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一种铁皮石斛的快速繁殖方法

来源：花匠小妙招时间：2025-10-31 22:06

br>[0042] 3、将铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中，25°C，光照强度2500LUX，光照时间为12h/d下培养100天；在该培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +0. 5mg/LNAA+50g/L香蕉+25g/L蔗糖+6. 0g/L琼脂粉，pH5. 8。经过该阶段培养后，铁皮石斛幼苗生长为分化苗。
[0043]4、将铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上，25°C，光照强度2200Lux，光照时间12h/d的条件下培养100天。该培养基配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +1. 0mg/LNAA+100g/L 香蕉 +2. 0g/L 活性炭 +25g/L 鹿糖 +6. 0g/L 琼脂粉，pH5. 8。经过该阶段培养后，铁皮石斛分化苗生长为组培苗。
[0044] 5、经过上述培养阶段共计260天，即可得根系健壮、平均株高3 8. 2cm，平均直径兰0. 3cm以上的优质组培苗，经过上述三个阶段，每颗重约2g左右的铁皮石斛蒴果可生产优质铁皮石斛种苗5万株以上。
[0045] 实施例3
[0046] -种铁皮石斛的快速繁殖方法，具体步骤如下：
[0047] 1、将野外采集的20周未开裂成熟蒴果在自来水下冲洗干净，自然风干后，在超净工作台内用75%体积分数的乙醇水溶液浸泡45s，取出后用灭菌后的蒸馏水冲洗3次；再将蒴果在0. 1%质量分数的氯化汞水溶液中浸泡灭菌lOmin，取出后用灭菌蒸馏水冲洗6次，并不时搅动；最后用用灭菌后的滤纸吸干蒴果表面的水分，用灭菌后的解剖刀从蒴果中部取出种子。
[0048] 2、将取出的铁皮石斛种子均匀播撒于种子萌发培养基上，培养基配方为： MS+O. 5mg/LNAA+l. 5mg/L6-BA+50g/L 土豆 +25g/L 蔗糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8。在 20°C下，暗培养7天，7天后改变培养条件，在温度25°C，光照强度为2000LUX，光照时间为12h/d的条件下培养60天。经过该阶段培养后，铁皮石斛种子萌发成幼苗。
[0049] 3、将铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中，25 °C，光照强度2500LUX，光照时间为12h/d下培养80天；在该培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +1. 0mg/LNAA+75g/L香蕉+25g/L蔗糖+6. Og/L琼脂粉，pH5. 8。经过该阶段培养后，铁皮石斛幼苗生长为分化苗。
[0050] 4、将铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上，25°C，光照强度2200Lux，光照时间12h/d的条件下培养100天。该培养基配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物 +0. 5mg/LNAA+100g/L 香蕉 +2. Og/L 活性炭 +25g/L 鹿糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8。经过该阶段培养后，铁皮石斛分化苗生长为组培苗。
[0051] 5、经过上述培养阶段共计240天，即可得根系健壮、平均株高3 7. 9cm，平均直径兰0. 29cm以上的优质组培苗，经过上述三个阶段，每颗重约2g左右的铁皮石斛蒴果可生产优质铁皮石斛种苗5万株以上。
[0052] 实施例4
[0053] 1、将实施例1、2、3中所得优质铁皮石斛组培苗放置于70%遮阳率的玻璃温室中，炼苗10天，待组培瓶内铁皮石斛苗叶片完全展开，打开瓶盖，用镊子将组培苗连同培养基一同轻轻取出，放在干净托盘上，用手轻轻将苗和培养基分开，并放入干净的清水中洗涤，以彻底洗净根部和苗上的培养基，在整个过程中尽量不伤害组培苗的根、茎和叶子；
[0054] 2、洗净后，将组培苗组培苗的根部浸泡在800倍的80%的代森锰锌中消毒45秒，然后将组培苗根部浸泡于1000倍的生根水中2分钟，置于阴凉通风处晾干备用。
[0055] 3、并将从市场上购买的铁皮石斛种苗作为对照例，对照例平均株高7. 2cm，平均直径0. 25mm，按照上述方法洗净，根系消毒，晾干备用。
[0056] 4、将晾干的组培苗移栽到温室大棚内的驯化基质上，驯化基质为2~3cm松树皮和1~2cm的小碎石按照3 :1体积比混合而成，温室大棚的遮阳率为75%，种植密度为每丛 3株，间距为5cm左右。移栽后，浇足定根水，以后每天浇水一次，以保证基质的湿度在50~ 60%〇
[0057] 5、种植1个月后统计苗的成活率，种植两个月后统计苗的发芽率及生长势（见下表）
[0058]
【主权项】
