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叶子花内生细菌的多样性分析及bs11的抑菌活性研究

来源：花匠小妙招时间：2024-10-14 13:20

山东农业大学
硕士学位论文
叶子花内生细菌的多样性分析及BS11的抑菌活性的研究
姓名:任红梅
申请学位级别:硕士
专业:植物病理
指导教师:刘振宇
2011-06-15
山东农业大学硕士学位论文
中文摘要
植物内生细菌是定殖在健康植物的各种组织和器官中,与植物之间形成互惠共存、
相互制约的和谐联合关系的一类微生物,是植物病害生物防治上一类极具应用潜能的资
源菌。近几年,人们探索了大蒜,甘草,红树等多种具有特殊药用价值或特殊生态环境
的植物的内生细菌的多样性及防病抗病效果,叶子花作为一种有着优良的耐高温、抗旱
和抗污染特性的园林观赏植物,其内生细菌的研究却鲜见报道。基于这点,我们对本实
验进行了设计,通过分离叶子花内生细菌并其多样性进行了分析;以杨树腐烂病菌为指
示菌利用平板对峙的方法筛选出具有良好抑菌活性的内生菌株 BS11,对 BS11 菌株进行
了系统的分类学鉴定;对该拮抗菌的抗病、促生等活性进行了研究。具体结果如下:
1 用传统的分离培养的方法对叶子花植物不同组织进行多次内生细菌的分离,并对叶子
花内生细菌的分离方法进行了优化。

叶子花内生细菌的分离采用改进后的分离方法,
具体如下:1)选材:选择多年生较为健壮的艳红叶子花为材料。2)取材:在叶子花枝
条的中间部位,用无菌刀切取茎段和叶片,用铁铲挖 10cm 深切取叶子花的根段,摘取
成熟的叶子花的叶,无菌条件下带回实验室。3)表面消毒:将组织块用无菌水表面冲
洗,晾干,用十分之一天平分别称取叶子花的根、茎、叶组织各 1g,剪成小块,然后
依次在 75%乙醇中浸泡 30s、1% 的升汞中浸泡 2min,最后用无菌水漂洗 3 次。
2 采用 Shannon-Wiener 多样性指数(H)、丰度(D)、均匀度(J)和 CFU4 个指标
对分离结果进行叶子花内生细菌的多样性分析。结果显示:不同月份所测得的 CFU 值
存在差异, 6 月份和 9 月份叶子花内生细菌的菌落数相对较多,到 9 月份达到最大值
为 ,而 3 月份和 12 月份菌落个数相对较少,分别只有和。从其他三
个指标 H、D、J 来看,叶子花内生细菌的多样性、丰度和均匀度在 6 月份和 9 月份同 3
月份和 12 月份相比均较高;叶子花根中的多样性指数(H)的值、丰度指数(D)值和
CFU 值均高于其他两个组织。
3 以杨树腐烂病菌为指示菌,用对峙培养的方法对分离到的 11 株叶子花内生细菌
进行筛选。结果发现:BS11 菌株对杨树腐烂病菌的抑制率达到了 71%。用其他病原真
菌以同样的方法对 BS11 菌株的广谱抑菌性进行了检测,发现该菌株对合欢枯萎病菌、
杨树水泡溃疡病菌、栀子花炭疽病菌、桑炭疽病菌、苹果轮纹病菌等的生长也有很好的
抑制效果。
4 对 BS11 菌株进行了系统的分类学的鉴定。结果表明:将 16SrDNA 测序结果同
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叶子花内生细菌的多样性分析及 BS11 的抑菌活性研究
其他序列一起,用软件的 NJ 法建树,发现 BS11 和 Burkholderia anthina 聚
类在一起。BS11 菌株在 NA 培养基上菌落呈浅黄色,表面光滑,中央突起,边缘整齐;
在 PDA 培养基上菌落呈白色,边缘波状,中央平整;革兰氏染色阴性、杆状、无芽孢;
生理生化中氧化酶延迟反应。BS11 的这些特征符合 Burkholderia 的特证。
5 用不同浓度梯度的 BS11 菌株发酵液对叶子花进行促生性检测。结果显示:稀释
10×的菌液处理过的叶子花根长同清水对照的差异达到显著水平;未经稀释的发酵液对
叶子花生根有抑制作用;稀释 50×的发酵液对叶子花的生根没有明显的影响。
关键词:叶子花;内生细菌;拮抗菌;杨树腐烂病菌;伯克氏菌
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山东农业大学硕士学位论文
Abstract
Endophtic bacteria reside within the inner parts of plant hosts without causing disease
symptoms and can be isolated from surface-disinfested plants or extracted from internal
plangt reports indicated that endophytic bacteria exist in a variety of tissue
types within a broad range of plants. Many isolates showed benef