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蚕豆赤斑病病原菌的鉴定及抗性资源筛选

来源：花匠小妙招时间：2026-04-16 04:07

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蚕豆赤斑病病原菌的鉴定及抗性资源筛选

作　者: 黄燕
导　师: 东方阳; 朱振东
学　校: 河北科技师范学院
专　业: 作物遗传育种
关键词: 蚕豆赤斑病葡萄孢鉴定遗传多样性抗性筛选
分类号: S436.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 42次
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内容摘要

蚕豆赤斑病（broad bean chocolate spot）是由葡萄孢属真菌（Botrytis spp.）引起的蚕豆生产中最重要的病害之一。主要由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、蚕豆葡萄孢（Botrytis fabae）、拟蚕豆葡萄孢（Botrytis fabiopsis）三种病原菌引起。在我国乃至世界地区均有发生，气候适宜时，病害发生相当严重。本研究通过形态学观察和分子生物学技术，对采自甘肃、青海、江苏、安徽、四川、湖北、河北、重庆8个省市的蚕豆病样进行分离鉴定并做产孢实验及遗传多样性分析，另外对161份蚕豆品种进行抗性资源的筛选，具体结果如下：1.2010～2011年间对8个省市采集的赤斑病标样进行单孢分离，通过形态学观察及分子生物学技术将其鉴定为3种病原菌分离物。共鉴定出314个分离物，其中灰葡萄孢分离物110个，蚕豆葡萄孢分离物84个，拟蚕豆葡萄孢分离物120个。对314个葡萄孢分离物做致病力测定，所有分离物对蚕豆品种均致病，3d后产生不同大小病斑。2.本研究采用形态学观察、Bc-hch基因序列扩增、转座子检测、酶切多态性分析技术、简单重复序列扩增多态性（SSR）技术，对8个省市的110个灰葡萄孢分离物多样性进行了分析，结果110个灰葡萄孢分离物在形态上分为菌丝、菌核、分生孢子三种类型，转座子组成方面分为vacuums和transposa两种类型，transposa型为主。在相似系数0.702时，110个分离物被划分为3个类群，说明分组结果与地理区域来源有关。3.选取灰葡萄孢、蚕豆葡萄孢、拟蚕豆葡萄孢代表分离物各50个，对其做遗传多样性分析，利用筛选的10个ISSR引物共扩增出123条扩增清晰且重复性高的条带，基因多样性指数为0.3777～0.5632，Shannon’s多样性指数为0.5740～0.9110，说明等位基因数与多样性指数的增大与各群体内样本数量增加有关。4.选取灰葡萄孢、蚕豆葡萄孢、拟蚕豆葡萄孢代表分离物做产孢实验，摸索出葡萄孢产孢的新方法，161份蚕豆品种中鉴定出31份抗性品种。