1. 一种铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，它包括如下步骤： (1) 将铁皮石斛蒴果消毒灭菌后剖开，取出铁皮石斛蒴果种子； (2) 将步骤（1)中得到的铁皮石斛种子均匀播撒于种子萌发培养基上，20~25°C下暗培养6~8天后，正常培养60~75天，铁皮石斛种子萌发成铁皮石斛幼苗； (3) 将步骤（2)中得到的铁皮石斛幼苗接种到原球茎分化培养基中培养80~100天，得到铁皮石斛分化苗； (4) 将步骤（3)中得到的铁皮石斛分化苗转接到壮苗生根培养基上培养后90~100，得到铁皮石斛组培苗。2. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的铁皮石斛蒴果为15~20周的成熟未开裂蒴果。3. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（1)中，消毒灭菌的方法为：将铁皮石斛蒴果用水冲洗并干燥后，于70~75%体积分数的乙醇水溶液中浸泡45s，取出后用无菌水冲洗2~3次；再将蒴果放入0. 1 %质量分数的氯化汞水溶液中浸泡lOmin，取出后用无菌水冲洗4~6次；最后用灭菌后的滤纸吸干蒴果表面的水分。4. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（2)中，所述的种子萌发培养基的配方为：MS+0. 2-0. 5mg/L萘乙酸+0. 5-1. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +50-100g/L 土豆 +25g/L 蔗糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8 ~6. 0。5. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（2)中，所述的正常培养的条件为温度20~25°C，光照强度为2000~2500Lux，光照时间为10~12h/d。6. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（3)中，所述的原球茎分化培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物+0~1.0 mg/L萘乙酸 +50-100g/L 香蕉 +25g/L 蔗糖 +6. Og/L 琼脂粉，pH5. 8 ~6. 0。7. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（3)中，培养条件为温度20~25°C，光照强度为2000~2500Lux，光照时间为10~12h/d。8. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（4)中，所述的壮苗生根培养基的配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机物+0~1.0 mg/L萘乙酸 +50 ~100g/L 香蕉 +0? 5 ~2. 0g/L 活性炭 +25g/L 蔗糖 +6. 0g/L 琼脂粉，pH5. 8 ~6. 0。9. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，步骤（4)中，培养条件为温度为20~25°C，光照强度为2000~2200Lux，光照时间为10~12h/d。10. 根据权利要求4、6和8所述的铁皮石斛的快速繁殖方法，其特征在于，所述的MS培养基的配方为：大量元素：硝酸铵1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、二水合氯化钙440mg/L、七水合硫酸镁 370mg/L 和磷酸二氢钾 170mg/L ; 微量元素：四水合硫酸锰22. 3mg/L、七水合硫酸锌8. 6mg/L、六水合氯化钴0. 025mg/L、五水合硫酸铜〇. 〇25mg/L、碘化钾0. 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、七水合硫酸亚铁27. 8mg/L和乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L; 有机物：烟酸〇? 5mg/L、盐酸R比咳醇0? 5mg/L、盐酸硫胺素0? lmg/L、甘氨酸2mg/L和肌醇 100mg/L ; 所述的N6大量元素配方为：硝酸钾2830mg/L、硫酸铵463mg/L、二水合氯化钙166mg/ L、七水合硫酸镁185mg/L和磷酸二氢钾400mg/L。
【专利摘要】本发明公开了一种铁皮石斛的快速繁殖方法，它包括种子蒴果的表面灭菌，无菌种子播撒于萌发培养基，种子萌发的幼苗接种于原球茎分化培养基，分化苗转接入壮苗生根培养基，最后得到铁皮石斛的组培苗。与现有技术相比，本发明利用铁皮石斛未开裂的蒴果，可以有效的避免其内生菌对组织培养带来的一些干扰，降低污染率；利用种子萌发、继代培养和壮苗生根三代培养法，大大缩短了育苗周期，降低了生产成本，且所培养的组培苗植株健壮，根系发达，成活率高。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105052753
【申请号】CN201510631445
【发明人】席刚俊, 徐超, 史俊, 汪善锋, 杨鹤同, 郑凯, 贾君, 赵桂华
【申请人】江苏农林职业技术学院
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年9月29日