生长发育的技术过程。

3.3

继代培养sub-culture

3.4把原始培养物的一部分组织或器官无菌转移到新的培养基上，重新培养形成新的一代组织或植株。

脱毒试管苗virus-freetubeseedlings

经过严格病毒检测确认不含病毒，且经过株系评选而中选的优良试管苗以及用它离体快繁或防好虫条件下速繁后得到的甘薯苗。

3.5

茎尖组培苗meristem-tipseedlingcultivation

由甘薯茎尖分生组织培养诱导而成的再生小苗。

3.6复份保存duplicatestorage

将同一份种质分别在不同保存设施中进行备份保存，以避免因战争或自然灾害可能给种质资源造

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成的毁灭性损失。

4种质材料获得

4.1获得途径

收集、征集、引进的种质、资源圃内需复份保存的种质。

4.2材料要求

4.2.1收集获得的种质材料应是健壮、健康的母体植株或块根。

4.2.2在野外采集时，可将相关器官组织直接收集带回，或是经表面消毒后，接种到加有杀真菌剂和抗菌素的培养基上再带回。

4.2.3在获得种质材料时应同时登记种质的基本资料信息。4.3必要信息

名称、原产地、种质类型、材料类型（块根、幼苗）、数量、状态、原单位编号、采集号。

5种质材料预处理

5.1预处理步骤

把植株、块根等种质材料表面冲洗干净，放在比较干净的环境中发芽，然后进行温室种植或田间种植成苗，以便获得较多的外植体材料。

5.2取材

取材时要注意选择表现该种质典型特性，且生长健壮，无明显病毒性、真菌性、细菌性病害症状的植株或其健康块根等作为试材。

6茎尖培养与增殖

6.1外植体消毒

按以下方法进行：

a)选取生长健壮植株，自顶端剪取约3厘米的苗头，除去叶柄，用约2%的洗衣粉水泡洗10分钟，自来水冲洗5分钟，除去表面携带的污渍；

b)70%酒精消毒30秒，杀死表层细菌，无菌水冲洗1次；

c)0.1%升汞消毒6分钟，进一步杀死外质体携带的微生物，无菌水泡洗4次，除去升汞。

6.2茎尖剥取

在12X解剖镜下用解剖针逐渐剥去外面的叶原基，直到露出白色的生长点，用解剖针将生长点取下，剥取的生长点大小约0.5毫米。

6.3培养与增殖

将剥取的生长点放入分化培养基中28℃光照培养，光照周期为12小时/24小时。待分化成苗后转入MS培养基中，28℃光照培养光照周期为12小时/24小时。

7病毒检测

将再生苗按株系进行扩繁，取其中一部分进行病毒检测，筛选出表现阴性的脱毒苗，以备用于种质无毒化保存和种质典型性鉴定。甘薯脱毒苗病毒检测方法按NY/T402-2000脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程种的方法进行。

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8扩繁

8.1典型性鉴定

脱毒苗扩繁前，首先进行种质典型性鉴定。采用形态标记、同工酶生化标记和分子标记技术相结合

的方法，鉴定结果未发生变异时，再进行扩大繁殖。

增殖

经过病毒检测呈阴性反应的脱毒植株且经鉴定未发生变异后，用单节切段的方法，转接到MS或含有多种附加物的固体培养基的试管内进行增

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