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具有抗氧化活性和α

来源：花匠小妙招时间：2025-10-27 14:37

具有抗氧化活性和
α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明涉及一种新化合物，具体涉及从蓝布正提取分离得到的具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物新化合物，属于医药技术领域。

背景技术：

2.蓝布正为蔷薇科水杨梅属植物柔毛路边青geum japonicum thunb.var.chinense bolle及路边青geum aleppicum jacq.的干燥全草，又名追风七、水杨梅等。其具有益气健脾，补血养阴，润肺化痰之功效。临床上主要用于气血不足，虚痨咳嗽，脾虚带下。蓝布正中鞣质类、三萜类、黄酮类及木脂素类是其主要化学成分，其中鞣质类成分含量较高。本发明对蓝布正中的有效成分深入研究，分离纯化得到新的具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体成分。

技术实现要素：

3.发明目的：本发明的目的是对蓝布正中的有效成分进行深入研究，分离纯化得到新的具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物新化合物。本发明另外一个目的是提供该鞣花鞣质二聚体化合物的制备方法。
4.技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
5.一种具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物(geumin a)，其结构式如下：
[0006][0007]
具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0008]
(1)提取：
[0009]
取蓝布正药材用甲醇浸泡提取，得甲醇提取液，减压浓缩干燥，得到浸膏，取浸膏加水超声溶解、过滤，取上清液；
[0010]
(2)分离：
[0011]
取步骤(1)的上清液经hp
‑
20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用水、70％乙醇和
95％乙醇梯度洗脱，得到馏分lbzsqh70；
[0012]
取馏分lbzsqh70经正相中压柱色谱分离，二氯甲烷
‑
甲醇体系梯度洗脱，收集馏分lbzsqh70
‑
1～lbzsqh70
‑
12，将lbzsqh70
‑
1～3合并得到lbzsqh701；
[0013]
取lbzsqh701经sephadex lh
‑
20分离，甲醇体系洗脱，得到馏分lbzsqh701s11；
[0014]
(3)纯化：
[0015]
取lbzsqh701s11经pre
‑
hplc分离，得到馏分lbzsqh701s11p4；lbzsqh701s11p4再经semi
‑
pre
‑
hplc纯化，得到鞣花鞣质二聚体化合物。
[0016]
作为优选方案，以上所述的具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的鞣花鞣质二聚体化合物的制备方法，其包括如下步骤：
[0017]
(1)提取：
[0018]
取蓝布正药材加甲醇浸泡提取，蓝布正药材和甲醇的质量体积比为1:7.5，每次提取时间2d，共提取3次，合并提取液，在45℃减压浓缩干燥，得到蓝布正浸膏，将蓝布正浸膏加水超声溶解后过滤，得到上清液；
[0019]
(2)分离：
[0020]
取步骤(1)的上清液经hp
‑
20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用水、70％乙醇和95％乙醇梯度洗脱，得到馏分lbzsqh70；
[0021]
取馏分lbzsqh70经正相中压柱色谱分离，用体积比为100:0
‑
0:100的二氯甲烷
‑
甲醇体系梯度洗脱，收集馏分lbzsqh70
‑
1～lbzsqh70
‑
12，将lbzsqh70
‑
1～3合并得到lbzsqh701；
[0022]
取馏分lbzsqh701经sephadex lh
‑
20分离，甲醇体系洗脱，得到馏分lbzsqh701s1 1；
[0023]
(3)纯化：
[0024]
取步骤(2)的lbzsqh701s11经pre
‑
hplc分离，流动相a相为h2o，b相为meoh，得到馏分lbzsqh701s11p4；取馏分lbzsqh701s11p4经semi
‑
pre
‑
hplc纯化，流动相a相为：含0.1％三氟乙酸的h2o，b相为乙腈，得鞣花鞣质二聚体化合物。
[0025]
本发明采用dpph清除试验和α
‑