全文目录

中文摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
英文缩写英文全称中文全称  7-13
第一章绪论  13-22
  1.1 蚕豆简介  13-14
    1.1.1 蚕豆的分类地位及分布  13
    1.1.2 蚕豆的生长习性  13-14
    1.1.3 蚕豆生产、用途及其影响因素  14
  1.2 蚕豆赤斑病的发生特点及流行规律  14-15
  1.3 蚕豆赤斑病病原菌  15
  1.4 蚕豆赤斑病的侵染症状  15-16
  1.5 蚕豆赤斑病的发病因子及防治措施  16
  1.6 抗性资源筛选  16-17
    1.6.1 分生孢子接种法  17
    1.6.2 高压喷雾接种法  17
  1.7 SSR 标记在植物病原菌中的应用  17-19
    1.7.1 植物病原菌种群变异及进化研究  17-18
    1.7.2 用于病原菌的鉴定、交配型和种内型的区分  18
    1.7.3 SSR 标记应用的前景  18-19
  1.8 植物病原菌遗传多样性研究  19-21
    1.8.1 遗传多样性  19
    1.8.2 遗传多样性的检测方法  19-20
    1.8.3 遗传多样性研究意义  20-21
  1.9 本研究的目的及内容  21-22
    1.9.1 研究目的及意义  21
    1.9.2 研究内容  21-22
第二章蚕豆赤斑病病原菌的鉴定  22-39
  2.1 材料  22
  2.2 方法  22-30
    2.2.1 菌株的采集、分离、鉴定与保存  22-26
      2.2.2.1 菌株的采集  22-23
      2.2.2.2 菌株的分离与鉴定  23
      2.2.2.3 分离物的保存  23-26
    2.2.2 菌落形态观察  26
    2.2.3 菌丝 DNA 的提取  26-27
    2.2.4 PCR 扩增和检测  27-28
    2.2.5 葡萄孢分离物产孢实验  28
    2.2.6 致病力测定  28-29
      2.2.6.1 接种体的制备  28-29
      2.2.6.2 蚕豆植株培养  29
      2.2.6.3 接种  29
    2.2.7 葡萄孢分离物克隆和测序  29-30
  2.3 结果与分析  30-38
    2.3.1 葡萄孢分离物培养特性  30-32
    2.3.2 基因组 DNA 的扩增及检测结果  32-33
    2.3.3 葡萄孢分离物产孢结果  33-35
    2.3.4 致病力测定结果  35-37
      2.3.4.1 葡萄孢分离物的致病力类型  35-37
    2.3.5 不同省份葡萄孢分离物的种类及数量  37
    2.3.6 三种葡萄孢分离物测序结果  37-38
  2.4 讨论  38-39
第三章灰葡萄孢蚕豆分离物的遗传多样性  39-53
  3.1 材料  39
  3.2 方法  39-44
    3.2.1 菌株的采集、分离、鉴定与保存  39-43
    3.2.2 菌落培养特性观察  43
    3.2.3 基因组 DNA 的提取  43
    3.2.4 Flipper 和 Boty 转座子检测  43
    3.2.5 Bc-hch 序列扩增和酶切  43-44
    3.2.6 SSR 分析  44
    3.2.7 数据统计与分析  44
  3.3 结果与分析  44-50
    3.3.1 菌落培养特性  44-45
    3.3.2 转座子基因型  45-46
    3.3.3 Bc-hch 序列特征  46-47
    3.3.4 灰葡萄孢遗传多样性  47-49
    3.3.5 不同地理来源灰葡萄孢的遗传关系  49-50
    3.3.6 SSR 标记的灰葡萄孢遗传多样性分析  50
  3.4 讨论  50-53
第四章利用 ISSR 技术分析蚕豆赤斑病病原菌分离物群体遗传多样性  53-65
  4.1 材料  53
  4.2 方法  53-59
    4.2.1 菌株的采集、分离、鉴定与保存  53-58
    4.2.2 基因组 DNA 的提取  58
    4.2.3 ISSR 引物筛选与 PCR 扩增  58-59
    4.2.4 数据统计与分析  59
  4.3 结果与分析  59-61
    4.3.1 遗传变异分析  59-60
    4.3.2 不同地理来源葡萄孢菌株的遗传相似性及遗传距离  60-61
    4.3.3 基于 ISSR 标记的葡萄孢菌株遗传多样性分析  61
  4.4 讨论  61-65
第五章蚕豆赤斑病抗性资源筛选  65-71
  5.1 材料  65
    5.1.1 供试分离物及蚕豆资源  65
  5.2 方法  65-66
    5.2.1 孢子悬浮液接种方法  65-66
      5.2.1.1 13 份蚕豆材料接种方法  65-66
      5.2.1.2 150 份蚕豆材料接种方法  66
    5.2.2 高压喷雾接种方法  66
      5.2.2.1 13 份蚕豆材料接种方法  66
      5.2.2.2 150 份蚕豆材料接种方法  66
  5.3 结果与分析  66-71
    5.3.1 13 份蚕豆材料接种结果  66-68
      5.3.1.1 孢子悬浮液接种结果  66-67
      5.3.1.2 高压喷雾接种结果  67-68
    5.3.2 150 份蚕豆材料接种结果  68-71
      5.3.2.1 高压喷雾接种结果  68-69
      5.3.2.2 离体叶片种结果  69-71
第六章全文结论  71-72
参考文献  72-80
发表论文及科研情况  80-81
附录  81-95
致谢  95-96

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 蔬菜病虫害 > 豆荚类病虫害
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