葡萄糖苷酶抑制试验测定分离得到的新的鞣花鞣质二聚体化合物，显示出较强的体外抗氧化性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，可开发为抗氧化剂以及α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂，用于治疗糖尿病。
[0026]
本发明可将化合物geumin a和药学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂等剂型的药物。
[0027]
有益效果：本发明提供的具有抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的化合物和现有技术相比具有以下优点：
[0028]
本发明通过对蓝布正化学成分进行系统深入研究，经过波谱和质谱数据分析表明从蓝布正全草中分离得到1个新的鞣花鞣质二聚体化合物(geumin a)。且经过体外dpph清除试验和α
‑
葡萄糖苷酶抑制试验研究表明，本发明提供的鞣花鞣质二聚体化合物具有较强的抗氧化活性以及α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，可开发成新药。
附图说明
[0029]
图1为鞣花鞣质二聚体化合物的结构示意图。
[0030]
图2为鞣花鞣质二聚体化合物的核磁共振碳谱
13
c
‑
nmr图。
[0031]
图3为鞣花鞣质二聚体化合物的核磁共振氢谱1h
‑
nmr图
具体实施方式
[0032]
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0033]
实施例1
[0034]
鞣花鞣质二聚体化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0035]
(1)提取：
[0036]
取20kg蓝布正药材用甲醇浸泡提取，蓝布正药材和甲醇质量体积比为1:7.5，每次提取时间2d，共提取3次。45℃减压浓缩干燥，得到蓝布正浸膏(lbz)重量约900g。将蓝布正浸膏用3.0l水超声溶解后过滤，得到上清液(lbzsq)约450g。
[0037]
(2)分离：
[0038]
lbzsq溶液经hp
‑
20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用水、70％乙醇和95％乙醇梯度洗脱，得到馏分lbzsqh70(94.5g)。
[0039]
馏分lbzsqh70经正相中压柱色谱分离，二氯甲烷
‑
甲醇体系梯度洗脱(体积比为100:0
‑
0:100)，收集馏分lbzsqh70
‑
1～lbzsqh70
‑
12，将lbzsqh70
‑
1～3合并得到lbzsqh701(68.0g)。
[0040]
lbzsqh701经sephadex lh
‑
20分离，甲醇体系洗脱，得到馏分lbzsqh701s11(7.1g)。
[0041]
(3)纯化：
[0042]
lbzsqh701s11经pre
‑
hplc(a相：h2o，b相：meoh)分离，得到馏分lbzsqh701s11p4。lbzsqh701s11p4经semi
‑
pre
‑
hplc(a相：h2o+0.1％tfa，b相：acn)纯化，得到化合物geumin a(31mg，纯度94.16％)。
[0043]
化合物geumin a结构解析为：白色粉末。高分辨质谱tof
‑
ms给出分子量m/z:1267.1563[m
‑
h]
‑
，推测其分子式为c
54
h
44
o
36
。
[0044]
通过对图2的
13
c
‑
nmr，图3的1h
‑
nmr和hsqc，cosy和hmbc谱的分析对化合物中的碳、氢信号进行归属。根据δ
h
6.77(1h,s)和δ
h
6.58(1h,s)2个氢信号推测存在1个六羟基联苯二甲酰基(hhdp)，在hmbc谱中δ
h
6.77与δ
c
167.8之间，δ
h
6.58与δ
c
168.0之间的氢碳远程相关证明上述推测的正确性；δ
h
6.27(1h,d,j＝4.0hz,h
‑
1)是a糖的端基氢信号，在1h
‑1hcosy谱中可以观测到δ
h
6.27(h
‑
1)与δ
h
3.80(h
‑
2)之间，δ
h
3.90(h
‑
3)与δ
h
3.80(h
‑
2)、δ
h
4.79(h
‑
4)之间，δ
h
4.15(h
‑
5)与δ
h
4.79(h
‑
4)、δ
h
5.02(h
‑
6)之间的氢氢相关信号，证明了a糖是吡喃糖；同时，由hmbc谱中δ
h
4.79(h
‑
4)与δ
c
167.8之间，δ
h
3.56,5.02(h2‑
6)与δ
c
168.0之间的氢碳远程相关信号，得到如下结构片段a。
[0045][0046]1h
‑
nmr(acetone
‑
d6,400mhz)中，δ
h
7.26(1h,s)和δ
h
7.23,6.81(1h each,d,j＝1.6hz)是脱氢二没食子酰基(dhdg；结构片段b)的特征氢信号，而hmbc谱中δ
h
7.23与δ
c
164.5、δ
c
147.4、δ
c
119.3之间，δ
h
6.81与δ
c
164.5、δ
c
146.0、δ
c
139.7、δ
c
119.3之间，δ
h
7.26与δ
c
163.2、δ
c
142.8、δ
c
140.2、δ
c
140.0、δ
c
114.3之间的氢碳远程相关信号进一步验证了dhdg的存在。
[0047][0048]1h
‑
nmr、
13
c
‑
nmr中，δ
h
7.05(2h,s)和δ
h
6.96(2h,s)以及δ
c
165.8和δ
c
165.2的信号推测结构中存在两个没食子酰基(g)，通过hmbc谱中δ
h
7.05与δ
c
165.8、δ
c
145.3、δ
c
138.4、δ
c
120.7之间，δ
h
6.96与δ
c
165.2、δ
c
145.4、δ
c
138.7、δ
c
120.0之间的氢碳远程相关信号对上述推测进一步验证；δ
h
6.00(1h,d,j＝8.4hz,h
‑
1)是b糖的端基氢信号，且在1h
‑1hcosy谱中可以观测到δ
h
5.32(h
‑
2')与δ
h
6.00(h
‑
1')、δ
h
5.55(h
‑
3')之间，δ
h
3.94(h
‑
4')与δ
h
5.55(h
‑
3')、δ
h
3.71(h
‑
5')之间，δ
h
3.74,3.85(h2‑
6')与δ
h
3.71(h
‑
1')之间的氢氢相关信号，证明了b亦是吡喃糖；同时，由hmbc谱中δ
h
5.32(h
‑
2')与δ
c
165.2之间，δ
h
5.55(h
‑
3')与δ
c
165.8之间的氢碳远程相关信号，得到如下结构片段c。
[0049][0050]
在hmbc谱中，可以观测到δ
h
6.00与δ
c
164.5之间，δ
h
6.27与δ
c
163.2之间的氢碳远程相关信号，将片段a和b、c有机的结合在一起，得到化合物geumin a，结构式如图1。
[0051]
表1.geumin a的1h和
13
c
‑
nmr数据
[0052]
[0053]
[0054][0055]
a
：数据之间可能互换 b
：数据之间可能互换。
[0056][0057]
实施例2体外试验
[0058]
1、实验材料
[0059]
dpph购自笛医生物科技有限公司；dmso购自科密欧化学试剂有限公司；阿卡波糖购自上海源叶生物科技有限公司；维生素c(vc，分析纯)、无水乙醇、铁氰化钾购自天津市天力化学试剂有限公司；α
‑
葡萄糖苷酶、对硝基苯酚α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖苷购自sigma公司。
[0060]
2、实验方法
[0061]
2.1dpph清除试验
[0062]
用无水乙醇配制0.3mmol/l dpph溶液，每种化合物配制成不同浓度的dmso(1、5、10、20、40、60、80、100μg/ml)。取100μl每种化合物的dmso和100μl dpph乙醇溶液进行混合，静置在黑暗中30min。以96孔板为反应载体，使用酶标仪在517nm测定吸光度，各组实验均重复测定三次，清除率(％)＝[(a517对照
‑
a517样品)/a517对照]
×
100，使用vc作为阳性对照，计算ic50。
[0063]
2.2α
‑
葡萄糖苷酶抑制试验
[0064]
向96孔板中加入25μl不同化合物溶液(终浓度为1、5、10、20、40、60μg/ml)、25μl、0.5u/mlα
‑
葡萄糖苷酶溶液(用0.1mol/l、ph6.8磷酸盐缓冲液配制)、175μl(0.1m、ph6.8)磷酸盐缓冲液室温静置反应10min。加入25μl、23.2mm对硝基苯酚α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖苷(用0.1mol/l、ph6.8磷酸盐缓冲液配制)，充分混匀后于37℃反应15min。于405nm波长处测定od值，同时设定相同体系下的样品背景对照组(不加酶)、空白对照组(不加样品)。α
‑
葡萄糖苷酶抑制率按公式计算，并计算ic50。α
‑
葡萄糖苷酶抑制率/％＝[od空白
‑
(od样品
‑
od背景)]/od空白
×
100％，od空白为空白对照组吸光度值，od样品为样品或阿卡波糖吸光度值，od背景为样品背景对照组吸光度值。
[0065]
3、实验结果
[0066]
本发明采用上述三个实验检测geumin a的抗氧化活性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，在抗氧化实验中选取vc作为阳性对照，α
‑
葡萄糖苷酶抑制实验选择阿卡波糖作为阳性对照。结果显示，geumin a比阳性药具有更强的抗氧化力和α
‑
葡萄糖苷酶抑制能力。实验结果如下表2所示。
[0067]
表2.geumin a的活性实验ic50值
[0068]
化合物dpph清除实验α
‑
葡萄糖苷酶抑制试验geumin a3.782μg/ml4.406μg/mlv
c
24.546μg/ml
‑
阿卡波糖
‑
400μg/ml
[0069]
。
[0070]
以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。